减少超排供体羊无精卵的技术措施

董正德 佟桂芝 宋斌

摘要：针对我国肉羊良种化程度低、生产水平和繁殖技术水平低的现状，从提高肉羊超数排卵的卵子人工授精率、优质胚胎采集率等方面入手提高肉羊胚胎移植效果。选择提高了优质公（母）羊繁殖率，建立体内胚胎高效生产：即从供（受）饲养管理、体超数排卵、人工授精率，并对内羊产业化生产进行指导，解决我国肉羊生产率和良种化率低的问题，推进舍饲进程，同时缓解草畜矛盾，保持生态平衡。

关键词：肉羊；超数排卵；无精卵；胚胎移植

中图分类号：S826.3

文献标识码：A

文章编号：2095-9737（2018）05-0003-02

1 种公羊的选择

对于有种公羊的养羊场，超数排卵时，种公羊的配种繁重。在质量上要求品种优良，系谱清楚，外貌特征符合品种要求，膘情中上等，健康，精液质量好，性欲旺盛；在确定参配种公羊数量时，要根据所需配母羊的数量、血缘。即每一个血系中至少要有两只以上主配公羊，并且公羊配种后要适当休息。

2 种公羊的保健

专人分群饲养，并保持稳定。羊舍要干燥、清洁、有充足的光线。每天运动时间6h以上，距离为6～9 km。略快自然放牧均匀驱赶速度为宜。饮水、食盐自由采食。供体羊超排时，公羊保证性欲旺盛、精液品质优良，供体母羊才能够采集到优质受胎。性欲差的公羊，可以用睾酮或者类似物处理。在供体超排时，公羊比平时提高20%～30%营养标准，超排前2月开始。有优质牧场，自由采食和饮水，补饲全价精料、多汁饲料以及胡萝卜。没有放牧场，饲草料要全价、适口性好，易消化。最理想的饲草料是用全价料和优质牧草、青贮饲料等混合搭配饲喂。

3 供体母羊的选择

健康，无生殖疾病，膘情适中，年老，身体过肥或过瘦的母羊超排时出现发情，但不排卵或排出的卵质量差，人T授精后也只能是无精卵。供体母羊系谱清楚，健康，年龄2. 5—6岁，体格健壮，无空怀史。对所选择的供体母羊提前进行传染病检疫，进行预防注射和体内外寄生虫的驱虫。要注意检出已经妊娠母羊，产羔母羊必需产羔40天以后才能作为供体。

4 供体羊的饲养管理

在准备期的饲养管理包括饲喂、饮水、补盐、运动、试情等内容。对供体羊最好采取放牧与舍饲相结合的饲养管理方式，以利于供体羊均衡摄入所需营养物质。有牧场的地区，采取放牧后补饲的办法，补饲的精料分早、晚2次喂给。早晨补饲略少些。晚上略多些：全舍饲的羊，被动驱赶运动所需时间较短，在补饲精料量超过0. 75 kg时，一般早、中、晚三次补饲，但注意饲喂后1～2 h反刍时间里羊群要保持安静。

5 试情公羊的选择

要求性欲、身体健康状况良好的本地公羊。试情羊与供体母羊数量比为1： 30。

6 用于超数排卵的激素选择

国产激素类：FSH（促卵泡素）、LH（促黄体生成素）、PG（前列腺素）、CIDR（含孕激素阴道栓塞）。

进口激素类：可使用国外生产的同类优质产品。7激素剂量（注射总量/只）

FSH（国产）剂量：90～200 U。LH（国产）剂量：根据FSH的注射剂量，肌注80～120 U。

注：进口药品参照其产品说明书确定剂量。

在母羊放入CIDR之日作为第o天，在放人CIDR的9—13天开始超排，在第6针注射FSH时取出CIDR。撤栓后13 h，用试情公羊，每12 h试情1次，发情供体羊发情12 h必须及时配种。采用本交或本交加人工授精相结合方法，连续配种2～3次，每次间隔12 h。采用人工授精技术进行配种时，保证供体羊撤栓后18～48 h内输精3次。可进行腹腔内窥镜子宫深部输精，或对发情超排母羊自然交配或常规人工输精。

8 配种

8.1 供体羊发情鉴定

在第6次注射FSH时即对超排供体羊观察发情。观察时间：早晚各1次，每次不少于o.5h。观察方法：系好试情布的试情公羊，放入超排供体母羊群中，每1只试情公羊可检测30—40只供体母羊，母羊站立、并接受试情公羊爬跨，可以确定该供体母羊已发情，准确记录供体母羊的发情时间。

8.2 适时输精

进行第一次输精的时间：自然发情的母羊在发情后24 h，诱导发情的母羊应该在撤检后54 h，发情母羊子宫内输精范围在发情结束前2～3 h，即排卵前2～3 h，之后每隔12 h输精1次。鲜精液活力在70%以上，每次人工输精有效精子数不少于3×10 7，冷冻精液活力在35%以上，输精次数2～3次。

8.3 人工授精技术

8. 3.1 人工授精前准备

在输精前1 h，对公羊进行采精，要求采精地点安静。检查精液品质，然后根据精子密度、活力稀释，分装到0.5 mL的吸管，有效精子数要求为7 000万个。每侧子宫内输精量0.25 mL。采精前对种公羊外生殖器清洗消毒。采精、精液稀释、输精用的器具严格灭菌、消毒。子宫颈输精：母羊外阴部必须经过清洗消毒。稀释后的精液温度要保持在25℃左右。用开膣器打开阴道找到子宫颈外口，将输精器插入子宫颈外口不少于1 cm，注入定量精液。

8.3.2 腹腔内窥镜子宫内输精时间

在肉羊撤栓后48 h，利用腹腔镜子宫内输精，能提高胚胎受精率、降低胚胎的退化率，能获得高的受精率。对于超排羊来说，明显好于常规子宫颈口人工授精和自然交配；在超排羊中自然交配或宫颈输精时常出现不受精的现象。肉羊宫颈的卷绕结构使精液很难精确到位，另外，同期发情和超数排卵处理本身对精子通过宫颈运输有一定干扰作用，这对受精率和可移植胚胎的数量有一定影响。腹腔内窥镜技术的关键是适时输精。LH峰出现的时间大约在去栓后26 h，排卵大约发生在CIDR取出后48～50 h，在未做超排處理和放入CIDR并做超排处理的肉羊中，从LH峰出现到排卵的时间大约是24 h。这说明在超排肉羊中腹腔内窥镜子宫内输精的最适时间受超排方案的影响。

8.3.3 子宫内输精部位

对子宫角前端、子宫角中端、子宫角末端和子宫角基部进行输精操作时，存在以下技术差异：对于比较粗的子宫角末端及子宫角基部子宫内输精时，手术的切口相对较大，造成黏连的几率也就增大，且伤口易受到感染；而手术切口较小的子宫角中部输精，借助腹腔镜可清晰地观察到子宫角中部，且子宫钳很方便将其牵拉输精部位，对卵巢等损伤较小，伤口愈合快。研究证明，子宫角中部输精，并且采用直接对双侧子宫角进行输精。这样就可以省去单侧输精时必须仔细观察母羊两侧卵巢状况，并且准确判断是否有卵泡排卵等。

8.3.4 有效精子数

研究证明有效精子数输入剂量在1×l07—4×107个之间时，胚胎受精率随着输精剂量增加而增加，在4×l07个时，胚胎的受精率最高。

8.3.5 冷冻后的注意事项

冷冻精液解冻后，在室温条件下，停留时间越短越好，做到随时解冻，随时输精。在进行子宫内输精操作时，解冻后的精液在室温停留的时间最好不要超过30 min。

8.3.6 改变传统输精方法，采用腹腔内窥镜输精

通过改进羊冻精稀释液配方和冻精冷冻程序，利用腹腔内窥镜进行羊冷冻精液输精，改变了传统的子宫颈口输精方法。突破了冻精配种的技术难题，使羊冻精配种情期受胎率由原来的（子宫颈输精）33.5%，提高到73. 3%（腹腔镜输精），提高了39. 8%。

8.3.7 供体羊补加硒VE的处理

对供体羊开始超排时，注射硒 VE，直至配种结束，剂量为每天3 mL/只，方法是每天上午一次性分点肌肉注射。在饲养管理和激素处理相同的条件下，进行补加亚硒酸钠VE和相同输精方式试验，对供体母羊排卵和受精率的影响。肌注亚硒酸钠VE的受体母羊，每只平均冲胚11.5枚，显著高于对照组（8.9枚）（P<0.01），且组内各重复间差异不显著（ P>O.05），可见，在配种前给母羊补充硒 VE对其排卵有明显的影响。