非小细胞肺癌患者ALK、EGFR、KRAS基因的检测及临床病理特征

杨耀湘

在常见的恶性肿瘤中, 肺癌就是其中的一类, 同时还具有高死亡率。目前, 诊断和医治的技术虽然呈上升的趋势, 但是, 就整体水平而言, 肺癌患者的预后效果还是不能使人满意［1-6］。其中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)、表皮生长因子受体(epidermalgrowth factor receptor,EGFR)、Kirsten鼠肉瘤(Kirsten rat sarcoma, KRAS)基因是肺癌的热点靶向基因, ALK、EGFR已经有与之相对应的靶向药物, 在临床治疗中, 取得很好的疗效。本文研究了汉族非小细胞肺癌患者中ALK、EGFR、KRAS基因突变状态及相关的临床病理特征, 旨在促进分子靶向治疗的发展, 改善非小细胞肺癌患者的预后。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年3月～2017年3月本院收治并确诊的100例非小细胞肺癌患者作为研究对象, 以上患者病理组织均用蜡块保存。所有患者中, 男73例, 女27例；年龄≥60有62例, ＜60岁有38例；腺癌患者69例, 鳞癌患者20例, 其他癌症患者11例。

1.2 方法

1.2.1 ALK融合基因的检测 本组患者均利用VENTANA检测试剂盒和VENTANA BenchMark XT及BenchMark GX自动切片染色仪实施ALK交融基因检测, 一抗克隆号为VENTANA anti-ALK(DSF3), 操作的步骤需要遵循说明书上的要求。

1.2.2 EGFR和KRAS基因突变检测 部分患者采用PCR法检测EGFR与KRAS基因突变情况, 试剂盒的生产商是厦门艾德公司, 是检测EGFR 29种基因突变的试剂盒(amplification refractory mutation system, ARMS)以及 KRAS基因7种突变检测试剂盒。EGFR基因的检测点位为18外显子G719A、G719S等；KRAS基因的检测位点为位于2号外显子12密码子的6个突变位点(G1y12Ser、G1y12Asp、G1y12Cys、G1y12A1a、G1y12Va1、G1y12Arg)以及位于 13密码子的1个突变位点(G1y13Asp)。操作步骤依据说明书。

1.3 观察指标 观察及分析ALK融合基因异常、EGFR基因突变、KRAS基因情况, 并比较不同癌症类型上述基因突变阳性率。

1.4 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件进行数据分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验或Fisher精确概率法进行检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 ALK融合基因检测情况 100例患者全部进行了ALK融合基因检测, 其中腺癌患者基因突变阳性率为23.19%, 明显高于鳞癌患者的5.00%, 差异具有统计学意义(χ2=21.534,P＜0.05)。见表 1。

表1 100例患者ALK融合基因检测情况［n(%)］

2.2 EGFR基因突变检测情况 有76例患者进行EGFR基因突变检测, 其中腺癌患者基因突变阳性率为46.55%, 明显高于鳞癌患者的27.27%, 差异具有统计学意义(χ2=6.580,P＜0.05)。见表 2。

表2 76例患者EGFR基因突变检测情况［n(%)］

2.3 KRAS基因突变检测情况 有24例患者进行KRAS基因突变检测, 其中腺癌患者基因突变阳性率为50.00%, 明显高于鳞癌患者的0, 差异具有统计学意义(χ2=3.958, P＜0.05)。见表3。

表3 24例患者KRAS基因突变检测情况［n(%)］

3 讨论

表皮生长因子受体激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKI)是最先成功的研发出的抗击肿瘤的药物之一, 其是特定的靶向药物, 其中典型的药物代表为吉非替尼、厄洛替尼, 目前在临床治疗上已经被广泛的推广使用, 取得良好的效果。但是, 对于药物的耐受这一难点, 目前还没有得到良好的解决。有学者［7］对115815例非小细胞的肺癌患者, 对EGFR的基因测验结果通过Meta分析显示得出：30466例患者检测结果属于阳性, 女性、腺癌患者是其主要的发生群体。在此次研究中, 46.05%属于EGFR的突变结果, 也是多发生在腺癌的患者之中。在此次研究中, EGFR的突变率和相关学者的研究结果进行对比发现, 前者高于后者, 但是, 与之相关的临床症状和相关学者所得出的结果基本相似, 女性群体属于多发群体, 以腺癌为主, 偶尔会有其他类型的肿瘤, 如：鳞癌、腺鳞癌等［8］。但是还有其他的观点认为年龄大的患者是EGFR突变的高危群体［9］。

EGFR信号转导通路中的下游调控基因就是KRAS基因,发现的时间是在20世纪60年代, 但是, 到目前为止还没有发现有效的治疗药物, 有学者经过对全世界的41个研究的结果, 发现当KRAS基因突变的时候, 非小细胞肺癌患者的预后水平将变得很差, 同时KRAS基因突变和EGFR-TKI的耐药性具有密切的关系。有学者［6］检测332例非小细胞肺癌的KRAS基因发现, 7.2%的属于阳性突变, 但是, 对于年龄和性别都没有发现对产生阳性突变之间的关系。在研究中发现, 年长具有吸烟史的男性, 组织学类型呈现腺癌特征的患者KRAS基因突变阳性的较多［10］。在此次研究中, KRAS基因突变阳性率为33.33%, 组织学类型多呈现在腺癌患者中, 本结果和其他的研究数据相一致［11］。本次研究中, 使用PCR法检测EGFR及KRAS, 虽快捷, 但是有一定的风险, 例如假阴性。

总之, 非小细胞肺癌患者中ALK、EGFR、KRAS基因突变的发生几率较高, 同时ALK、EGFR、KRAS基因突变和患者的临床症状有关联, ALK与EGFR或KRAS突变并不是绝对的彼此之间互相排斥, 个别患者有可能会有双基因突变的产生。

［1］ 杨长绍, 杨延龙, 丁晓洁, 等.非小细胞肺癌患者肿瘤组织多驱动基因联合检测及其临床意义.临床与实验病理学杂志, 2017(11):1183-1187.

［2］ 林小梅, 莫娟梅, 邹敏, 等.EGFR突变的非小细胞肺癌患者EML4-ALK融合基因的检测及其临床特征分析.中国病理生理杂志, 2012, 28(6):1135-1139.

［3］ 张海燕, 王捷, 陈晓东, 等.非小细胞肺癌患者EML4-ALK融合基因的检测及其临床病理特征分析.生物技术通讯, 2015,26(3):377-380.

［4］ 马玲, 单莉, 张黎, 等.新疆维吾尔族非小细胞肺癌患者EGFR、KRAS基因突变与临床病理特征的关系.实用临床医药杂志,2014, 18(5):30-33.

［5］ 邱田, 凌云, 山灵, 等.非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体Kras基因突变检测及与临床病理特征的相关性.中国肿瘤临床与康复, 2015(6):678-680.

［6］ 王敬慧.肺腺癌患者EGFR、EML4-ALK、KRAS基因状态的临床研究.北京市结核病胸部肿瘤研究所, 2014.

［7］ 李筱妹, 李志强.易瑞沙治疗晚期肺腺癌的临床疗效观察.北方药学, 2016, 13(1):8-9.

［8］ 高峨嵋, 赵军, 卓明磊, 等.克唑替尼治疗晚期患者单中心回顾性分析.中国肺癌杂志, 2016, 19(3):161-168.

［9］ 张扬.肺腺癌致癌基因突变研究.复旦大学, 2013.

［10］ 董丹丹, 徐钢, 李芳华, 等.肺腺癌EGFR、KRAS基因突变、ALK融合蛋白状态分析.实用癌症杂志, 2017, 32(9):1393-1397.

［11］ 刘静, 姜桔红, 顾莹莹, 等.非小细胞肺癌患者ALK, EGFR及KRAS基因的检测及临床病理特征.临床与病理杂志, 2017,37(6):1146-1152.