动物内脏塑化标本的制作技术

林建和 肖雍琴 陈张华 李福泉 张娟

摘 要： 以动物内脏为材料，研究塑化标本制作中固定、脱水脱脂、真空渗透塑化、定型整形环节工艺技术要求，经过试验，优化参数及工艺要求，塑化标本制作方法简便、设备简易，具有推广利用价值。

关键词： 动物内脏；塑化标本

塑化标本制作是将试验材料利用渗透塑化技术，经过固定、脱水脱脂、真空浸渍塑化和定型处理等工序后，制作成方便用于教学或其它试验用途的一种标本制作方法。长期以来。解剖标本的制作均以福尔马林等有害药物进行浸泡、固定和保存。福尔马林作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低，并且福尔马林液在保存中往往形成多聚甲醛，使浸液变浊，影响观察[1-2]。福尔马林浸泡式标本强烈的刺激性气味和毒性，难免会对广大师生身体健康造成伤害。生物塑化标本相对于传统标本来说，更具安全性，更有利于教学和研究。目前塑化标本的制作工艺复杂，设备多，成本也因此较高。本文旨在探索在低成本的情况下，普通生物实验室就能制作小型塑化标本的方法。

1 主要设备及材料

1.1主要设备

真空干燥箱，恒温干燥箱，玻璃缸，电吹风，比重计。

1.2主要试剂

甲醛（HCHO），乙醇（CH3CH2OH），丙酮（CH3COCH3），聚乙二醇HO（CH2CH2O）nH（PEG）。

1.3材料

经5%～10%甲醛溶液固定后的内脏标本。

2 塑化内脏标本制备

2.1内脏标本材料处理

用于塑化的内脏标本按常规解剖进行处理。经福尔马林固定后的肺，带气管或支气管，肺门结构尽量保留完整。心脏应清除心腔内的凝血污块，必须保留主动脉、肺动脉、前后腔静脉和肺静脉，并进行开窗处理，以便于观察心脏结构。肠道类空腔器官，应尽量清除其内容物。

2.2漂白

经丙酮脱水脱脂后的标本与空气接触时间略长，颜色会加深，应进行漂白处理。将内脏标本直接放入1%～2%的过氧化氢溶液中浸泡一周。

2.3脱水

脱水前将内脏标本放在流动水源处长时间连续清洗，动作要缓和轻柔，48小时后开始脱水。把内脏标本放入80%、95%、100%Ⅰ、100%Ⅱ的乙醇溶液进行梯度脱水，每一种乙醇溶液各浸泡一周，乙醇量应淹没标本。

2.4脱脂

标本脱水后，还应进行脱脂，乙醇只有脱水作用，丙酮有脱水和脱脂的作用。在内脏标本经95%的乙醇溶液脱水后，可用100%丙酮进行脱水脱脂，在室温下进行10天脱脂。

2.5真空塑化

塑化剂采用聚乙二醇，是一种温和低毒无刺激性的高分子化合物，能完全溶于水，具有较好的稳定性。根据聚乙二醇分子量大小不同，其物理形态可由白色粘稠液（分子量200～700）到蜡质半固体（分子量1000～2000）直到坚硬的蜡质固体（分子量3000～20000）。

经脱水脱脂后的内脏标本，即刻放入分子量为600的聚乙二醇溶液中完全浸没，可用铁块下压标本于塑化剂内，温度保持在25℃～30℃，塑化全过程均在真空干燥器和间歇负压下完成。浸渍开始时，将标本放入装有塑化剂的塑化容器内，这时即可见塑化剂液面有许多气泡冒出。由于气泡的数量较多，此时不宜抽真空，可放置12～24h后再抽真空[4]。第一天压力控制从70KPa逐渐调至50KPa ，第二天的压力从50KPa 逐渐调至40KPa；第三天的压力从 40KPa调至30KPa，至第五天逐渐调至10KPa，后面保持10KPa压力不变。此时标本内部基本上已被塑化剂填充，每次调节进气阀，均须仔细观察塑化剂液面气泡的产生量。在整个塑化过程中，每半分钟气泡数控制10～20个，后期每半分钟气泡数须在5个以内[4]，直到无气泡产生，即完成了整个真空塑化过程。

2.6标本定型整形

将分子量为6000的聚乙二醇放入59℃的恒温干燥箱内，待其完全溶化后，将标本转入并将其完全浸没。10～12小时后，取出标本，电吹风加热，同时用塑料泡沫吸取表面多余的聚乙二醇，待其未冷却时，即时定型。经过塑化处理后的标本，内脏部分遇到收缩时，可用石蜡填充。具体操作是：将塑化后的标本放入60℃的保温箱，注射器抽取溶化的石蜡（要求60℃以上溶化的石蜡），注入标本收缩的部位以填充饱满即可[1]。

3 结果

由以上论述可知，塑化的实质是动物组织内的液体通过真空渗透过程被活性塑料置换出来，使动物细胞及组织器官、整体形态仍旧保持其生前的状态。用本方法塑化所得到的内脏标本成型好，较柔韧，具有一定弹性。外观光亮，色泽、质地都较好地达到了教学的要求。没有福尔马林的刺激气味，对人体无危害，能够取代传统福尔马林浸泡保存标本的方法。由于标本经脱水脱脂处理，所以可以长期保存。

4 讨论

4.1 乙醇和丙酮脱水脱脂的比较

乙醇价格低廉，容易购买和管理，脱水力强，同时可以使组织硬化，但其脱脂力较弱；丙酮价格较乙醇昂贵，脱水和脱脂力都较强[3]。在采用乙醇脱水的同时，采用结合丙酮脱脂性能的使用，节约了制作成本。

4.2固定的效果

取材后的内脏标本在5%～10%福尔马林溶液中固定时间不能太长.常采用短期固定（10h～48h），并保存于福尔马林溶液中，短期固定可以很好地保存标本的原有色泽，最好是采用新鲜的标本固定，能防止标本色泽发黑发暗，组织发硬变脆.而在低温下比在室温下对保存标本的色泽更有利，其固定的效果还取决于甲醛的浓度。

4.3重视塑化各环节操作

在塑化过程的任何环节.如标本在取材后长期暴露在空气中或没有浸泡在乙醇或丙酮的液面以下，或者标本脱水不彻底等都可造成组织皱缩.如果脱水时间过长则能造成组织器官脆弱，容易改变器官的形状和颜色[3]。

4.4本方法与传统塑化标本制作方法比较

采用乙醇常温脱水，丙酮常温脱脂，设备简易，方法简便，易于操作，成本低，在短时间内可制备出品质较好的塑化标本。极大程度上降低了塑化标本制作的设备要求，利于塑化技术的推广和普及。

5 小结

1）塑化标本的制作工艺流程为：初次解剖固定——第二次解剖——脱水脱脂——真空渗透塑化——定型整形。

2）真空渗透塑化是塑化技术的中心环节，在此环节的操作过程中，要做好压力的正确控制与塑化剂液面气泡的观察。

3）利用塑化技术可以除去标本水分并且使动物的组织器官保持其生存前的状态，标本不仅干燥、无味，还可以用手触摸及抓放。塑化标本从外观、色泽、弹性、标本质地和气味以及对人体的危害性看，能满足动物解剖实验室教学和科研要求。

参考文献

[1] 唐安科.一种简易塑化动物标本的制作方法[J].生物学通报，2006，41（9）：56-57.

[2] 白春黎.动物肌肉组织器官塑化标本制作技术[J].畜牧兽医杂志，2007，26（1）：125-126.

[3] 乔治良，王泽恩，等.实验性常温下制备塑化标本技术[J].解剖学杂志，2009，32（4）：558-560.

[4] 譚立文，张绍祥.生物塑化技术中真空浸渍的改进[J].CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ANATOMY，2001，19（4）：380.