蒲地蓝消炎口服液黄芩苷与菊苣酸含量测定方法的优化

　　　

济川药业集团有限公司，江苏　泰兴　225440

蒲地蓝消炎口服液由蒲公英、苦地丁、板蓝根、黄芩等四味中药按相应比例配伍，经过现代提取工艺提取并配制而成的纯中药口服制剂，具有清热解毒，消肿利咽的功效，主要用于疖肿、腮腺炎、咽炎、扁桃体炎的治疗[1-2]。研究表明，蒲地蓝消炎口服液对小儿手足口病[3-4]、上呼吸道感染[5-6]也具有良好的临床治疗效果，有“天然抗生素”的美称。

黄芩苷为黄芩中的主要有效成分，具有抗菌、抗病毒、清除氧自由基、解热、镇静、调节免疫等作用[7-8]；菊苣酸为方中君药蒲公英中的一种酚酸类化合物，具有抗菌、抗病毒、提高免疫力、抗炎、抗氧化等作用[9-11]。2015年版《中国药典》中分别采用两种方法对产品中的黄芩苷、菊苣酸的含量进行了测定，该方法由于检测耗时较长，不利于生产过程中对产品进行质量控制，研究欲建立一种同时测定黄芩苷和菊苣酸含量的测定方法，以缩短中间体检测时间，提高检测效率。

1　仪器与材料

1.1仪器20AT型液相色谱仪(日本岛津)；XS205型电子分析天平(Mettler)。

1.2材料黄芩苷对照品(批号：110715-201016，含量以94%计)、菊苣酸对照品(批号：111752-200902，含量以99.9%计)均购于中国食品药品检定研究院；蒲地蓝消炎口服液(济川药业集团有限公司)；乙腈、甲醇均为色谱纯，磷酸为分析纯，均购于国药集团化学试剂有限公司。

2　方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品48.18 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为黄芩苷储配液；精密量取黄芩苷储配液8 mL、4 mL、2 mL、1 mL、0.5 mL，分别置10 mL量瓶中，用甲醇依次稀释成不同浓度的黄芩苷系列溶液，备用。精密称取菊苣酸对照品13.7 mg，置100 mL量瓶中，加乙腈-水(20∶80)至刻度，摇匀，作为菊苣酸储配液；精密量取菊苣酸储配液10 mL、7.5 mL、4 mL、2 mL、1 mL，分别置25 mL量瓶中，用乙腈-水(20∶80)依次稀释成不同浓度的菊苣酸系列溶液，备用。

2.1.2供试品溶液的制备精密量取蒲地蓝消炎口服液5 mL，置50 mL量瓶中，加乙腈-水(20∶80)稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2色谱条件色谱柱：Agilent SB-Pheny1(75 mm×4.6 mm，3.5 μm)；流动相：水-乙腈-甲醇-磷酸(75∶15∶10∶0.2)；柱温：40 ℃；检测波长：326 nm；进样量：10 μL；流速为梯度洗脱见表1。

表1　梯度洗脱流速

2.3分离度试验精密量取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。菊苣酸、黄芩苷出峰时间及菊苣酸峰、黄芩苷峰与附近峰的分离度，典型色谱图如图1所示。菊苣酸出峰时间为4.468 min，与附近峰分离度为2.23；黄芩苷出峰时间为8.241 min，与附近峰分离度为1.94。

2.4线性关系考察分别精密吸取“2.1.1”项下黄芩苷、菊苣酸不同浓度的系列溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图。以浓度对峰面积作图，黄芩苷、菊苣酸回归方程分别为：Y黄芩苷=17463X+22877(r=0.9999)，Y菊苣酸=39724X+15518(r=0.9998)，黄芩苷在90.58～1449.3 μg范围内，菊苣酸在5.475～54.75 μg范围内线性关系良好。

2.5精密度试验取同一批样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项色谱条件连续进样6次，记录峰面积，结果黄芩苷、菊苣酸峰面积的RSD分别为0.15%、0.14%，表明仪器精密度良好。

2.6溶液稳定性试验取同一批样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0、1.5、3、6、9、12、18、24 h按“2.2”项色谱条件测定，记录峰面积。结果黄芩苷、菊苣酸峰面积的RSD分别为0.94%、0.84%。表明供试品溶液在24h内较稳定。

2.7重复性试验取同一批样品，按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别按“2.2”项色谱条件进行测定。结果黄芩苷、菊苣酸的平均含量分别为10.68 mg·mL-1、0.269 mg·mL-1，以含量结果计算RSD(n=6)分别为0.96%和1.1%，表明该方法重复性良好。

2.8加样回收率试验精密量取已知含量的蒲地蓝消炎口服液2.5 mL，共6份，置50 mL量瓶中，分别加入黄芩苷对照品约26.7 mg、菊苣酸对照品储备液(0.137 mg/mL)5 mL，按“2.1.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行分析，计算回收率。结果黄芩苷、菊苣酸的平均回收率分别为99.72%、99.38%，RSD(n=6)分别为0.92%、0.99%。

2.9方法对比分别按照2015版《中国药典》蒲地蓝消炎口服液中蒲公英(菊苣酸)、黄芩(黄芩苷)检测方法、以及“2.1、2.2”项下分析方法对6批蒲地蓝消炎口服液中蒲公英(菊苣酸)、黄芩(黄芩苷)含量进行检测，结果见表2。

表2　药典方法和试验方法检测结果对比

3　讨论

分别采用紫外-可见分光光度计及二极管阵列检测器在210～400 nm分析对照品和供试品溶液，发现在326 nm处菊苣酸有最大吸收，而黄芩苷的两个最大吸收峰分别为278 nm和315 nm，由于黄芩苷在样品中含量较高，而菊苣酸在样品中含量偏低，参考相关文献[12-13]，为提高菊苣酸的检测灵敏度，选择了326 nm波长处同时测定两种成分的含量。实验结果表明，在326 nm处测定黄芩苷与原方法选定的280 nm测定结果基本一致。

2015版《中国药典》对于蒲地蓝消炎口服液除了维持原有黄芩(黄芩苷)含量检测指标不变的基础上，增加了蒲地蓝消炎口服液中蒲公英(菊苣酸)含量测定，但菊苣酸药典方法的单针进样分析时间长达65 min。在蒲地蓝消炎口服液尤其是中间体(配制液)检测过程中，不计对照品，单批次4针检测时间为260 min，耗时较长，在一定程度上增加了产品的产出周期，而文中研究方法不仅将检测时间大大缩短，也实现了一种方法同时分析黄芩苷、菊苣酸含量的效果。运用本方法检测蒲地蓝消炎口服液中间体，不仅利于生产安排、消除生产瓶颈、降低分析成本、减少排污，同时也降低了配制液在等待检测过程中的污染风险，提高了产品过程中的控制力度。

综上，研究建立的HPLC法同时测定黄芩苷及菊苣酸的含量，方法可行，适用于蒲地蓝消炎口服液生产过程中的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015：1641-1642.

[2]蒋磊,孟祥松,李军,等.蒲地蓝消炎口服液质量控制方法的研究[J]. 齐鲁药事,2012,31(2):77-83.

[3]华颖,张申.蒲地蓝消炎口服液治疗手足口病临床观察[J].现代中西医结合杂志,2009,18(32):3965.

[4]赵慧娅,郝建华, 郭雯.蒲地蓝消炎口服液联合利巴韦林颗粒治疗手足口病[J].河南大学学报,2015,34(2):139-141.

[5]张小琴,李华, 陈万杰.蒲地蓝消炎口服液治疗急性上呼吸道感染114例[J].工企医刊,2013,26(6):464-465.

[6]许春香,阎一凡. 蒲地蓝消炎口服液治疗呼吸道感染疗效分析[J].中国基层医药,2014,21(1):114-115.

[7]雷芳.黄芩苷药理作用研究进展[J].中国药业,2010,19(15):87-90.

[8]辛文妤,宋俊科,何国荣,等.黄芩素和黄芩苷的药理作用及机制研究进展[J].中国新药杂志,2013,22(6):647-659.

[9]Robinson W. L-chicoric acid, an inhibitor of HIV integrase, improves on the in vitro anti-HIV effect of zidovudine and a protease inhibitor (AGI350) [J]. Antiviral Res, 1998, 9(2): 101-106.

[10]闫晓慧,谈锋. 3种松果菊属植物的鉴别、活性成分及生物技术研究进展[J].中草药, 2006, 37(2): 300-304.

[11]King P J, Robinson W E. Resistance to the anti-human immunodeficiency virus typel (HIV-1) compound, L-chicoric acid results from a single mutation at amimo acid 140 of integrase [J]. J Virol, 1998(72): 8420-8426.

[12]张冬梅,桑媛,刘冰. HPLC法同时测定双黄连注射液中绿原酸及黄芩苷含量[J]. 药物分析杂志,2005,25(10) :1279-1280.

[13]刘刚,王海涛,赵淼,等. HPLC法测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的含量[J]. 解放军药学学报,2007,23(4) :299-301.