风水肾炎汤对IgA肾病大鼠模型治疗作用及血清Scr、BUN、IL-21表达的研究*

闫河峰，赵建，杨莲花，程根阳2

1. 河南省焦作市第二人民医院泌尿外科 (焦作 454001),2.郑州大学第一附属医院肾内科(郑州450052)

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是内科临床的常见病，也是肾功能衰竭(ESRD)的主要病因之一[1-3]。在我国成年人口中，约有10%左右的人群患有慢性肾病，这其中约有50%的患者为IgA肾病[4-6]。而肾小球动脉硬化约占我国IgA肾病的 45%～54%，近十多年来有较明显的的上升态势。近年来，本院根据多年经验，运用自拟的“风水肾炎汤”治疗IgA肾病，取得了较好的临床效果，现总结如下。

对象与方法

1 实验对象 自上海必凯实验动物公司购进100只SD大鼠，均为SPF级雄性，体质量为162～193 g，平均(183.69±16.81) g；年龄均为6周。

2 实验药物 Sigma试剂(ALDRICH)、牛血清白蛋白(BSA)、四氯化碳(CCl4)、脂多糖(LPS)，均购自国药试剂公司；蓖麻油及自拟风水肾炎汤全部用药均购自同仁堂饮片公司。

3 选模、分组与治疗方法 按随机法将全部大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组及治疗组四组，空白组大鼠体质量为(183.83±16.59)g、模型组大鼠体质量为(183.38±16.41)g、阳性药物组大鼠体质量为(183.46±16.45)g、治疗组(183.91±16.95)g，四组无统计学差异(P>0.05)，可满足对比研究要求。空白组以常规标准SD大鼠饲料常规喂养。其他三组以BSA、LPS、CCl4按免疫复合法制备IgA大鼠肾病模型[7]。自实验第1 d起使用BSA按400 μg/g灌胃，2 d/次，连续6周；将0.5 ml蓖麻油+ 40.1 ml CCl4充分混匀为溶液，皮下注射，1次/周，连续9周；给予0.05 mg LPS，于第6周、第8周时尾静脉注射。造模完成后，对大鼠模型的肾组织以免疫荧光法进行检测是否成功造模[3]。造模后的模型组与空白组采取相同方法常规喂养不予任何治疗；治疗组给予自拟风水肾炎汤，组方为：赤小豆、黄芪各30 g，连翘15 g，生麻黄、防风、紫苏叶、当归各10 g，桑白皮、杏仁各9 g，生姜、甘草各6 g，大枣4枚，以600 ml水煎至汤汁60 ml，人鼠按20倍转换剂量，灌胃；阳性药物组给予治疗组同等剂量饮用水(安慰剂)灌胃。四组均同时治疗或喂养1个月。

4 观察指标 采集各组大鼠24 h尿液测定蛋白定量。将全部大鼠以乌拉坦麻醉后采取腹主动脉血样5 ml，于37 ℃恒温条件下静置15 min，使用离心机按3500r/min速度离心10 min，取得血清后置于- 80 ℃条件下储存待检；使用全自动型生化分析仪按ELISA法检测血清样本中的肾功能指标：BUN、Scr与炎性因子：TNF-α、IL-4、IL-21含量。

结 果

1 24 h尿蛋白定量及肾功能指标 见表1。各组间24 h尿蛋白、Scr、BUN均具有统计学差异(P<0.05)；两两对比：治疗组24 h尿蛋白低于模型组、阳性药物组，但仍高于空白组(P<0.05)；治疗组Scr、BUN与空白组未见统计学差异(P>0.05)，且分别低于模型组与阳性药(P<0.05)；模型组、阳性药物组24 h尿蛋白、Scr、BUN均高于空白组(P<0.05)，但两组间各项指标均未见统计学差异(P>0.05)。

表1 四组24 h尿蛋白定量及肾功能指标对比

注：与空白组对比，☆P<0.05;与模型组对比,★P<0.05;与阳性药物组对比,◇P<0.05

2 血清炎性因子 见表2。各组间TNF-α、IL-4、IL-21均具有统计学差异(P<0.05)；两两对比：治疗组与空白组间各项均无统计学差异(P>0.05)，模型组与阳性药物组间各项均无统计学差异(P>0.05)，模型组与阳性药物组各项指标均高于空白组与治疗组，两两对比均具有统计学差异(P<0.05)。

表2 四组血清炎性因子对比(ng/L)

注：与空白组对比，☆P<0.05;与模型组对比,★P<0.05;与阳性药物组对比，◇P<0.05

讨 论

免疫球蛋白A(IgA)或者以IgA为主的抗原抗体复合物在肾小球系膜及系膜区域的弥漫沉积是IgA肾病的病理基础[8-10]。其临床表现较为复杂，最为常见的是肉眼血尿和肾小球基质增多、系膜增生等病理改变。此等改变约占肾组织活检总数的40%以内，这也是国内IgA肾病发展至终末期ESRD的主要基础。IgA肾病源于感染与免疫机制的产生，IgA是由B细胞在产生免疫过程中分化而生成，但B细胞的免疫活动还将受到T淋巴细胞的调节，当T细胞调节功能下降时，B细胞会生成IgA失去节制。有关研究发现，Th1 /Th2 的平衡失调亦与有关IgA的产生有关，Th1和Th2细胞分泌不同的细胞因子，Th1主要分泌TNF-α等，参与迟发型超敏反应和细胞免疫。Th2可合成IL-4、IL-6，IL-13等，可辅助B细胞分化抗体分泌细胞并参与体液免疫应答并诱导抗体的生成。Th1、Th2细胞相互制约，相互调节，其调节、制约功能失调与感染性疾病以及机体免疫性疾病的发生有关。另外，滤泡辅助性Tfh细胞对B细胞产生IgA 的免疫应答具有关键性作用，Tfh细胞是近年来发现的一种新的辅助性细胞，其分泌的IL-21等因子对B细胞形成刺激，使B细胞分化、增殖。IL-21具有诱导体内所有 B 细胞亚群分化，使之成为抗体分泌细胞的功能。在B细胞、Tfh细胞应对抗原初始、再次的免疫应答以及需要长期维持的体液免疫等均可发挥其重要的作用。

祖国医学的精髓是“整体观念，辨证论治”,中医内科学中没有西医IgA 肾病的名称，只有从“水气”病论治，从IgA 肾病的临床症状血尿、水肿、蛋白尿论治的记载，诸多中医名家认为本病的发病机制是本虚标实。本虚为气阴两虚，标实则以湿毒、血瘀为本病特点。经中医病案史验证，中医治疗IgA肾病具有独到见解和较好的效果[11-13]。近年来，中医学与西医的化验检测以及先进的诊疗手段相结合，相得益彰，使我国治疗IgA 肾病有了显著的进步。本院以传统中医理论为基础，结合IgA肾病临床治疗经验拟定出风水肾炎汤应用于本病的治疗中。风水肾炎汤中，生麻黄辛温发汗、解表散寒、行水消肿、宣肺平喘，消癥结、散阴疽。现代药理学研究表明生麻黄的主要成份麻黄碱具有明确的肾功能保护作用[14]。连翘消肿散结、清热解毒，用于瘰疠、痈疽，丹毒、乳痈以及温病初起、风热感冒、温热入营、神昏发斑、高热烦渴，热淋尿闭。赤小豆散恶血除热毒、通乳消胀满、利尿。防风用于感受风寒、发热恶寒、头身痛、以及感受风热、咽痛目赤，以祛风为长，既能解表散风寒又能发散风热。杏仁苦温降气、止咳平喘、助麻黄以宣肺平喘、润肠通便、治疗咳喘等疾病。紫苏叶散表寒，用于风寒表症，发汗力较强，治疗恶寒、无汗、发热，行气宽中，用于胸闷、呕恶，脾胃气滞。大枣补血养血，健脾通便。桑白皮泻肺行水，止咳祛痰。甘草清热解毒，止咳化痰，调和诸药。当归活血养血补血，黄芪补气、升阳，二者配伍可治膏淋。

综上所述，自拟风水肾炎汤能够有效治疗IgA肾病模型大鼠，可降低其尿液中蛋白含量以及其血清中的肌酐、尿素氮水平；通过降低血清IL-21、TNF-α水平同时升高血清IL-4水平，调节免疫平衡机制从而实现保护肾功能的作用。因此，风水肾炎汤具有IgA肾病临床应用价值，但整体方剂中应加强对患者尿蛋白治疗方面的药物应用。

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