全自动生化分析仪检测系统精密度和准确度性能验证

周 龙 谭玉洁*

（1 重庆三峡中心医院检验科，重庆 万州 404000；2 贵州医科大学附属医院中心实验室，贵州 贵阳 550001；3 贵州医科大学附属白云医院检验科，贵州 贵阳 550014）

检验仪器和项目的性能评价备受检验医学界关注[1]。检测系统的分析性能验证是临床检验质量管理和实验室认可的重要内容之一。我国临床实验室管理办法和ISO15189：2012[2-3]均对性能验证做了相应的规定和要求。为提高实验室质量管理目标和筹备ISO15189实验室认可，本文参照美国临床和实验室标准协会（Clinical And Laboratory Standards Institute，CLSI）颁布的标准化文件[4-5]及其他文献方法与要求[6-9]，对罗氏cobas 8000全自动生化分析仪部分检测项目的准确度、精密度性能指标进行验证和评价。验证的检测项目包括总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、三酰甘油（TG）、胆固醇（CHOL）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）和血糖（GLU）共10项。

1 资料与方法

1.1 一般资料：实验用质控品、校准品均来自德国罗氏公司原装进口，且与检测仪器、试剂相配套。实验用样本来自卫生部临检中心2016年9月配发的5个水平的室间质量评价（External Quality Assessment，EQA）干粉样品。以上实验用品均-20 ℃保存。

1.2 仪器与试剂：仪器为罗氏cobas 8000全自动生化分析仪，仪器经专业技术工程师安装、调试、校准后，各项指标正常，确定正常工作。试剂为罗氏公司配套的试剂、校准品和质控品，且都在有效期内，同一批次的试剂、校准品和质控品均足量。

1.3 方法：按照本实验室的仪器和项目标准操作程序文件，对仪器定期进行维护保养、校准和质量控制。整个实验过程均有常规质量控制并在控，严格按照仪器及试剂说明检测标本，同时在检测过程中监测标本结果，以确保整个分析过程中仪器处于在控的良好状态。

1.3.1 精密度验证：参考CLSI指南文件EP15-A2要求[4]。批内精密度验证[10]：将已准备好的足量的PCCC1、PCCC2两个浓度的质控品各分成20份，随机插入患者样本中，连续测定待验证的10个项目，2 h内完成，分别计算其均值（）、标准差（SD）和变异系数（CV），评价批内精密度；批间精密度验证[10]：将已准备好的足量的PCCC1、PCCC2质控品各分装成20份，-20 ℃保存。每天各取1份，待标本完全溶解平衡至室温后混匀，进行上机检测，结果存档。待20天检测完，分别计算其x-、SD和CV，评价批间精密度。对于计算的x-、SD和CV，以我国卫生行业标准制定的质量指标（允许总误差 TEa≤15%）为依据[11]，批内CV≤1/4TEa，批间CV≤1/3TEa，同时比对厂家声称的精密度要求，以验证精密度性。

1.3.2 准确度验证：EP15-A3 建议临床实验室用定值参考物质进行正确度验证[12]，采用卫生部2016年9月发放的第三批5个水平的室间质控品进行检测，对待验证的10个项目进行测定，将测定值与卫生部临检中心给定的靶值进行比较[11]，结果以小于卫生部临检中心室间质量评价检验项目及可接受性能准则规定的允许偏差为合格。同时将实测值与靶值绘制散点图，得出相关方程进行数据分析。

1.4 统计学处理：采用Office 2010 Excel软件对数据进行处理和统计分析，进行t或χ2检验，P＜0.05差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 精密度：检测的批内精密度CV小于1/4TEa，批间精密度CV小于1/3TEa，符合《医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明》中对分析性能的要求，也符合厂家规定的精密度要求，见表1。

表1 精密度实验结果

2.2 准确度：卫生部2016年9月发放的第三批5个水平的EQA样品进行检测，结果显示准确度全部通过验证，成绩均为100%。用实测值与给定的靶值绘制散点图，进行相关性分析，得出相关方程，结果显示各检测项目的均有较好的相关性（R2＞0.99），见表2。

表2 准确度验证

3 讨 论

检验程序的分析性能常通过分析仪器、校准品和试剂形成的组合即检测系统而实现, 故检验程序的分析性能常可理解为检测系统的分析性能[13]。为确保检测系统的分析性能和检验结果的准确性，无论自建检测系统还是配套检测系统，在实验室出具检验结果前，均要验证厂家声明的各种性能指标。ISO15189实验室认可也要求申请实验室应对设备、检测系统或方法的主要分析性能进行验证，证实其能够达到临床检测所要求的标准[2-3]。本文对罗氏cobas 8000全自动生化分析仪检测系统进行精密度和准确度性能验证，为本实验室配套检测系统的方法学性能验证提供简单可行的方法和实验方案。

由于大多数检验报告只检测一次就发报告，故要求检验结果具有良好的重复性，即良好的精密度。没有良好的精密度，准确度无从谈起。精密度常用检测结果的CV值来评估，CV值越小则精密度越高，说明试剂或者仪器越稳定，重复性越好。评价精密度的方法有多种，包括Westgard推荐的简易方案[14]，也有2014年最新发布的经典方法即EP5-A3方案[4]。本实验室采用后者，检测的各个项目也达到了严格的行业标准：批内CV≤1/4TEa，批间CV≤1/3TEa。横向比较，不管是高浓度还是低浓度标本，其批内精密度均小于其批间精密度，这也与理论相符。通过精密度验证，表明该检测系统稳定，重复性好。在确认检测系统精密度符合要求的基础上，进行准确度验证实验。准确度验证方法包括：与参考方法比较、回收试验和应用参考物质。虽前两种是最好的验证方法，但由于其方法实验繁琐，成本高，数据处理有难度等缺点，仅适合有条件的实验机构、厂家或专业科研人员，故不适于大多数常规实验室。本实验室选用定值参考物质，即卫生部临检中心发放的EQA样品，此类EQA物质，其均值可作为有权威的赋值[15]，同时具有很强的操作性和实用性。根据EP15-A3要求对5个EQA样品进行检测，结果显示准确度全部通过验证，成绩均为100%。同时用实测值与给定靶值绘制散点图，得出相关方程，显示各检测项目均有较好的相关性（R2＞0.99），有理由相信该系列配套检测系统准确度均符合要求。

罗氏cobas 8000全自动生化分析仪作为一种最新的、最先进的生化分析仪，其自动化程度高、测试速度快、精确度好以及准确度高等优点，被广大实验室和科研单位所接受和认可，适合样本量大的大型实验室用于临床检测。罗氏cobas 8000检测系统有成熟的检测方法，配套的原装试剂、质控品和校准品，当然检测成本相对比较高。通过验证该检测系统的精密度和准确度性能指标与厂商规定的分析性能一致，符合质量目标要求，可用于临床检测。 本研究选用质控品和EQA样本，节省了一定的成本，选择的验证方案具有实用性和可操作性。通过验证，为本实验室的标准化和认可提供重要的实验数据和理论依据。

参考文献

[1] 丛玉隆,邓新立.实验室ISO15189认可对学科建设的几点启示[J].中华检验医学杂志,2007,30(2):128-131.

[2] ISO15189.Medical laboratories-Requirements for quality and competence[S].Geneva, Switzerland:International Organization for Standardizaion ,2012.

[3] 中国合格评审国家认可委员会.医学实验室质量和能力认可准则(ISO15189:2012, IDT)[S].2013-11-22.

[4] CLSI.Evaluation of precision of quantitative measurement procedures; approved guideline- third edition (EP5-A3) [S].2014.

[5] CLSI.EP15-A2.User verification of performance for precision and trueness; approved guideline second edition[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2005.

[6] 王治国.临床检验方法确认与性能验证[M].北京:人民卫生出版社,2009:153-159.

[7] Program M.Prospective payment system for federally qualified health centers,changes to contracting policies for rural health clinics,and changes to clinical laboratory improvement amendments of 1988 enforcement actions for proficiency testing referral[J].Fed Regist,2014,79(85):25435-25482.

[8] 杨有业,张秀明.临床检验方法学评价[M].北京:人民卫生出版社,2008:175-195.

[9] 中国合格评定国家认可委员会.医学实验室质量和能力认可准则在临床生物化学检验领域的应用说明[M].北京,CNAS-CL38,2012.

[10] 张秀明,黄宪章,曾方银,等.临床生化检验诊断学[M].北京:人民卫生出版社,2012:501-516.

[11] WS/T 403-2012.临床生物化学检验常规项目分析质量指标.中华人民共和国卫生部[S].2012-12-28.

[12] CLSI.User verification of precision and estimation of bias;approved guideline-third edition (EP15-A3)[S].2014.

[13] 张秀明,范勇利,温冬梅,等.临床化学自建检测系统性能确认的精密度与正确度及准确度的研究[J].中华检验医学杂志,2016,39(9):715-719.

[14] Westgard JO.Basic method validation.3rd ed[M].Madison, Wis:Westgard QC,2008:102-110.

[15] 尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].4版.北京:人民卫生出版社,2015:1016-1020.