不同藤梨根样品中多糖含量的比较研究及应用

徐浩 楼招欢 申力 于晓露 张光霁★

藤梨根又名杨桃根，是猕猴桃科植物猕猴桃 A.chinensis Planch和软猕猴桃 Actinidia arguta Planch的干燥根［1］。主要分布在浙江、江西、湖南、河南、福建、安徽等地［2］。藤梨根具有许多的药理活性，其中抗肿瘤活性较为显著，被广泛应用于一些癌症例如肺癌、大肠癌、食管癌、胃癌、结肠癌等的治疗。另有学者发现藤梨根具有抗氧化能力以及免疫活性［3］。多糖为藤梨根的化学成分之一，Alexmandra M. Deters等［4］在藤梨根中提取分离出葡甘露聚糖。不同产地、不同采收期药材中多糖含量存在差异，而生长年限的不同也可能引起多糖含量的不同。多糖具有许多的生理活性，如抗细菌感染的能力［5］、抗肝癌［6］等，发展的潜力较大。本实验通过研究不同产地、不同采收期、不同年限的藤梨根以藤梨根不同部位的多糖含量来进行分析比较，确定含量较多的藤梨根。

1 材料与方法

1.1 仪器 TC-15恒温电热套（海宁市华星仪器厂），501恒温水油浴锅（杭州惠创仪器设备有限公司），电子称（11009123S），分析天平（AG135），电子天平（奥豪 CP114），微型电子计算机（0600914S），紫外分光光度计（浙江中医药大学 1000337S），KQ-500DE型数据超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司0500788S），离心机（上海安亭科学仪器厂），旋转蒸发仪（上海申顺生物科技有限公司 20012788），DLSB-5/10℃ 低温冷却循环泵，SHB-III 循环水式真空泵。

1.2 试剂 浓硫酸（衢州巨化试剂有限公司），D-无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所110833），95%乙醇（安徽安特食品股份有限公司 1505093601），苯酚（郑州恒祥化工原料有限公司 060311）。

1.3 药材 2014年7月收集浦江2年、浦江3年、浦江4年、磐安2009、磐安2010、磐安2011、诸暨1年、诸暨2年的藤梨根（TLG）药材，除去杂质，清水洗净，切片后烘箱烘干备用；2014年10月收集浦江4年秋、磐安2009年秋、诸暨2012年秋的药材，按以上处理后备用；2015年4月收集磐安、浦江的药材，按以上处理后备用。

1.4 TLG多糖的提取 称取100g TLG干品于2000 ml圆底烧瓶中，加10倍体积的水，100℃回流1h，药液过滤后备用。取药渣，加10倍体积的水，100℃回流1h，弃药渣，药液过滤，合并两次药液，减压回收并适当浓缩药液至500 ml。取药液，边搅拌边加95%乙醇，使溶液含醇量达80%。静置12h后3500 r/min，离心3 min，弃上清液，沉淀物冷冻干燥，得TLG多糖。

1.5 溶液的制备 （1）对照品溶液的配制：精密称取D-无水葡萄糖对照品10.0 mg，置于100 ml容量瓶中，加蒸馏水适量，超声使之溶解，加适量蒸馏水至刻度线，摇匀，配制成0.1 mg/ml的溶液。（2）供试品溶液的配制：精密称取各样品多糖10.0mg，分别置于100ml容量瓶中，加适量蒸馏水至刻度线，摇匀，配制成0.1mg/ml的溶液。（3）苯酚溶液的配制：称取苯酚5g置于100 ml容量瓶中，加适量蒸馏水至刻度，摇匀备用。

1.6 最大吸收波长的选择 移取2.0 ml对照品溶液于试管中，加入5%苯酚溶液1.0ml后迅速加入浓硫酸5.0 ml，涡旋后室温静置10min，沸水浴15 min后随即进行冰水浴15min，以蒸馏水2ml按上述条件处理的溶液作为空白，在400～600nm波长范围内进行扫描，确定最大吸收波长为490nm。

1.7 标准曲线的绘制 分别吸取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml的对照品溶液于10 ml的容量瓶中，加入适量蒸馏水定容，在最大吸收波长490 nm处进行吸光度的测定。以吸光度A为横坐标，浓度C（mg/ml）为纵坐标进行线性回归，回归方程为Y=0.01972X-0.00145，R2=0.99907，结果显示葡萄糖在2.5～20μg/ml浓度范围内线性关系良好，结果见图1。

图1 葡萄糖标准曲线

2 结果

2.1 精密度试验 取对照品溶液2.0ml于试管中，进行吸光度的测定，平行测定7次，计算得相对标准差（RSD）为0.19%，表明仪器精密度良好。见表1。

表1 精密度试验

2.2 稳定性试验 取供试品溶液2.0 ml于试管中，进行吸光度的测定，连续测定1h，计算得RSD为0.91%，表明供试品溶液在1h内较为稳定。见表2。

表2 稳定性试验

2.3 重复性试验 取同一供试品多糖5份，每份10 mg，按供试品溶液的配制进行配液，根据2.3中的方法进行操作，测定吸光度，计算得RSD为3.54 %，表明本法重现性良好。见表3。

表3 重复性试验

2.4 加样回收率试验 称取2.5mg的供试品多糖，用适量的蒸馏水溶解于50ml的容量瓶中，加入适量一定浓度的标准品溶液进行超声，加蒸馏水至刻度线，配制成0.1mg/ml的待测液，进行吸光度的测定，计算得平均回收率为102.2 %，RSD为2.21%，结果见表4。

表4 加样回收率试验

2.5 不同样品多糖的含量测定 分别移取各供试品溶液2.0ml，在490 nm处进行吸光度的测定，并通过回归方程计算得到各样品多糖含量，计算公式如下：，其中y为葡萄糖浓度（mg/ml），m为多糖样品称取量（mg）。结果见表 5～8。

表5 不同产地藤梨根样品多糖的含量（%）

表6 不同采收期藤梨根样品中的多糖含量（%）

表7 不同年限藤梨根样品中的多糖含量（%）

表8 不同部位藤梨根样品中的多糖含量（%）

3 讨论

藤梨根是临床常用于治疗消化系统肿瘤的中草药之一，浙江地区亦有用藤梨根治疗胃癌、食管癌的报道［7-8］。藤梨根多糖是从藤梨中提取的一类植物多糖，由醛糖或酮糖通过苷键连接在一起，具有多效应和多靶点的药理学活性，已经受到越来越多的关注。

多糖一般可激活免疫反应达到抑制肿瘤细胞增殖，且对正常细胞毒性较低。藤梨根多糖的含量常决定藤梨根中药材的药效。植物药材中多糖类物质的积累与产地的关系密切，不同产地的同一种药材，其中的多糖含量也具有较大的差异［9］。本实验发现，诸暨产藤梨根的多糖含量显著高于磐安和浦江，而浦江与磐安的多糖含量相差不大，可能与当地的气候条件与土壤环境有关。

采收期的不同同样影响了多糖含量［10］，本实验研究发现，秋季采收的多糖含量显著高于其他季节采收的。年限不同，多糖的含量也不相同。浦江的样品中，2年生的藤梨根多糖含量最高，而4年生的则是最少，相对于诸暨，诸暨1年生的样品含量高于2年生的，可初步断定多糖含量与年限有关，具体的相关性有待进一步的研究。藤梨根的木质部较大，约占根半径的二分之一［19］，而韧皮部较狭窄，样品中韧皮部的多糖含量低于木质部的含量可能与之相关。

由此可见，产地、年限、采收期对藤梨根中多糖的含量有影响，且其不同部位的多糖含量也不相同。对大多数中药材而言，不同年限、不同产地主要活性成分的含量都存在差异，比如黄芪、贝母、地珠子、太子参等药材均存在这种现象。

藤梨根具有清热解毒的功效，可以有效改善患者胃中灼热、口干、嘈杂等症状，近年来在临床上应用十分广泛。藤梨根治疗胃癌，与北沙参、麦冬、天冬、石斛、玉竹等滋阴药配合使用，可以达到良好的滋养胃阴、清除胃热的效果。如果胃的热象明显，可配合使用生石膏、知母、芦根、天花粉、淡竹叶、白花蛇舌草等加强清热的力量。如果患者夜里出汗显著，可加用煅牡蛎、浮小麦、糯稻根等；如果患者口干、大便干的症状十分明显，可加用玄参、生地、麦冬等；心烦失眠的患者，可加用酸枣仁、柏子仁、夜交藤等。有些患者还会出现疲劳等气虚证的表现，可加入太子参、麦冬、五味子益气养阴。

本研究表明，藤梨根的质量和疗效也会受到产地和采集的影响，与此类研究的结果类似。因此，在藤梨根生产的过程中应该重视产地、采收时间等因素的影响，以提高有效成分的含量，提升临床疗效。

综上所述，诸暨产的藤梨根中，多糖含量较其他地区高，且在秋天采收为宜，而不同产区的藤梨根在药效上是否存在差异，需进一步实验观察。

［1］ 中国科学院西北植物研究所编著． 秦岭植物志． 北京: 科学出版社, 1983: 292-294．

［2］ 陈晓晓, 杨尚君, 白少岩． 中华猕猴桃根化学成分及药理活性研究进展． 齐鲁药事, 2009, 28(11): 677-679．

［3］ Lin Zhang, WuXia Zhang, Qingjie Wang． Purification, antioxidant and immunological activities of polysaccharides from Actinidia Chinensis roots． International Journal of biological Macromolecules,2015, 72: 975-983．

［4］ Alexmandra M． Deters, Klaus R． Schroder, Andreas Hensel． Kiwi Fruit ( Actinidia chinensis L． ) polysaccharides exert stimulating Effects on Cell Proliferation via Enhanced Growth Factor Receptors, Energy Production, and collagen synthesis of human Keratinocytes, fibroblasts, and skin equivalents． Journal of cellular physiology, 2005, 202: 717-722．

［5］ 阎家麒, 王九一, 赵敏, 等． 中华猕猴桃多糖的提取及其对自由基的消除作用． 中国生化药物杂志, 1995, 16(1): 12-14．

［6］ 张光霁, 韩江余． 猕猴桃根多糖抗肿瘤注射剂小鼠体内抑瘤机制． 中华中医药杂志, 2012, 27(8): 2177-2179．

［7］ 楼丽君, 吕定量, 胡增仁, 等． 猕猴桃根抗肝癌的实验研究． 中华中医药学刊, 2009, 27(7): 1509-1511．

［8］ 朱秀山, 许继平． 壁虎藤梨根治疗胃癌临床及实验研究． 中国民间疗法, 1999, 7(3): 43-44．

［9］ 许苗苗, 刘银环, 杨新杰, 等． 不同产地珠子参中多糖的含量． 现代中医药, 2014, 34(5): 73-75．

［10］ 曾丽娜, 袁玉虹, 黄淑燕, 等． 不同采收时间、不同入药部位太子参有效药用成分含量的比较． 福建林业, 2014, 2: 25-26．