PSEN1基因甲基化与散发阿尔茨海默病的相关性研究

魏珂　李玮

【摘要】目的：探索早老素1（PSEN1）基因甲基化以及散发性阿尔茨海默病（SAD）之间的相关性。方法：选取2016年3月至2017年3月间的60例SAD患者纳入观察组，另选取同时期的60例健康对照者，分别应用MassARRAY质谱定量检测其PSEN1基因启动子区CpG位点甲基化率，并进行对比分析。结果：观察组患者PSEN1基因启动子区在的甲基化率均明显低于对NCg（P<0.05），差异具有统计学意义；观察组患者随着年龄的增长，PSEN1基因甲基化率逐渐降低（P<0.05）。结论：PSEN1基因甲基化与散发阿尔茨海默病发病之间有密切的相关性。

【关键词】PSEN1基因；散发阿尔茨海默病；甲基化；相关性

引起老年性痴呆的最重要原因之一是阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD），散发性阿尔茨海默病（SAD）是AD之中较为常见的一种，以记忆障碍、失语、失用、失认、执行功能障碍、人格及行为改变等为特征性表现。近年来，关于SAD的基因学研究有了较大的进展，现已证明基因遗传学因素在其发病中占据重要的位置，其中关于早老素1（PSEN1）基因的研究是热点之一，但关于其与散发阿尔茨海默病的相关性还没有得到足够深入的认识。本研究着眼于检测SAD患者PSEN1基因启动子区甲基化的特点，试图阐述其与散发阿尔茨海默病之间的关系，为今后的临床诊治提供参考依据。报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2016年3月至2017年3月间本院神经内科门诊及病房的60例SAD患者，并将其纳入观察组，另选取同时期本院体检中心的60例健康对照者，纳入对照组。对照组患者中，男性32例，女性28例，患者平均年龄（67.24±6.17）岁，其中<65岁18例、65～70岁27例、>70岁15例；简易精神量表（MMSE）评分[2]均>28分，排除记忆障碍、智力缺陷病例。观察组中，男性33例，女性27例，患者平均年龄（66.83±7.81）岁，其中<65岁20例、65～70岁24例、>70岁16例；均符合美国阿尔茨海默病协会关于AD的相关诊断标准，并排除一级亲属中有相关疾病患者。两组患者均签署知情同意书，在年龄、性别、文化水平的差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

抽取两组患者静脉血10mL，枸橼酸葡萄糖抗凝后采取盐析法将DNA进行提取，分别应用MassARRAY质谱定量检测其PSEN1基因启动子区CpG位点甲基化率。DNA甲基化修饰试剂盒厂家为Epigentek公司，Massarray点样及芯片仪、PCR仪、荧光分析仪等为Sequenom公司产品。所有样本采集及DNA提取、引物設计及PCR扩增、体外转录、点样及质谱检测等均由同一专业实验室技术人员严格按照操作规程和仪器、试剂盒说明书完成。

1.3统计学方法

使用SPSS 17.0软件，计数数据均用n/%表示，组间采用X²检验，若P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

观察组患者PSEN1基因启动子区在-173、-95和+76的甲基化率均低于对照组，其中在-173的甲基化率组间存在明显差异（P<0.05），具有统计学意义；观察组患者随着年龄的增长，PSEN1基因甲基化率逐渐降低（P<0.05）。详见表1、表2所示。

3讨论

近年来，阿尔茨海默病的遗传学研究逐渐深入，其中有针对遗传性阿尔茨海默病患者的研究表明，基因组完全一致的单卵孪生子的AD发病年龄以及临床症状并不完全一致，显示出尚有其他遗传学机制在阿尔茨海默病发病中发挥关键作用。表观遗传学作为遗传学中一个较为前沿的分支，通过对DNA甲基化、组蛋白修饰以及非编码RNA的研究，为解答上述问题提供了新的思路。DNA甲基化是表观遗传学中最常见的一种改变方式，其主要发生位置在DNA转录调控区附近的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸（CpC）岛中的胞嘧啶碱基。

关于表观遗传学与散发阿尔茨海默病发病机制之间的关系，目前的研究和认识还不够深入。本研究通过对60例散发性阿尔茨海默病患者以及60例正常体检者外周静脉血中PSEN1基因启动子区（-288至+101）甲基化程度进行检测，旨在探索PSEN1基因甲基化模式改变与散发性阿尔茨海默病发病的关联性。以往的研究文献阐明PSEN1基因启动子区有不同的甲基化位点，且多数位点的甲基化水平均较低下，本文研究表明，在PSEN1基因启动子的-173位点，观察组甲基化率对比对照组存在着明显的降低（P<0.05）。本研究还探讨了SAD患者PSEN1甲基化率与年龄分布的相关性，结果提示SAD患者PSEN1基因平均甲基化率随着年龄的增加而呈显著降低趋势（P<0.05）。由于高龄是阿尔茨海默病的重要危险因素之一，由此大体能推测PSEN1甲基化模式的改变可能与散发阿尔茨海默病的发病存在一定的相关性。