Gab2在宫颈癌组织中的表达及临床意义

张燕 成龙 段文丽 刘霄 周航

[摘要]目的 探讨Gab2在宫颈癌组织中的表达情况与临床病理特征的相关性。方法 随机选取遵义医学院附属医院病理科保存的2012年1月～2013年12月经病理确诊的80例宫颈癌组织标本及20例正常宫颈组织标本，分别采用免疫组织化学实验方法检测Gab2在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达情况，并结合临床病理资料进行统计分析。结果 Gab2蛋白在80例宫颈癌组织中的阳性表达率为58.75%（47/80），而在20例正常宫颈组织中仅3例呈弱阳性表达，阳性表达率为0.00%，两组结果比较差异有统计学意义（P<0.05）。在宫颈癌组织中，Gab2蛋白的表达水平与淋巴结转移呈正相关（P<0.05），与年龄、肿瘤大小、组织学分级及FIGO分期无显著相关性（P>0.05）。Gab2高表达患者的复发转移率显著高于Gab2低表达患者（P=0.001）。结论 Gab2可能在宫颈癌发生和进展中起着重要作用，可能具有作为宫颈癌预后判断标志物的潜能。

[关键词]宫颈癌；Gab2；免疫组织化学；淋巴结转移

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）2（b）-0008-03

Expression and clinical significance of Gab2 in cervical cancer tissue

ZHANG Yan CHENG Long DUAN Wen-li LIU Xiao ZHOU Hang

Department of Abdominal Oncology，Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Guizhou Province，Zunyi 563000，China

[Abstract]Objective To investigate the correlation between the expression of Gab2 in cervical cancer tissue and the clinical pathological features.Methods 80 cervical cancer specimens definitely diagnosed by pathology from January 2012 to December 2013 and 20 normal cervical tissue specimens which were stored in our Department of Pathology were randomly selected in our hospital.The immunohistochemical method was used to detect the expression of Gab2 in cervical cancer tissues and normal cervical tissues，and was statistically analyzed together with the clinical and pathological data.Results The positive expression rate of Gab2 in 80 cervical cancer tissues was 58.75% （47/80），and in the 20 normal cervical tissues，only 3 cases were presented with weak positive expression.The rate of positive expression was 0%，which was displayed a statistical difference （P<0.05）.The expression level of Gab2 protein in cervical cancer tissues was positively correlated with lymph node metastasis （P<0.05），but didnt present with great correlation with age，size of tumor，histological grading or FIGO stage （P>0.05）.The recurrence and metastasis rate in patients with high Gab2 expression was significantly higher than that of low expression of Gab2 （P=0.001）.Conclusion Gab2 may play an important role in the occurrence and progression of cervical cancer，and may be considered as a potential for prognostic marker of cervical cancer.

[Key words]Cervical cancer；Gab2；Immunohistochemistry；Lymph node metastasis

宫颈癌（cervical cancer，CC）在我国女性生殖道恶性肿瘤中发病率位居第一[1]，淋巴结转移发生率高、局部复发和远处转移是治疗失败的主要原因，严重影响着女性的身心健康。Gab2（Grb2-associated binding protein 2，Gab2）屬于Gabs蛋白家族（Grb2-associated binder family proteins）的多位点衔接蛋白[2]，具有潜在的原癌基因特性，在多种恶性肿瘤的发生、发展中有着重要作用，如在肺癌、乳腺癌及结直肠癌等肿瘤中显著表达[3-5]。然而，有关Gab2蛋白在宫颈癌中的表达模式和临床意义尚不清楚。本实验通过免疫组织化学法检测Gab2在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系，评估Gab2在宫颈癌预后判断标志物的潜在临床价值，现报道如下。

1材料与方法

1.1材料

选取遵义医学院附属医院病理科保存的2012年1月～2013年12月经病理确诊的80例宫颈癌组织标本，取材前均无化疗或放疗病史，年龄33～74岁；病理类型：72例鳞癌，6例腺癌，2例其他类型癌（包括小细胞癌1例，腺鳞癌1例）；组织学分级：低中分化48例，高分化32例；临床分期：按FIGO分期，Ⅰ～Ⅱ期40例，Ⅲ～Ⅳ期40例；其中42例有淋巴结转移，38例无淋巴结转移。选取同期的20例正常宫颈组织标本作为对照组，年龄31～67岁。上述蜡块经4 μm厚度连续切片，分别进行免疫组化染色。

1.2实验方法

应用免疫组化PV-9000二步法检测Gab2的表达情况。HRP标记的山羊抗兔多克隆抗体、免疫组化试剂盒PV-9000和DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，Gab2兔抗人单克隆抗体购自Origene公司。实验步骤依照PV-9000免疫组化试剂盒说明书严格操作，采用PBS液替代一抗做阴性对照。

1.3结果判定标准

Gab2蛋白主要表达于细胞质，故细胞质染色呈黄色或棕褐色为Gab2蛋白阳性表达。每张免疫组化切片随机选择3个不同的视野（×200）观察，并判读阳性表达强度和阳性率。染色结果采用半定量分析方法，以染色强度结合阳性细胞数百分比进行评分。染色强度以多数细胞呈现的染色强度并减去背景着色计分，无明显着色为0分，轻微为1分，中度为2分，重度为3分。阳性细胞百分比：0～5%为0分，>5%～25%為1分，>25%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%为4分。对每个视野均进行染色强度计分与阳性细胞百分比评分，最终评分以阳性细胞百分比与染色强度的加和：0分为阴性（-），>0～<4分为弱阳性（+），4～6分为中度阳性（++），>6～7分为强阳性（+++），-、+视为低表达，++、+++视为高表达。阳性率=阳性病例数/总病例数×100%。

1.4随访

80例宫颈癌患者通过规范治疗后，均按宫颈癌规定标准随访时间进行定期随访，通过门诊或电话随访，了解其复发及转移情况，随访内容包括临床症状、妇科检查、CT或MRI等，随访截止时间为2017年5月。其中失访5例，随访率为93.75%。

1.5统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理，采用χ2检验或Fisher确切概率法进行数据分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1免疫组织化学检测Gab2蛋白在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达情况

Gab2蛋白主要表达于细胞质，细胞核中未见明显表达。检测的20例正常宫颈组织中，仅3例呈弱表达，其余均为阴性。80例宫颈癌组织中，阳性47例，阴性33例，阳性率为58.75%，其中鳞癌、腺癌、其他类型癌Gab2的阳性表达率分别为58.33%、66.67%、50.00%，均显著高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05），但三组间比较差异无统计学意义（P>0.05）（表1、图1）。

2.2 Gab2在宫颈癌组织中的表达情况与其临床病理特征的相关性

Gab2蛋白在宫颈癌中的表达水平与有无淋巴结转移呈正相关（P<0.05），而与年龄、肿瘤大小、组织学分级、FIGO分期无明显相关性（P>0.05）（表2）。

2.3 Gab2蛋白表达水平与宫颈癌复发转移的关系

所有患者随访时间均>3年。47例Gab2高表达的宫颈癌患者中，除2例失访外，24例发生局部盆腔复发或远处转移，复发转移率51.06%；而33例Gab2低表达患者中，3例失访，5例出现了局部复发或远处转移，复发转移率15.16%，差异有统计学意义（P=0.001）。

3讨论

目前研究提示，Gab2是一个重要的癌症相关基因[6]，其定位于11q13.4～q13.5，蛋白分子量为97～100 kD，包含多个特殊结构，如N端的PH结构域、中间富含脯氨酸的PRD结构域及C-端的多个酪氨酸残基序列[7]。其中PH结构域能识别如磷酸肌醇类物质的膜成分，参与Gab2的膜定位；富含脯氨酸的PRD和酪氨酸残基序列可与SH-3和SH-2结构域结合，在生物活性分子刺激下，Gab2被酪氨酸磷酸化激活，通过与SHP-2、PI3K等信号分子的相互作用而激活各种信号通路，如经典的PI3K/AKT、SHP2/RAS/ERK通路[8-10]。近年来的研究提示，Gab2蛋白在多种恶性肿瘤中存在过表达[11]，包括乳腺癌[4]、急性骨髓性白血病[12]、肺癌[3]、卵巢癌[13]、胃癌[14]、结肠直肠癌[5]、黑色素瘤[15]和胶质瘤[16]等。上述研究显示，Gab2过表达与肿瘤的恶性程度有关，如Gab2蛋白能促进HER-2诱导的乳腺癌的发生和转移[4，17]；Gab2通过上调E-ca的表达，激活PI3K/Zeb1通路从而增强卵巢癌细胞的迁移及侵袭能力[13]；而在结直肠癌中，Gab2可通过上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）促进结直肠癌的转移[5]等。

本实验结果显示，80例宫颈癌组织中，Gab2表达的阳性率为58.75%，而正常宫颈组织中仅3例呈弱阳性表达，两组结果比较差异有统计学意义（P<0.05），提示Gab2在宫颈癌中存在过表达，但在鳞癌、腺癌、其他类型癌三组中比较差异无统计学意义（P>0.05）。因本实验腺癌及其他类型癌样本量较少，该实验结果尚需进一步大样本证实。另外，在宫颈癌组织中，Gab2的表达水平与有无淋巴结转移呈正相关（P<0.05），而与年龄、肿瘤大小、组织学分级、FIGO分期无显著相关性（P>0.05）。随访结果显示，Gab2高表达患者的复发转移率显著高于Gab2低表达的患者（P=0.001），提示Gab2过表达可能预示着肿瘤恶性程度高、易发生复发转移、预后差等，可能具有作为宫颈癌预后判断标志物的潜能。

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（收稿日期：2017-09-20 本文編辑：祁海文）