笼养山麻鸭适宜采精频率和输精参数的研究

郭海宁，陈开丰＊，苏红卫，刘三凤，何幼军，丁君辉，毛辉荣*

(1.江西农业大学 动物科学技术学院，江西 南昌 330045；2.江西天韵农业开发股份有限公司，江西 南昌 330016；3.江西省畜牧技术推广站，江西 南昌 330044)

山麻鸭是我国优良的小型蛋鸭品种，具有体型小、早熟、产蛋多、蛋质量适中、适应性强和饲料报酬高等特点。由于养殖资源的日益短缺和新《环境保护法》的实施，传统的散养模式正逐步向集约化笼养模式转变，因此蛋鸭的繁殖方式也由自然交配转为人工授精。为解决笼养蛋鸭的繁殖瓶颈，减少种公鸭的饲养量和提高其利用率，加快配套系种鸭选育、育种工作，研究笼养蛋鸭的人工授精技术显得更加重要、紧迫[1]。我国的家禽人工授精技术研究开始于20世纪30年代，目前鸡的人工授精技术相对成熟并得到广泛应用，火鸡、鹅、番鸭等也获得了较大的进展，人工授精技术对笼养模式的推广、加速繁育与育种工作起到了极大的推动作用[2-4]。但是目前对家鸭人工授精的研究却甚少，缺乏较为系统、详细的研究及大规模的推广。早期的鸭人工授精研究主要集中在采精和输精方法之上[5-6]，而对公鸭的精液品质和采精频率、稀释液种类、稀释倍数、母鸭的输精时间、部位(深度)、输精量、输精频率等的研究报道相对较少，在技术相对成熟的半番鸭生产中因使用的母本是家鸭，因而对家鸭的人工授精具有一定的参考价值[7-14]。山麻鸭是我国知名的小型蛋用型地方鸭品种，本研究选择该鸭种作为研究素材，开展种公鸭的采精训练和采精频率观察试验，同时对其精液品质进行鉴定；随后对山麻鸭人工授精过程中涉及的包括输精量、精液稀释及输精间隔等参数进行探索和优化试验，试验结果将为笼养山麻鸭的人工授精技术标准化建立和推广提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料及试验地点

试验选用90日龄山麻鸭公鸭60羽，母鸭500羽双笼饲养。其中雄性种鸭的选择依据是：繁殖性能方面表现为具有发达的性指羽、性欲强、生殖器官发育正常；外貌部分呈现出前胸宽且饱满、头颈粗壮等。试验器具和试剂包括玻璃集精杯、自制采精按摩器、普通显微镜、电热水浴锅、单道式移液枪、细胞计数板及用于精液稀释的生理盐水等。在试验期间保持适宜的饲养环境，饲料统一采用赣达股份有限公司的全价配合颗粒饲料，试验全程在江西天韵种鸭场进行。

1.2 精液采集及人工授精

试验所选公鸭饲养至150日龄，采用传统的“背部按摩法”开始进行人工采精调教训练，人工采精、授精所需器械必须做到清洁、无菌和干燥，采精训练时间为3周，频率为每周2～3次。为避免人工采精造成公鸭生殖器受损，采精后必须保证其生殖器顺利回缩到腹腔。为防止采精过程公鸭排出粪、尿污染精液，每次采精前停料停水至少2 h，并将集精杯置于40 ℃水浴锅内。采得的精液在25 ℃左右环境中遮光保存，或手握装有精液的集精杯，试验完成后用具均需冲洗干净并进行高温消毒。采用“翻肛输精法”进行输精，输精深度为5～6 cm，为避免不同公鸭的个体差异，保证试验的准确性，输精采用混合精液在每天08：00—10:00进行输精，首次输精时连续输精2 d且精液需在30 min内使用完。

1.3 不同采精频率处理

最后两次采精训练时测定各个公鸭的精液量及精液品质，将两次采精精子活力均在85%以上、精液量均超过0.15 mL的30羽公鸭个体选留下来进行采精频率试验，按照采精间隔时间不同将30羽公鸭随机分成3组，各组均为10羽。第1组为每天采精，第2组采精间隔时间为1 d即隔日采精，第3组采精间隔时间为2 d。每组采集共4批次精液，对每组每批次每个个体采集的精液测量精液量，并用细胞计数法进行精子密度与精子活力测定，方法参照2005年王锋主编《动物繁殖学实验教程》实验六。

1.4 不同稀释液与输精量处理

从所饲养群体中选留384只健康、均匀的山麻鸭母鸭，随机分成六个试验组，每小组64只母鸭，设2种稀释液10倍稀释(稀释液III、生理盐水)，稀释液的温度为25～35 ℃，输精量设0.1 mL、0.2 mL，并以原精液组(0.01 mL、0.02 mL)为对照。首次输精后第2天开始收集种蛋，输精间隔为3 d，剔除破蛋、畸形蛋后每5 d入孵并于第7天照蛋，统计受精蛋数，共收集28 d种蛋。比较分析山麻鸭不同精液稀释方式和输精量对其受精效果的影响。

按照稀释方式不同将试验组分成3组：第1组为原精液输精组，即不稀释组，记为组I；第2组以生理盐水为稀释液进行稀释，记为组Ⅱ；第3组为番鸭精液专用稀释液组，记为组Ⅲ，该精液稀释液配制参考朱志明等[15]专利配方(专利号：CN103070162A)，配制100 mL稀释液具体方法为取0.9 g葡萄糖、1.65 g谷氨酸钠、0.2 g氯化镁、0.8 g碳酸氢钠、0.5 g磷酸二氢钾和7万国际单位的链霉素，最后加蒸馏水定容至100 mL。

1.5 不同输精间隔处理

以输精间隔2，3，4，5，6，7 d为参数，设计6个试验组，其中公鸭采精间隔采用实验1.3中结论的最佳采精频率(间隔2 d)，每组每次输精时都使用新采集的混合精液；稀释液和输精量采用试验1.4中的最佳稀释液(生理盐水)和输精量(0.1 mL)。各组首次输精后都于第2天开始收集种蛋，剔除破蛋、畸形蛋后每5 d入孵并于第7天照蛋，统计受精蛋数，共收集30 d种蛋。分析比较不同输精间隔对山麻鸭受精率、出雏率和健雏率的影响。

1.6 数据分析

运用Excel软件进行数据整理，采用SPSS20.0软件进行方差分析，组间显著性差异检验采用LSD、Duncan法进行比较。

2 结果与分析

2.1 采精频率对笼养山麻鸭精液品质的影响

采精间隔分别为0，1，2 d时对笼养山麻鸭精液品质的影响见下表。

表1 每天采精组精液品质结果

同列数据后不同大小写字母分别表示在1%和5%水平差异显著，下同

Data followed by different capital or small letters means the significance at 0.01 or 0.05 level,the same below

由表1、表2、表3可知，每天采精组，随着采集次数增加，精液量和精子密度呈显著(P<0.05)降低态势，精子活力有降低趋势，但差异不显著(P>0.05)，第3次采集后呈现显著(P<0.05)下降，第4次与第3次无差异；采精间隔1 d时，精液量和精子密度每相邻的2 d差异不显著(P>0.05)，但随着采集次数增长呈一个明显下降趋势，精子活力前3次采集差异不显著(P>0.05)，第4次表现显著(P<0.05)；间隔2 d组，精液量、精子密度、精子活力和有效精子随着采集次数增长表现无显著差异(P>0.05)。

表2 间隔1 d组采精组精液品质结果

表3 间隔2 d组采精精液品质结果

2.2 输精量与稀释液对笼养山麻鸭受精率的影响

采用不同的输精量0.1 mL、0.2 mL、(原精液组0.01 mL、0.02 mL为对照)与3种不同稀释液(I、II、III)进行输精，对受精率的影响见表4。

表4 输精量及不同稀释液对受精率的影响

由表4可知，当输精量为0.1 mL时，不同输精量处理的平均受精率为88.13%，当输精量为0.2 mL时，不同输精量处理的平均受精率为89.96%，两者差异不显著(P>0.05)。其中在0.1 mL输精量时生理盐水组极显著高于原精液对照组和稀释液III组(P<0.01)，且原精液组显著高于稀释液III；在0.2 mL输精量时，生理盐水组与原精液对照组都极显著高于稀释液III(P<0.01)，其中生理盐水组最高为91.56%。

2.3 不同输精间隔对笼养山麻鸭受精率及孵化效果的影响

输精间隔2，3，4，5，6，7 d时对笼养山麻鸭受精率及孵化效果影响的结果如表5所示。由表5可知，间隔2 d和3 d组受精率差异不显著(P>0.05)，且极显著高于间隔4 d、5 d、6 d和7 d组的受精率(P<0.01)；各组间出雏率无显著(P>0.05)差异，5 d组最高；但健雏率最高的为5、6 d组，显著高于2 d、3 d、4 d和7 d组(P<0.05)。

表5 不同输精间隔对受精率及孵化效果的影响结果

3 讨 论

3.1 采精频率对山麻鸭公鸭精液品质的影响

影响种鸭精液品质的因素颇多，除品种、遗传、个体差异、营养与饲养环境外，采精频率同样是关键因素之一。本试验对山麻鸭的采精频率研究，对提高山麻鸭种公鸭的利用效率具有较高的参考价值和实践指导意义。本试验中发现，平均每只山麻鸭人工采精量为0.20～0.25 mL，每毫升精液的精子密度为2.70×109个，与陈章言等[11]在番鸭按摩采精获得的精液量(0.89±0.13)mL/只相比，明显偏少；但山麻鸭的精子密度明显高于番鸭[16](1.85±0.19)×109个/mL，同时与王光瑛等[17]研究番鸭结果非常接近，与宋卫涛[18]研究的苏邮1号蛋鸭单次采精量为(0.17±0.05)mL，精子密度为(25.52±4.73)×108个/mL也基本趋于一致。此外，本研究还发现在每日采精的情况下，总精液量、精子活力和精子密度均随着采精次数增加呈现显著下降趋势，这与辛清武[19]在肉鸭间隔采精组中的试验结果一致，该小组研究发现隔日采精组，随着次数增加上述精液品质的参数均呈现一定下降趋势。相较于每日采精组和隔日采精，本试验中间隔2 d组，总精液量、精子活力和精子密度并未随着次数增加发生明显变化，这与辛清武[19]和Tan[20]在肉鸭和番鸭中的报道相一致。由此可见，在3种采精间隔时间模式下，间隔2 d采精的公鸭可以保持较好的精液品质，这可能得益于种公鸭采精间隔时间长可得到一定的休养，从而为下次采精提供充足的体能。

3.2 输精量与稀释液种类对山麻鸭受精率的影响

本试验中对3种精液稀释类型各自设定的两组人工授精输精用量，相同模式下不同输精量对山麻鸭的平均受精率均有一定影响，但差异程度不一，其中以生理盐水作为稀释液的两组输精量对受精率的影响均为最高且两者间没显著性差异。

在原精液输精组中，每只母鸭的输精量为0.02 mL时，其受精率(91.28±0.26%)显著高于0.01 mL组(87.03±0.16%)，出现这种现象的原因可能是输入的原精液量过少使得输精过程中粘连损耗或带出导致有效精子数不足，进而受精率下降；组Ⅱ中两种输精量梯度(0.1 mL/只和0.2 mL/只)对受精率的影响无显著差异，该结果与宋卫涛等[21]利用生理盐水对“苏邮1号”种公鸭原精液稀释20倍生理盐水的分析结果相一致，这可能与人工输精时输入母鸭体内有效精子的达到了满足受精的最低有效量时，受精率不再随输精量的提高而显著增加有关；因此，在人工授精时精液中精子数达到一定数量后，仅增加输精量，并不能有效取提高受精率；采用番鸭专用精液稀释液的III组中，当每只母鸭输精量为0.2 mL时，平均受精率可达到87.04%显著高于用量为0.1 mL组的受精率(85.93±0.58%)，这可能得益于精液稀释液能够通过模拟精子原有的缓冲空间，满足精子体外存活需要的营养因子，减缓精子的新陈代谢速度从而减少代谢过程中诸如乳酸类的不利于精子存活的物质，同时有效提高精子在外的存活率和寿命，进而提高人工授精的受精率[22]。本试验中所设置的3组稀释类别的输精率都达到了较高水平，此结果与刘思阳等[23]在比较生理盐水和蛋黄葡萄糖溶液对半番鸭输精率影响的报道中的结果差异较大，后者平均受精率均低于70%，这可能与试验对象的品种差异有关。但纵观本试验中的3种稀释类型对输精率的影响可见，生理盐水作为稀释液时，两个输精量组别的受精率最高，平均达到91.5%，均显著优于原精液Ⅰ组和专业精液稀释液Ⅲ组，这却与王光瑛等[17]研究发现磷酸盐稀释液对番鸭的精液稀释效果最佳颇有不同，事实上，本研究中Ⅲ组使用的专业精液稀释液所适用的对象就是番鸭品种，而并非山麻鸭或其他麻鸭系列，因此由于试验动物属性甚至品种的不同，其所相适宜的精液的稀释液的配置也可能不同，但对于番鸭和山麻鸭二者相适应的精液稀释液不同的具体原因尚待进一步研究。

综上所述，本研究发现用生理盐水10倍稀释，并且输精量0.1mL时可以增加授精母鸭个数，可获得较好效果，在生产实践中既经济又实用。因而在间隔3 d输精时用生理盐水作为稀释液稀释10倍输入0.1 mL时不仅可以获得较高的受精率，也可提高种公鸭的利用效率和时限。

3.3 输精间隔对山麻鸭受精率的影响

在种鸭的人工采精和授精生产过程中，最佳输精频率的确定不仅直接影响着受精率和孵化率，同时对生产操作实用性和可行性同样至关重要[24]。在本试验1.4中得出在输精时使用生理盐水作为稀释液，稀释10倍输入0.1 mL时可以获得较高的受精率，为进一步探索是否有更佳的输精间隔，本研究设计间隔2，3，4，5，6，7 d 6组输精间隔进行深入探究，结果发现间隔2 d组和3 d组受精率无显著差异，但从实际生产考虑，3 d为输精间隔为最佳。目前，关于山麻鸭的人工输精间隔对受精率影响的研究还鲜见报道，但类似的研究在番鸭和半番鸭中确已不在少数，但报道的结果确不一。苏开波等[25]通过利用半番鸭为试验动物，研究发现间隔3 d进行一次输精的效率最优；而汤树生等[26]以番鸭为研究对象进行输精间隔研究确发现理想的输精间隔为5 d，同时上述两个研究小组最优输精间隔情况下的受精率均偏低。相反，在利用北京鸭和番鸭杂交的输精间隔优化试验中，Nadine等[27]发现输精间隔在2～4 d的受精率平均高达91.9%，效果最佳，该研究同时发现孵化的健雏率高低与输精间隔的时间呈正相关。这种趋势在其他团队的研究报道中也得到验证，呈现这种趋势的原因可能是输精间隔越短，相同时间内的输精次数就越多，相应的对于母鸭生殖器官的刺激和应激就越大，健雏率进而受到影响[28-29]。综上所述，采用输精间隔3 d可使山麻鸭达到较优的受精率和出雏效果。

4 结 论

笼养山麻鸭人工采精频率2 d最佳，并采用生理盐水10倍稀释，输精量0.1 mL/只、间隔3 d授精的输精参数可获得较优的受精和孵化、出雏效果。

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