巴天酸模水提物对大肠杆菌致泻小鼠胃肠蠕动的影响研究

孙艳，黄志宏，陈朝喜*

（1.四川省凉山彝族自治州畜牧兽医科学研究所，四川 西昌 615042；2.西南民族大学生命科学与技术学院，四川 成都 610041）

巴天酸模又名土大黄、洋铁酸模、牛西西等，其茎和叶中含有维生素C、胡萝卜素及铁、硒、碘等丰富的营养物质，不仅是一种优良的饲用牧草，而且在民间常以根和叶入药，具有清热解毒、活血止血、通便杀虫的功效，在治疗多种皮肤病、出血症及各种炎症方面具有较高的药用价值[1]。本研究以大肠杆菌复制小鼠腹泻模型，初步探讨不同剂量巴天酸模水提物对感染小鼠胃肠蠕动的影响。

1 材料与方法

1.1 药材、试剂和供试菌株等 巴天酸模于2016年8月份采自四川省红原县西南民族大学青藏高原研究基地，经西南民族大学兽医药理学与毒理学实验室陈朝喜副教授鉴定为蓼科酸模属植物巴天酸模，采新鲜全草，自然风干后粉碎，置于恒温干燥箱内备用。大肠杆菌临床分离株从一例腹泻牦牛粪便样本中采集，经前期动物实验证实其具有较强的致腹泻作用。

胭脂红：临用前用生理盐水配成1%溶液；琼脂粉、MH肉汤和胰蛋白胨大豆肉汤：购自广东环凯微生物科技有限公司，临用前按照说明书配制备用；主要实验器材包括小鼠灌胃器、手术剪、眼科镊和透明尺；实验小鼠购自成都达硕实验动物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 巴天酸模水提物的制备 称量巴天酸模100g，加入10倍体积的去离子水后置于提取装置上，在加热回流条件下提取1h，提取3次，合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩至浸膏状。使用前取浸膏适量制成1g/mL的悬浊液，加入0.5%羧甲基纤维素钠混匀后备用。

1.2.2 巴天酸模水提物LD50测定 将63只体重18～25g的小鼠随机分成7组，饲养适应1周左右后，将巴天酸模水提物按照等比浓度梯度分别灌胃给药，并在给药24h内观察和记录各组小鼠的精神状态和死亡状况，参照改良寇氏法计算其LD50。

1.2.3 巴天酸模水提物对大肠杆菌致泻小鼠胃肠蠕动的影响 参考陈奇等[2]方法以临床分离的牦牛源大肠杆菌新鲜菌液腹腔注射小鼠，复制大肠杆菌腹泻模型。模型复制成功后，小鼠禁食12h。模型组和对照组每组各10只小鼠，将巴天酸模水提物分别按1/20 LD50（低剂量组）、1/10 LD50（中剂量组）和1/5 LD50（高剂量组）的药量灌服模型组小鼠，对照组小鼠以0.1mL/10g体重灌服生理盐水。15min后，每只小鼠均灌胃含1%胭脂红的生理盐水0.2mL，再经15min将各组小鼠全部脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道，剪开附着在肠管上的肠系膜，将肠管拉成直线。以幽门为起点，测量胭脂红在肠道内的移动距离和小肠（幽门至盲部）的全长，按照公式“胭脂红移动距离占小肠全长的百分比=胭脂红的移动距离/小肠全长×100%”计算，即得每组小鼠的肠推进率，比较各组之间的差异性。

2 结果

2.1 巴天酸模水提物LD50的测定 各组小鼠给药后，除了高剂量组部分小鼠出现焦虑、多动、排便次数相对增多等特征外，其他组小鼠没有任何异常，因此本试验未能测到其LD50。为避免后续试验中药物存在蓄积毒性，本研究对24h内未发生死亡的各组小鼠继续按照同样给药方法给药1周，除了高剂量组小鼠死亡1只外，其他各组小鼠与24h内给药的表现基本一样。

对高剂量组死亡小鼠进行剖检观察和病理学观察，发现实质器官心、肝、脾、肺、肾均未见任何眼观变化；病理组织学结果显示：少数心肌细胞明显肿大，胞浆消失，胞浆有大量空泡或裂隙，残存的胞浆呈颗粒状或丝网状，细胞核正常或明显肿大，染色质溶解呈空泡状，病变心肌细胞呈散在分布或2～4个小灶状分布；肾脏皮质部大量肾小管上皮细胞肿胀，胞浆淡染，胞浆内出现大小不一的空泡，残存的胞浆呈颗粒状或丝网状，多数病变细胞的细胞核溶解消失，病变肾小管多呈形状不规则的散在分布，病变肾小管超过50%；脾脏、肺脏和肝脏未观察到病变。

2.2 巴天酸模水提物对大肠杆菌致泻小鼠胃肠蠕动的影响 小鼠大肠杆菌腹泻模型复制成功后，小鼠均出现不同程度的腹泻现象。在给药巴天酸模水提物后，胭脂红在各组小鼠的肠推进率如图1所示。数据统计结果表明，大肠杆菌腹泻模型组小鼠的肠推进率为23.29%，低、中、高剂量组小鼠的肠推进率分别为35.72%、37.10%、48.25%。与腹泻模型组相比，高剂量组的肠推进率差异极显著，低剂量组和中剂量组差异显著。

图1 不同剂量巴天酸模对小鼠肠推进率的影响

3 结论与分析

前期体外抗菌试验结果表明，从红原县采集的巴天酸模等几种蓼科植物水提物对大肠杆菌的抑制作用存在不同程度的差异性（试验结果未发表）。基于此，本试验拟通过体内抗腹泻试验来验证其效果是否与体外一致。然而，本研究结果发现，随着巴天酸模水提物剂量的升高，各组小鼠的肠推进率也随着升高，说明巴天酸模水提物可以引起腹泻小鼠的胃肠蠕动增加。分析本试验出现此种结果的原因，主要有以下几点：

（1）巴天酸模化学成分和浓度的影响：Demirezer等[3]报道蒽醌是酸模属乃至蓼科植物中最具特征性的一类成分，而蒽醌类具有较强的下泻作用[4-5]。（2）巴天酸模采集时间和环境因素：本试验巴天酸模的采收时间为多雨的夏季，采收时植株内的化学成分对药材质量具有影响，因此后续工作要进一步证实并确定最佳采收期。此外，巴天酸模的生长环境对其质量的影响也较大，本试验药材样本采集于无污染的高原地区，避免了有害元素对试验结果的影响[6-11]。（3）胭脂红灌胃量和小鼠处死时间也会对试验结果造成一定的误差，加上剪取肠管时过度用力牵拉导致长度测量结果不准确，同样会引起误差。

参考文献：

[1]朱晶晶，王峥涛，张朝凤，等.酸模属植物中化学成分及其药理活性研究进展[J].中草药，2008，39（3）：450-454.

[2]陈奇，张伯礼.中药药效研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2016：280-290.

[3]Demirezer O L，Ayse K，Isabelle B，et al.The structures of antioxidant and cytotoxic agents from naturalsource：anthraquinones and tannins from roots of Rumex patientia[J].Phytochemistry，2001，58（8）：1213-1217.

[4]原源，陈万生，郑水庆，等.巴天酸模的化学成分[J].中国中药杂志，2001，26（4）：256-258.

[5]曾涌，罗建军，李冲.巴天酸模地上部分化学成分研究[J].中药材，2013，36（1）：57-60.

[6]刘景，夏忠庭，周桂荣，等.巴天酸模根化学成分研究[J].中药材，2011，34（6）：893-895.

[7]苏跃增，高黎明，郑旭东，等.巴天酸模中的蒽醌类化合物[J].西北师范大学学报（自然科学版），2000，36（3）：47-49.

[8]杨波，王慧颖，赵萍，等.巴天酸模籽中蒽醌与黄酮类成分的研究[J].黑龙江医药科学，2015，38（5）：63-65.

[9]邓丽娜，李博然，王睿，等.尼泊尔酸模中分离到的1 个新萘酮类化合物[J].中国中药杂志，2017，42（16）：3143-3145.

[10]杨波，赵萍，许春晖，等.巴天酸模籽非蒽醌化学成分的研究[J].中成药，2008，30（2）：262-263.

[11]高黎明，魏小梅，郑尚珍，等.巴天酸模中化学成分的研究[J].中草药，2002，33（3）：207-209.