王淑妍,黄春鑫,李璐,张慧芝,张士岭
表皮生长因子受体(EGFR)广泛表达于多种肿瘤细胞中,使肿瘤细胞发生过表达,并引起突变导致肿瘤细胞生长的失控、侵袭性增加。人表皮生长因子受体2(HER2)属于表皮生长因子受体家族中的一员,在许多恶性肿瘤表达异常增高,在肿瘤的发生、发展中起重要作用,是癌症的预后的重要指标,目前针对HER2蛋白的靶向治疗药物在临床应用中取得了显著疗效。笔者利用免疫组化方法检测胰腺导管腺癌组织中EGFR及HER2蛋白表达的状态,探讨在胰腺导管腺癌中EGFR与HER2蛋白表达是否存在相关性,为胰腺导管腺癌个体化分子靶向治疗提供更充足的依据。现将结果报道如下。
1.1 一般资料 选取 2014年 7月至2017年6月间宁波市临床病理诊断中心确诊的胰腺导管腺癌标本65份(65例患者)。其中男31例,女34例;年龄31~81岁(其中<60岁者30例,≥60岁者35例),中位年龄62.50岁;高分化6例,中分化31例,低分化28例;肿瘤直径为1.6~9.52cm(其中<3cm者20例,≥3cm者45例);胰腺周围组织浸润者44例,无浸润者21例;有淋巴结转移者35例,无淋巴结转移者30例;有肝转移者4例,无肝转移者61例。以胰腺导管腺癌组织为实验组,癌旁组织为对照组。
1.2 方法 所有标本均经 10%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,连续切片厚3~5 m,常规HE染色及免疫组化染色。免疫组化采用EnVision二步法,用罗氏Ventana Benchmark XT全自动免疫组化仪染色,一抗EGFR(5B7)及GS(4B5)均购自罗氏诊断产品(上海)有限公司,染色步骤按照试剂盒和抗体说明书操作。以PBS替代一抗作阴性对照。
1.3 结果判定 EGFR及HER2的阳性部位均位于细胞膜(封三彩图4),其中EGFR的免疫组化结果判定参照以下标准:无特异性膜染色或<10%的癌细胞膜染色为(-),≥10%的癌细胞有完整或不完整膜染色为(+);按照染色强度,分别判定为(+)、(2+)和(3+)。HER2 免疫组化结果判定参考《胃癌HER2检测指南》[1]推荐:无特异性膜染色或<10%的癌细胞膜染色为(-);≥10%的肿瘤细胞微弱或隐约可见膜着色,仅有部分细胞膜着色染色为(+);≥10%的肿瘤细胞有弱到中度的基底侧膜、侧膜或完全性膜着色为(2+);≥10%的肿瘤细胞基底侧膜、侧膜或完全性膜强着色为(3+)。胰腺导管腺癌HER2表达显示更强的异质性,癌细胞的不完全性膜着色比较常见(封三彩图5~6)。
1.4 统计方法 采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析,计数资料采用2检验或Fisher精确概率法,相关性检验采用Pearson检验。<0.05为差异有统计学意义。
表1 EGFR、HER2在胰腺导管腺癌组织中的表达与临床病理参数间的关系
2.1 EGFR在65例胰腺导管腺癌组织中的阳性率为61.5%(40/65),阴性率为38.5%(25/65),其中36.9%(24/65)为(+),20.0%(13/65)为(2+),4.6%(3/65)为(3+)。对照组中 EGFR阳性率为23.1%(15/65),均为(+),两者差异有统计学意义(2=19.7,P< 0.05)。而 HER2蛋白表达阳性其中有7例样本EGFR蛋白表达阳性,在胰腺导管腺癌中EGFR蛋白表达与 HER2蛋白成正相关(r=0.249,P < 0.05)。在胰腺导管腺癌组织中的阳性率为12.3%(8/65),阴性率为 87.7%(55/65),其中 9.2%(6/65)为(+),3.1%(2/65)为(2+)。对照组中HER2阳性率为0,两者差异有统计学意义(P=0.00)。
2.2 EGFR、HER2在胰腺导管腺癌组织中的表达与临床病理参数间的关系EGFR蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、胰周浸润、淋巴结转移及肝转移均无关(均P>0.05)。HER2蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度均无关(均P>0.05),但与胰周浸润、淋巴结转移和肝转移均有关(均P<0.05)。见表1。
2.3 在65例胰腺导管腺癌患者组织中有40例EGFR蛋白表达阳性,8例HER2蛋白表达阳性,两者表达差异有统计学意义( 2=29.25,P<0.05)。8例HER2
EGFR家族属于酪氨酸激酶受体大家族,包括 EGFR(ErbB1)、HER2/neu(ErbB2)、HER3(ErbB3)和 HER4(ErbB4)。EGFR基因定位于染色体7p12,由 1186个氨基酸残基构成的170kD跨膜糖蛋白,在胰腺癌中EGFR对肿瘤的发生、发展也起重要作用[2-3]。本研究结果表明,EGFR在胰腺导管腺癌组织中表达率为61.5%,在癌旁组织中的表达率为23.1%,两者表达差异有统计学意义(P<0.05);EGFR蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、胰周浸润、淋巴结转移及肝转移均无关(均P>0.05),与国内外报道基本一致[4-5]。
HER2属于EGFR家族由HER2基因编码的络氨酸蛋白激酶,具有自动磷酸化作用。HER2的过表达通过启动多种转移机制及影响上皮细胞钙黏蛋白合成等增加肿瘤细胞的恶性程度及迁移能力,通过影响基质金属蛋白酶的表达促进肿瘤细胞的浸润,在MAPK、PI3K/Akt等信号通路上对血管内皮生长因子调控肿瘤细胞的生长与转移[6]。研究表明,胰腺癌中HER2蛋白表达与淋巴结转移显著相关,特别是在有肝转移的病例中更易检测到HER2蛋白表达和基因扩增[7]。在本研究中,具有肝转移的6例胰腺导管腺癌组织中均检测到 HER2蛋白表达。有研究表明,增加HER2的表达,则增加肿瘤发生和癌细胞转移潜能,其表达程度与细胞的侵袭性相关,表达强的胰腺癌具有更强的侵袭性[8];本次研究中也发现10例 HER2蛋白表达的样本有9例发生胰周浸润。和EGFR蛋白表达相似,HER2蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度均无关(均 P>0.05),这可能与肿瘤的形成及发展受多因素影响有关。
本实验结果显示胰腺导管腺癌组织中HER2和EGFR蛋白表达具有正相关性,但HER2蛋白表达阳性率显著低于EGFR蛋白表达阳性率,且不表达于癌旁组织中;这表明HER2蛋白表达具有一定的肿瘤特异性。在乳腺癌的研究中已证实 HER2可以成为肿瘤治疗的靶标,在胰腺导管腺癌的靶向治疗中HER2也具有成为靶标的可能[9]。
综上所述,在胰腺导管腺癌诊治中EGFR不能作为一个独立的预测因素来判断肿瘤的分化、浸润以及转移,结合HER2的检测预测肿瘤的恶性程度、浸润转移及预后可能会更有效;并且针对HER2阳性的患者,尤其是失去手术机会的患者进行靶向治疗,可能会使今后一部分胰腺导管腺癌患者的死亡风险降低。
参考文献:
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