外周血中循环肿瘤细胞检测在肺部良恶性病变诊断中的价值

陈 卫 琴

(番禺区中医院检验科微生物室 广州 511400)

肺癌是世界范围内发病率和死亡率增长最快、最高，对人类生命健康威胁最大的恶性肿瘤之一，远处转移是造成患者死亡的主要原因[1]。外周血中的循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell，简称CTC)是指存在于外周血的肿瘤细胞，具有高度活力和高度转移潜能的CTC可以在循环系统中存活，并在合适的环境中增殖，导致肿瘤的复发和转移[2]。为探究外周血中CTC检测在肺部良恶性病变诊断中的应用价值，本院选取133例经X线/CT检查确诊为肺部实性占位性病变患者为研究对象进行CTC检测和肿瘤标志物检测，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1纳入标准

(1)X线/CT检查显示肺部最大直径≤35mm；(2)无钙化；(3)所有入组患者均未接受过化疗；(4)本实验经医院伦理委员会审查通过，患者及家属对本实验目的及方式知情，并自愿签署同意书。

1.1.2排除标准

(1)合并其他器质性疾病患者；(2)免疫系统疾病患者；(3)凝血功能障碍者；(4)急、慢性感染患者；(5)精神障碍者。

1.1.3分组资料

选取2014年11月～2016年11月期间于我院经X线/CT检查确诊为肺部实性占位性病变患者133例为研究对象，经手术病理证实为良性病变53例(良性病变组)，恶性病变80例(恶性病变组)。良性病变组男35例，女18例；年龄28～79岁，平均(54.43±5.89)岁；炎症25例，结核瘤16例，炎性肌纤维母细胞瘤6例，曲霉菌感染6例。恶性病变组中男56例、女24例；年龄29～80岁，平均(55.12±6.03)岁；鳞癌37例，腺癌25例，小细胞肺癌12例，霍奇金淋巴瘤3例，转移瘤3例。

1.2 方法

(1)使用一次性EDTA抗凝真空采血管收集两组患者未经肿瘤相关治疗前的晨间空腹状态外周静脉血3mL，上下颠倒7～8次后，使用ABI StepOne PCR仪(美国Applied Biosystems公司)和CTC检测试剂(格诺思博生物科技有限公司)， 基于LT-PCR技术对细胞表面FR阳性CTC进行计数；(2)使用惰性分离胶促凝管收集两组患者未经肿瘤相关治疗前的晨间空腹状态外周静脉血5mL，室温下静置30min后，离心分离血清，使用Elecsys2010型电化学发光全自动免疫分析仪(德国罗氏诊断有限公司)测定血清中肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)]水平。CEA、CYFRA21-1试剂由德国罗氏诊断有限公司提供，SCC试剂由深圳市新产业生物医学工程有限公司提供，严格按照仪器和试剂说明书操作。

1.3 统计学分析

应用SPSS19.0软件处理实验数据，CTC和肿瘤标志物水平呈非正态分布，采用中位数表示，行Mann-Whitney U 秩和检验；采用ROC曲线评价CTC和肿瘤标志物对肺部良恶性病变的诊断价值。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者CTC和肿瘤标志物表达水平比较

两组患者CYFRA21-1水平比较无显著差异(P>0.05)；恶性病变组CTC和CEA水平显著高于良性病变组，差异具有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组患者CTC和肿瘤标志物表达水平比较

组别例数CTC(units/3mL)CEA(ng/mL)CYFRA21⁃1(ng/mL)良性病变组536．67(4．49～7．85)1．41(1．01～1．70)0．90(0．69～1．40)恶性病变组8011．06(8．77～14．42)1．61(1．10～2．50)0．90(0．61～1．42)Z-6．215-1．990-0．370P0．0010．0470．712

2.2 CTC和CEA诊断肺部良恶性病变的ROC曲线分析

ROC曲线分析结果显示，CTC和CEA诊断肺部良恶性病变的ROC曲线下面积分别为0.817(95%CI：0.743～0.891)和0.613(95%CI：0.508～0.718)，说明较之传统肿瘤标志物CEA，CTC对肺部良恶性病变的诊断价值更高，见图1。

图1 CTC和CEA诊断肺部良恶性病变的ROC曲线

3 讨论

自从1869年，Ashworth首次提出CTC概念后，对CTC的研究逐渐成为了肿瘤领域的研究热点[3]。大量临床研究显示，外周血循环CTC的检测可以通过捕捉外周血中痕量存在的CTC，监测CTC类型和数量变化趋势，以便实时监测肿瘤动态，达到评估预后疗效的作用[4]；CTC数量升高提示疗效不好而数量降低提示疗效较好，CTC能及时反映治疗过程中患者的状况变化[5]；CTC检测比传统的影像学更早、更准确、更灵敏地判断预后，治疗4周后监测CTC对于预后判断的结果与传统影像学在治疗12周后的判断结果极其吻合[6]。这种实时、灵敏、可靠的检测方法可以帮助医生正确判断治疗效果，并制定高效的个体化治疗方案。

临床研究发现，肺癌患者体内叶酸受体(FRs)表达水平较高，LT-PCR技术主要是通过FRs识别肺癌CTC。其中FR-α除在少量正常组织中(肾、胎盘等)有表达外，在正常组织和健康人血液细胞中表达水平极低，具有较强的组织和肿瘤特异性，是一种理想的肺癌CTC检测靶点[7～8]。既往临床研究使用LT-PCR技术对自爆表面FR阳性CTC进行计数，结果显示肺癌良性良性病变患者体内CTC显著高于原位肺癌患者，说明CTC检测可用于肺癌的早期诊断与转移检测[9]。本研究共选取了133例肺部实性占位性病变患者为研究对象，其中良性病变53例，恶性病变80例，恶性病变组CTC和CEA水平显著高于良性病变组，差异具有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示，CTC和CEA诊断肺部良恶性病变的ROC曲线下面积分别为0.817(95%CI：0.743～0.891)和0.613(95%CI：0.508～0.718)，证明CTC在肺部良恶性病变诊断中具有较好的临床应用前景，可以为制定其临床治疗方案提供重要依据。

综上所述，CTC在肺部良恶性病变诊断中具有重要临床应用价值，可将其作为肺部良恶性病变的辅助诊断方法。

1 乔理华,王琳,娄加陶,等.循环肿瘤细胞在良恶性肺部孤立性结节鉴别诊断中的应用价值.中华检验医学杂志,2016,39(12):941～945.

2 陈阳阳,张洁,徐国宾,等.肺癌患者外周血循环肿瘤细胞的检测方法及临床应用.临床检验杂志,2015,33(8):615～617.

3 郭巧梅,乔理华,王琳,等.循环肿瘤细胞检测对非小细胞肺癌的诊断价值.中华检验医学杂志,2016,39(8):589～594.

4 徐春祥,何四军.肺恶性疾病和良性疾病患者外周血循环肿瘤细胞的差异表达情况分析及临床意义.海南医学院学报,2016,22(15):1722～1725.

5 尹寒露,阴建,陈立文,等.分类检测非小细胞肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞的临床价值.中华肿瘤杂志,2016,38(9):677～681.

6 温坚,何志江,刘云军,等.小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞检测的临床意义.黑龙江医学,2016,40(2):151～153.

7 Wan J W,Gao M Z,Hu R J,et al.A Preliminary Study on the Relationship Between Circulating Tumor Cells Count and Clinical Features in Patients with Non-small Cell Lung Cancer.Journal of Thoracic Disease,2016,8(6):1029～1031.

8 Kim H,Chang M P,Kim S H,et al.Persistent Pulmonary Subsolid Nodules: Model-based Iterative Reconstruction for Nodule Classification and Measurement Variability on Low-dose CT.European Radiology, 2014,24(11):2700～2708.

9 Lou J T,Wang X Q,Liang X H,et al.Quantitation of Rare Circulating Tumor Cells in Non-small Cell Lung Cancer by Ligand-targeted PCR.Plos One,2013,8(12):e80458.