白芷配方颗粒的提取工艺研究

张立新 孙永娟

摘 要：本实验以欧前胡素为指标对白芷配方颗粒提取工艺进行研究。白芷配方颗粒最佳提取工艺为加入10倍量70%乙醇，回流提取60分钟，连续提取3次。本工艺稳定、可行、收率高。

关键词：白芷配方颗粒；提取；工艺

白芷始载于东汉《神农本草经》，名白，芳香，列為中品。白芷性温，味辛，气芳香，微苦，具有祛风湿、活血排脓、生肌止痛的功效。《日华子本草》记载：“治目赤胬肉，及补胎漏滑落，破宿血，补新血，乳痈、发背、瘰疬、肠风、痔瘘，排脓，疮痍、疥癣，止痛生肌，去面皯疵瘢。”白芷常用于头痛、肠风痔漏、牙痛、鼻渊、痈疽疮疡、皮肤瘙痒等。白芷含有异欧前胡素（isoimperatorin）、欧前胡素（imperatorin）、当归素、壬烯醇、白当归醚、佛手柑内酯（bergapten）、十一炭烯-4、榄香烯、十六烷酸、珊瑚菜素（phellopterin）、氧化前胡素（oxypeucedanin）等成分。白芷具有解热、解痉、降压、兴奋运动和呼吸中枢、抗癌、镇痛、平喘、抗辐射、抗菌、抑制脂肪细胞合成、光敏性等方面的药理作用[1-5]。本实验以欧前胡素为指标对白芷配方颗粒提取工艺进行研究。

1 仪器与试药

KQ250DE超声波清洗器超声波检测仪器（烟台鑫康商贸有限公司）；LC-310液相色谱系统（江苏天瑞仪器股份有限公司）；WP-UP-1820“沃特浦”普通型实验室超纯水器（四川沃特尔水处理设备有限公司）；PHS-550智能型台式酸度计（杭州陆恒生物科技有限公司）；SP-1900双光束紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；分析天平（上海沪粤明科学仪器有限公司）。欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（东莞市乔科化学有限公司）；甲醇（东莞市乔科化学有限公司）；乙醇（天津市康科德科技有限公司）。

2 方法与结果

2.1 单因素考察

2.1.1 提取次数

分别取药材，粉碎为20目，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，过滤，减压浓缩；第二次加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。第四次加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续提取四次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中欧前胡素含量并计算欧前胡素收率。

2.1.2 药材粉碎目数

分别取药材，分别粉碎为10目、20目、40目，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续煎煮三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中欧前胡素含量并计算欧前胡素收率。

2.1.3 加醇倍数

分别取药材，粉碎为20目，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加14倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续三次，第二次加12倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续三次，第三次加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续三次，第四次加8倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续三次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中欧前胡素含量并计算欧前胡素收率。

2.1.4 提取时间

分别取药材，粉碎为20目，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取60分钟，连续三次，第二次加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取90分钟，连续三次，第三次加10倍70%乙醇，浸泡2小时，回流提取120分钟，连续三次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中欧前胡素含量并计算欧前胡素收率。

2.2 正交试验设计

实验结果表明，粉碎目数对欧前胡素收率影响不大，提取次数、加醇倍数和提取时间对欧前胡素收率影响较大。连续提取3次和连续提取4次无明显差异。选择提取次数、加醇倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。

3 含量测定

3.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相以甲醇：水（55：45）；检测波长为300nm；流速1.0mL·min-1；柱温：35℃。理论板数按欧前胡素峰计算应不得低于3000。

3.2 供试品溶液的制备

取提取膏适量，精密量取，置5mL量瓶中，加50%乙醇适量，超声处理十分钟，放置至室温，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

3.3 对照品溶液的制备

分别精密称取欧前胡素对照品2.5mg，置250mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

3.4 标准曲线的制备

将浓度为5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml，20μg/ml，25μg/ml，30μg/ml，35μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，欧前胡素对照品在5～35μg/ml范围内线性关系良好。

3.5 回收率试验

取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的欧前胡素对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为97.3%，RSD为0.82%。

4 实验结果

按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加入10倍量70%乙醇，回流提取60分钟，连续提取3次。本工艺稳定、可行、收率高。

参考文献

[1]王梦月，贾敏如，马逾英，孙嘉敏，唐声武，蒋桂华，熊英.白芷总香豆素的药理作用研究[J].时珍国医国药，2005（10）.

[2]尉小慧，张树军，夏广新，付收，王伟，沈敬山，嵇汝运.蛇床子和白芷中香豆素类化合物抑制磷酸二酯酶5活性的研究[J].中国药学杂志，2006（02）.

[3]王德才，李珂，徐晓燕，苏雪慧.杭白芷香豆素组分解热镇痛抗炎作用的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2005（11）.

[4]王海莉，王春梅，李贺，崔新颖.白芷香豆素的镇痛作用部位及其机制[J].中国老年学杂志，2009（15）.

[5]刘忠和，李佳，吴基良.杭白芷香豆素对巴比妥类药物催眠作用的影响及其机制研究[J].武汉大学学报（医学版），2006（01）.