荧光染色法与KOH湿片法在浅部真菌感染直接镜检中的应用比较

徐 艳，钟白玉，翟志芳

浅部真菌感染治疗的关键在于能否及时诊断并积极治疗，而临床上用于真菌感染快速诊断最主要的方法是KOH湿片法，但是其敏感性和特异性不高，对临床检验技术人员要求较高，临床上容易漏诊或误诊。笔者就浅部真菌感染为例，采集标本行荧光染色法与KOH湿片法直接镜检，比较两种方法的优劣性。

1 材料和方法

1.1 标本来源

取自我院皮肤科门诊就诊的疑为浅部真菌感染的患者，共105例，其中手足感染46例，甲真菌感染12例，体部感染42例，头面部感染5例。

1.2 方法

75%乙醇消毒患处，每例取2份标本 。1份行KOH湿片法，载玻片上滴1滴10%KOH溶液，盖上盖玻片，乙醇灯火焰上方微加热，用棉签轻压吸去多余溶液，普通光学显微镜下观察。另一份行荧光染色法，采用溯康真菌荧光染色液（南京汉瑞生物科技有限公司生产，重庆林睿康医疗器械有限公司），载玻片上滴1滴荧光染色液，盖上盖玻片，轻压，吸去边缘多余染色，室温下放置数分钟，通过250～400 nm滤镜的倒置荧光显微镜观察并采集图像。

2 结果

荧光染色法可于荧光显微镜下观察到染呈亮蓝色的菌丝或孢子，与背景反差较大，非常清晰（图1）。而KOH湿片法背景杂乱，不易观察（图2）。观察结果显示105份标本中，荧光染色法检出85例阳性（80.95%），KOH湿片法检出58例阳性（55.23%），统计学分析显示χ2=15.95，P＜0.01，差异有统计学意义。各部位真菌阳性率比较见表1。

图2 KOH湿片法镜下所见

表1 KOH湿片法与荧光染色法真菌阳性率比较 （例）

3 讨论

一直以来KOH湿片法都是临床上用于真菌直接镜检最简单、快速又经典的方法，但是对检验人员的临床经验有要求。另一方面KOH湿片法没有经过任何染色，菌丝或孢子与标本本身颜色一致，压片时有气泡，标本不易溶解。特别是有的患者就诊时涂抹了药物，脂滴非常明显，诸多方面的因素均影响了真菌直接镜检的阳性率。

真菌荧光染色法通过荧光增白剂与组织中可能存在的真菌细胞壁β-多糖结合，如几丁质和纤维素等，在紫外光的激活下，可使真菌显示出荧光。通过250～400 nm滤镜的荧光显微镜下观察，菌丝或孢子呈亮蓝色，与背景反差明显，结构清晰，相比于KOH湿片法更容易观察。而KOH湿片法背景相对杂乱，特别是在极少量菌丝或孢子时容易漏检。且荧光染色法只需要1滴染液，不需要如KOH湿片法一样火焰上方加热，角质溶解速度较KOH湿片法有较大优势，大大提高检测效率。笔者通过对105例浅部真菌感染患者同一部位两种检测方法进行比较，结果显示荧光染色法阳性率（80.95%）明显高于KOH湿片法（55.23%），且在检测过程中显色快，敏感性高，易于判断，大大节约了检测时间。这一结果和文献报道的结果是相一致的[1-4]。其主要缺点在于试剂成本略高，且需要荧光显微镜进行观察。

本文通过荧光染色法与KOH湿片法的对比研究表明，对于真菌直接镜检，荧光染色法不失为一种快速、高效、准确诊断浅部真菌感染的方法。

【参 考 文 献】

[1]韩德, 刘原志, 朱俊浩, 等. 荧光染色法与KOH湿片法在真菌直接镜检中的应用比较 [J]. 中国真菌学杂志, 2016, 11(4):240-242.

[2]陈锐君, 佟韬, 李超, 等. 荧光染色法和KOH湿片法在诊断浅部真菌感染中的效果比较 [J]. 中国真菌学杂志, 2016, 11(6):378-380.

[3]张伟宏, 王丽娅, 韩雷, 等. KOH湿片镜检法与CFW荧光染色法诊断真菌性角膜炎的效果比较 [J]. 郑州大学学报(医学版), 2010,45(2):193-194.

[4]赵志伟, 张蕴莉. 真菌性角膜炎的实验室快速诊断方法分析 [J]. 中国医学创新, 2014, 11(1):75-77.