郭 辉
(郑州大学第三附属医院(河南省妇幼保健院) 郑州 450000)
产前筛查是检查母婴双方健康的一种方法,能够对胎儿在母体时进行缺陷预测,结合产前诊断,尽可能的减少存在先天缺陷婴儿的出生,为更多的家庭带来长久的幸福。传统的产前筛查对孕妇及胎儿均具有一定的创伤,还存在导致流产的可能[1]。近几年,产前检查流行的新方法为:从孕妇的血液中提取胎儿的DNA,从而检测胎儿在母体中的情况[2]。本研究采用孕妇外周血中的胎儿游离DNA进行检测分析,现做如下报告。
选取2016年3月~2017年3月在我院进行产前筛查高危的100例孕妇,9~13周孕龄的50例孕妇定为早孕组,15~20周孕龄的50例孕妇定为中孕组。早孕组中初产妇24例,经产妇26例,平均年龄(27.3±2.2)岁,平均孕周(7.5±1.6)周;中孕组中初产妇25例,经产妇25例,平均年龄(27.3±2.3)岁,平均孕周(15.5±1.7)周。对两组孕妇的外周血中游离胎儿的DNA进行检测。所有孕妇无其它合并症,并根据我国伦理学标准,患者及家属均知情并同意。对两组患者的年龄、孕周等一般资料进行比较,差异不具有统计学意义(P>0.05),两组患者可以进行比较。
1.2.1采集标本
采集孕妇外周血10mL于Cell-FreeDNA BCTTM采血管中,用来提取游离DNA。在4℃温度条件下离心10min,离心后将上层的血清分装到多个离心管(1.5mL)中;重复上一步骤,在4℃温度条件下依旧经过10min用离心方式清除残余细胞,分离后的上清液存入新的离心管中。保存于-80℃温度的冰箱中[3],借助干冰运送至贝瑞和康检测中心进行检测。
1.2.2检测方法
对采集的孕妇外周血采用美国Illumina公司测序仪进行大规模平行测序法检测。通过大规模核酸比对软件对比结果,对DNA片段的染色体的位置进行确定,计算出每一个染色体来源的DNA序列数量,借助正态分布模型,比较妊娠正常二倍体胎儿的孕妇群体以及二倍体胎儿的置信区间和检测阈值,对受检样本是否怀有染色体的非整倍体胎儿得出结论。整个实验过程均在贝瑞和康检测中心完成,数据可靠、详细、有意义。
1.2.3随访
对高风险性的孕妇进行随访,主要方式有电话随访[4]和住院生产病历两种,对于高风险孕妇建议在妊娠中期行羊膜腔穿刺羊水细胞染色体核型检测确认[5],存在异常的孕妇建议终止妊娠。
表1 孕妇外周血胎儿游离DNA检测高风险与羊水穿刺结果对比
组别年龄孕周游离DNA检测羊水穿刺是否一致结果早孕组33921⁃三体综合征21⁃三体综合征是引产中孕组351718⁃三体综合征18⁃三体综合征是引产312021⁃三体综合征(嵌合)21⁃三体综合征(嵌合)是引产
在早孕组50例孕妇外周血游离胎儿DNA检测结果显示,有1例染色体数目异常检测为21-三体综合征,与羊水染色体核型检测分析结果完全相同;中孕组50例游离胎儿 DNA检测结果显示,1例孕妇染色体数目表现异常,1例染色体结构异常,均与羊水染色体核型检测分析结果相同,见表1。
对孕妇外周血中的SRY浓度进行测量,结果显示中孕组浓度(149.25±59.17)copies/mL远高于早孕组的(26.42±35.31)copies/mL,结果显示t=14.3604,P=0.0025,数据差异存在统计学意义,见表2。
表2 早孕期母体血浆中胎儿基因浓度(copies/mL)
组别病例数实测范围均值早孕组5014.3~73.526.42±35.31中孕组5043.6~326.8149.25±59.17t值14.3604P值0.0025
孕妇外周血胎儿游离DNA检测可以安全、准确、快速的进行胎儿染色体疾病检测,能够直接针对孕妇外周血液中游离的胎儿DNA进行测序和分析[6]。目前临床上常常用来检测21-三体综合征(唐氏综合征)、18-三体综合征(爱德华氏综合征)、13-三体综合症(帕陶氏综合征)的危险率。胎儿游离DNA在母体血浆中的有3种来源:(1)母体血浆中的胎儿有核细胞;(2)胎盘滋养细胞;(3)凋亡的胎儿组织细胞[7]。母体血浆中胎儿游离DNA浓度较胎儿有核细胞浓度高,且在怀孕5周时就可被检测出来,并随孕周数的增加,浓度也呈升高的趋势[8]。相比于胎儿有核细胞,产后的胎儿游离DNA能够更快速度的清除,半衰期平均只有16.3min。在母体血浆中,较多的胎儿游离DNA分子长度短于母体的DNA,DNA长度大的更易于检测,检测效果也相对更好[9]。
以上众多的生物学特性使得胎儿的游离DNA成为临床无创产前诊断的新趋势。但目前该技术尚未完全成熟,存在某些较难克服的问题:对于本身存在染色体数目异常的孕妇和怀有两个胚胎的孕妇并不适用;而且对于血浆中胎儿游离DNA含量低于10%的孕妇,敏感性和特异性较差,常检测不出来。
综上所述,尽管孕妇外周血胎儿游离DNA检测存在一些不足,胎儿游离DNA依然是产前筛查的重点研究方向,研究表明,在染色体非整倍体的诊断中,该技术的准确度极高,符合临床报道得出的结论。故孕妇外周血胎儿游离DNA对于早孕期染色体非整倍体具有准确的、高精度的检测率,能够作为产前筛查起到检测胎儿疾病的方法,值得临床推广使用。
1 欧俚倩. 3470例孕中期产前筛查结果初步分析.河南医学研究,2017,26(7):1201~1202.
2 时伟丽,张卉,吴东,等.孕妇外周血胎儿游离DNA在产前筛查胎儿染色体非整倍体疾病中的价值.中华实用诊断与治疗杂志,2017,31(9):859~861.
3 刘俊涛.无创产前检测国际指南与中国规范.中国实用妇科与产科杂志,2017,33(6):564~567.
4 王敏,张闻,梅瑾.全面二孩政策对21-三体综合征的产前诊断影响分析.中国优生与遗传杂志,2017,25(4):74~76.
5 林洋洋,徐婉芳,刘彦慧,等.大规模平行测序技术在产前无创检测胎儿染色体异常中的临床应用.中国优生与遗传杂志,2016,24(1):52~54.
6 卢守莲,黄欢,王珏,等.孕妇外周血游离DNA深度测序在胎儿染色体非整倍体无创检测中的应用研究. 南京医科大学学报(自然科学版),2014,34(4):499~503.
7 徐宏燕,刘凯波.北京地区6家产前诊断中心孕妇外周血胎儿游离DNA筛查情况分析.中国优生与遗传杂志,2017,25(9):72~73;109.
8 刘喜平. 优生教育与产前筛查的应用价值分析.河南医学研究,2016,25(3):499.
9 陆海燕,郑建丽,杨芳芳,等.孕妇外周血胎儿游离DNA检测在无创性产前诊断中的应用.中国优生与遗传杂志,2014,22(10):78~79;8.