海蛤片对乙酸诱导大鼠胃溃疡模型改善作用的研究

陈紫依， 卢 军， 聂继红

(新疆医科大学1中医学院， 2附属中医医院药学部， 乌鲁木齐 830000)

胃溃疡是临床的常见病症，西医内科治疗其目的是缓解症状和改善胃黏膜炎症和溃疡面，治疗用药有一定的局限性。胃溃疡病属于中医学的“胃脘痛”“胃痞满”范畴，中医治疗胃溃疡可以达到治其根源的功效，比单方面的西药治疗更行之有效，避免治标不治本[1-2]。海蛤片为现代中药复方制剂，其处方来源于新疆医科大学附属中医医院消化科的临床经验方，由高良姜、肉桂、香橼、木香、海螵蛸、贝母、荜茇、山楂、海蛤壳九味药物组成，具有温中健胃，止酸止痛之功效，用于肝胃不和，脾胃虚寒，胃失通降所致的胃脘疼痛，返流烧心等症状。本研究为探讨海蛤片治疗胃溃疡的作用，采用乙酸致大鼠急性胃溃疡模型，从动物实验进一步观察海蛤片抗胃溃疡效应，为其临床治疗胃溃疡提供依据。

1 材料与方法

1.1实验动物及饲养环境购入SD大鼠60只，雌雄各半，体质量180～220 g，供应单位：新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心[许可证号：SCXK(新)2003-0002]；饲养温度：(23±2)℃、相对湿度：40%～70%、通风情况：10～20次/h、光照条件：12 h/12 h明暗交替。

1.2药物、试剂与主要仪器海蛤片(新疆维吾尔自治区中医医院中药药学实验室提供，批号20170112);海蛤片低、中、高剂量组分别为生药1.2、2.4、4.8 g/kg，实验前配制成0.12、0.24及0.48 g/mL溶液封存待用；安胃片(葵花药业集团有限公司提供，批号20150716)，临床用量：1次5～7片，3～4次/d，每片体质量0.6 g，实验前配制成0.12 g/mL溶液封存待用。酶标仪(型号：MULTISKAN；编号：S-79943)；TDZ5WS低速离心机(编号：F1702066TB)；HC-3518高速离心机(编号：04150700011)；洗板机(型号：WELLWASH；编号：S-79945)；电子天平(规格型号：SI-234；编号：S-79871)；微量加样枪(德国Eppendorf)；低温冰箱(美国thermo公司)；LEICA DM 3000电子显微镜；

1.3造模与分组参照文献[3]，将SD大鼠双日灌胃精炼猪油1次，每次0.5 mL，连续喂养14 d，单双日均给予标准动物饲料和白菜，自由饮水。按体质量根据随机数分布表分为假手术组(10只)、模型组(10只)、安胃片组(10只)和海蛤片高、中、低剂量组(各10只)。用0.1 g/mL水合氯醛0.3 mL/100 g将大鼠腹腔麻醉，麻醉后观察角膜反射是否灵敏，无反应后将其固定于相应手术台上，常规消毒、备皮，于剑突下腹正中纵切切开皮肤2 cm，用无齿镊分离皮肤下组织，小心提起皮下肌肉组织，手术刀刀口向上切开肌肉，以防损伤腹腔内组织，暴露胃体用无齿镊轻拉，于胃腹侧浆膜层注入50 μL、1.7 mol/L乙酸，用纱布擦拭胃体表面液体，将胃体轻送回腹腔，关腹，逐层缝合肌层及皮肤层。术后禁食不禁水16 h，观察动物一般状态，术后当日注射青霉素，连续3 d，每日1次，每次20万单位。

1.4实验给药给药剂量参照成人用量(海蛤片3次/d，1次5片，每片体质量0.4 g)，按体表面积计算得，造模1 w后，实验前配制成0.48、0.24及0.12 g/mL溶液封存待用，海蛤片高、中、低剂量组分别按上述浓度灌胃，安胃片组按1.2 g/kg 灌胃给药，每天1次；假手术组和模型组给予1 mL/100 g生理盐水；连续给药14 d。大鼠第15天禁食，自由饮水。

1.5实验方法及样本采集于末次给药1 h后麻醉，结扎幽门，8 h后，用0.1 g/mL水合氯醛0.3 mL/100 g再次麻醉后，打开腹腔，小心分离腹主动脉，用5 mL真空采血管取血，3 000 r/min离心15 min后，将血清移至2 mLEP管分装、-80℃冷冻保存，备用。采用ELSA试验法测定大鼠血清胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、前列腺素E2(PGE2)、过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)。分离食管结扎，将胃体取出，胃体内物质收集于塑料离心管内，记录胃液体积，以3 500 r/min离心15 min，取上清液测pH值。重新结扎贲门，先用生理盐水冲洗胃体上面的血，随后用注射器注入适量的10%福尔马林固定液，并将其浸泡于其中固定10 min之后沿着胃大弯剪开，将胃壁打开，蒸馏水洗去内容物，用肉眼和放大镜在日光灯下观察胃黏膜。溃疡等级的评定标准：完整胃黏膜为0级；点状出血直径≥1 mm，1～5点为1级；6～10点为2级；10点以上为3级；条状出血1～5条为4级；6～10条为5级；10条以上为6级。解剖并观察胃粘膜溃疡情况并做组织病理学检查。

2 结果

2.1海蛤片对乙酸致大鼠胃溃疡模型的影响与模型组比较，各给药组均能降低胃溃疡大鼠胃液的分泌量、升高胃液的pH值；与模型组比较，海蛤片能明显使胃溃疡模型大鼠血清中PGE2、SOD的水平升高(P<0.05)，使MDA、NO、ET-1的水平降低(P<0.01或P<0.05)，见表1。

2.2各组大鼠胃黏膜病理检查结果病理结果显示：假手术组的胃黏膜层组织细胞排列层次清楚，黏膜肌层、下层及浆膜层完整；模型组的胃黏膜有部分腺体破坏，黏膜下层血管有瘀滞，黏膜下层及浆膜层有炎性细胞浸润；各给药组的胃黏膜上皮缺损程度及炎性浸润程度较模型对照组减轻，部分腺体紊乱(图1)。

表1 海蛤片对乙酸致大鼠胃溃疡模型的影响

注：与模型组比较：aP<0.05，bP<0.01； 与海蛤片高剂量组比较，cP<0.05。

假手术组模型组

安胃片组

海蛤片低剂量组

海蛤片中剂量组

海蛤片中剂量

海蛤片高剂量组

图1各组大鼠胃黏膜病理检查结果(HE,×100)

3 讨论

胃溃疡是常见的消化道疾病，具有上腹胀满或疼痛，食欲减退、暖气、泛酸、烧心等症状。现代医学对本病的病因及发病机制仍未完全阐明，一般认为溃疡发生是黏膜侵袭因素和防御因素失衡的结果。胃黏膜损伤因子包括胃酸和胃蛋白酶、幽门螺旋杆菌等；胃黏膜的自身防御机制由胃黏液、胃黏膜血流量、PGE2，等因素构成。其在中医上属于 “胃痛”“痞满”“嘈杂”“泛酸”等疾病范畴，其发病多与外感邪气、内伤饮食情志、先天享赋不足有关。而且本病易反复，需长期服药，西药长期服用副作用较大，患者往往不能坚持。因此胃溃疡的治疗有寄于中医药或者中西医结合方法。中医在调整机体的功能(如神经系统功能、消化道运动和分泌功能、免疫功能等)、增强胃黏膜防御能力等方面有着巨大的优势，且毒副作用小。临床多以疏肝和胃、温中健脾、养血益胃、活血化瘀、调理寒热等治则为主，古今许多中医学者拟定出许多相对固定的方剂、成药，获得了良好的效果。

海蛤片方中高良姜、肉桂大辛大热，温中散寒。香橼性温，理气宽中，消胀降痰[4-5]；木香味辛苦性温，行气止痛，芳香化湿，调中导滞；海螵蛸咸涩，有制酸止痛、生肌敛疮之功[6]；贝母善开郁积，止疼痛，消胀满，清肝火，制酸，协同海螵蛸、海蛤壳增强本方制酸、止痛之效；荜茇温胃散寒，和中止痛；山楂健胃消食，调理脾胃。诸药配伍，一方面具有温中散寒治的功效，另一方面则可以制酸止痛、行气和胃，温中有通，标本兼治，共奏温中健胃，行气和中，止酸之功效[7]。对于乙酸型胃溃疡模型大鼠具有良好的温中健胃，止酸止痛、消痈生肌的功效。

前列腺PGE2是胃黏膜的重要防御因子之一，也是一种重要的细胞生长和调节因子，它有抑制胃酸分泌、增加胃黏膜血流量、促进胃黏膜上皮再生以及增强胃黏膜防御攻击因子的作用[8-10]。本研究结果表明，乙酸致大鼠胃溃疡模型中PGE2水平与假手术组比较血清中含量明显降低，海蛤片各给药组中PGE2血清含量较模型对照组升高，说明海蛤片可通过促进胃黏膜细胞再生、胃黏膜修复，保护胃黏膜的完整性，从而增强胃黏膜的防御功能。

体内氧自由基增多可引起组织细胞的损害。胃溃疡形成过程中，胃黏膜在各种攻击因子刺激，局部黏膜缺血下，可产生大量的氧自由基。氧自由基和膜内的多种不饱和脂肪酸结合形成MDA等脂质质过氧化物。超氧化物歧化酶(SOD)是体内一种重要的抗氧化酶，它存在于身体的各个部位，是生物体内氧自由基清除系统的首要防线，具有抗氧化及保护胃黏膜细胞氧化、减轻对黏膜的损害的作用，还具有保护细胞DNA、蛋白质与细胞膜的功能[11-17]。本研究通过检测外周血SOD及MDA的水平变化，观察海蛤片在提高机体抗脂质过氧化物歧化酶方面的能力。

胃黏膜血流量GMBF减少是胃溃疡形成的易感因子，而ET-1是GMBF重要的影响因子，它具有强烈的血管收缩功能；随着血清ET-1的不断升高，胃黏膜血流量减少，引起机体局部缺氧和酸中毒，导致机体氧自由基水平升高，从而对胃黏膜造成一定的损伤。NO是内源性舒张血管因子，它可通过抑制血清ET-1的生成而促进胃黏膜扩张，调节胃黏膜局部血供及胃酸分泌，从而起到保护胃黏膜的作用。胃泌素是由胃窦G cell合成分泌的，它参加胃黏膜产生与愈合的全过程。本研究结果表明胃溃疡患者血清中胃泌素含量明显高于健康者，胃泌素在受某些刺激攻击时，可刺激胃壁细胞释放胃酸，从而使胃酸分泌失衡、产生或加重胃溃疡的形成[18-22]。本研究结果表明模型组和给药组GAS的水平明显高于假手术组，各给药组差异无统计学意义，提示海蛤片不能通过影响GAS水平来促进胃黏膜的恢复与愈合。

综上所述，本研究证实了海蛤片对乙酸诱导大鼠胃溃疡模型具有确切的保护作用，海蛤片抗溃疡的作用可能是通过升高PGE2含量以增强胃黏膜的防御功能，升高SOD、降低MDA水平以提高机体抗脂质过氧化物歧化酶的能力，降低ET-1、NO的水平以调节胃黏膜局部血供及胃酸分泌，从而起到保护胃黏膜的作用。

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