活体采卵技术在牛高效快繁中的应用

佟桂芝 宋斌 王洪宝 黄红

摘要：牛活体采卵（OPU）是借助超声波或内窥镜观察，直接从活体母牛卵巢上抽取卵母细胞的技术，它与体外受精和胚胎移植（ET）等技术结合，可反复从有较高遗传价值良种母牛体内采集卵母细胞生产胚胎，即从高遗传价值良种母牛采集卵母细胞生产胚胎，进行胚胎移植具有生产成本低效率高的优势。

关键词：母牛；OPU；体外受精；胚胎移植

中图分类号：S823.3

文献标识码：B

文章编号：2095-9737（2018）01-0017-01

活体采卵技术是20世纪90年代发展起来的一项新型胚胎生产技术。1988年，Pieter首次报道了牛的B超活体采卵技术。卵泡资源的高效利用，获取种源明确的卵母细胞，结合体外受精，提供可用卵母细胞和胚胎。获得大量遗传系谱明确的胚胎，降低胚胎生产成本；充分挖掘繁殖潜力；引进品种的高效利用；可使用于出生三个月以上的犊牛、育成牛、成年牛、老龄牛，怀孕三个月以内的牛；超排不起作用的牛以及输卵管和子宫有疾病失去繁殖能力的牛；为胚胎T程的其他相关研究如核移植，转基因，性别控制等提供合适的研究材料。

1 牛活体采卵方法

1.1 内窥镜法

操作者将一手臀伸入直肠内→将套筒和穿刺棒消毒后送入阴道到穹窿上部→用力推动穿刺棒使套筒同时穿过穹窿进入腹腔→抽出穿刺棒送人探棒一直肠内的手将卵巢拉至套管前端→打开显示屏观察卵巢形态→搜寻到2～8 cm的卵泡后，推动采卵针刺入卵泡内将卵母细胞吸出收集在集卵管内→一显微镜下检出卵母细胞。

优点：直观、清晰地观察卵巢上的卵泡、黄体以及表面状态，可准确选择符合要求的卵泡进行采集，极少发生损伤卵巢实质与其他组织，回收率高等。

缺点：工作量大，对阴道损伤较大，重复采卵的时间间隔较长，操作前需作饥饿处理等。

1.2 超声波法

母牛作硬膜外麻醉→将→手臂伸入直肠内→将探棒涂布耦合剂送至阴道内前端→直肠内的手将卵巢拉至探头部位→打开B超仪观察卵巢形态→搜寻到2～8 mm的卵泡，将其放置采卵线上→开动抽吸泵，推动采卵针刺人卵泡内，将卵母细胞吸出。

优点：采卵率高，对卵巢损伤小，对供体牛的繁殖性能无影响，采卵间隔时间短等。

缺点：设备价格高，对操作者要求高。

2 影响牛OPU效果的主要因素

2.1 供体牛

除了患有卵巢疾病或妊娠3～4月龄以后的牛，几乎所有2月龄以上的母牛都可作为供体来使用。妊娠母牛也可作为OPU的供体母牛，且对妊娠无不良影响。

对于犊牛的活体采卵，一般预先激素处理，激素处理不仅能够提高卵泡数和卵母细胞数，而且能够提高卵母细胞的质量及后续胚胎的发育能力。

2.2 外源激素

用FSH预处理供体母牛不仅可以增加卵母细胞的回收率，而且能够提高卵母细胞的质量。用PMSG处理供体母牛，发现卵巢的卵泡变大，直径5—10 mm的中等卵泡较多，有利于采卵，且卵母细胞的回收率也提高。

2.3 采卵频率

每周采两次获取的卵母细胞数多于每周采1次，且卵母细胞的质量较高。采卵频率与激素的处理相关：激素处理每周采1次和无激素处理每周采2次，可采卵泡数无显著差异。

2.4 其他因素

除了受上述因素影响外，还受其他因素的影响，如供体牛的饲养管理、供体牛所处的发情周期、繁殖障碍（输卵管闭塞、子宫机能不全等）、季节与气候、真空泵的压力等。

采用人工授精：一头优质母牛每年只能生产一头牛犊；利用屠宰场卵巢：无法跟踪其遗传性能，系谱不明。利用超排技術：一头牛每年最多能生产20枚左右胚胎，年均产犊数（按50%的受孕率计算），一头优质母牛每年只能生产10头牛犊；利用OPU技术：同时运用良种母牛和公牛；一头牛每年能生产200枚以上胚胎，年均产犊数（按50%的受孕率计算），一头优质母牛每年只能生产100头牛犊；能够跟踪其遗传性能；现繁殖技术中效率最高。

3 应用前景

OPU和IVF - ET结合已经成为欧美和大洋洲等畜牧业发达国家扩大良种牛群的重要繁殖技术，已经用于商业化生产。OPU结合分离X、Y精子的性别控制技术可为大规模工厂化生产体外性控胚胎开辟新途径。OPU作为一项重要繁殖技术，对加速良种牛的繁育速度，优化牛群结构，为推动畜牧业及相关产业的快速发展将发挥重要作用。

种源是畜牧业发展的根基和命脉。当前我国畜牧生产中良种覆盖率仅35%左右，有近85%是从国外引进。畜禽种业正面临着国际跨国种业集团种源垄断和产品进入的双重压力。挖掘与利用动物种质资源、揭示繁育机理、创新育种方法、实现高效快繁已成为当前我国畜牧业可持续发展的头等大事。