三阴型乳腺癌患者血清Vit D水平与瘤组织Ki-67、p53蛋白表达变化及其相关性

王一，廖宏伟，宋扬

(唐山市人民医院，河北唐山 063000)

目前，在世界范围内乳腺癌的发病率呈逐年上升和年轻化的趋势。三阴型乳腺癌(TNBC)因具有组织学分级恶性程度高、肿块较大、复发率高等临床特征，一直是临床医生关注的重点[1,2]。维生素D(Vit D)是一种脂溶性类固醇激素前体，在体内经肝和肾两次羟化形成有活性的1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)D3]，临床上检测血清1,25(OH)D3来反映总Vit D的情况。多项研究[3～5]显示，Vit D与乳腺癌关系密切，Vit D缺乏不仅增加乳腺癌的发病风险，且Vit D水平与癌细胞的表型、肿瘤分期等有关。Ki-67、p53蛋白在乳腺癌尤其是TNBC中的作用备受关注，研究认为两者与乳腺癌组织类型、临床分期、转移情况等明显相关[6,7]。但TNBC患者血清Vit D水平与瘤组织中Ki-67、p53蛋白表达情况是否存在一定联系，以往鲜有报道。本研究分别检测了TNBC患者血清Vit D和瘤组织Ki-67、p53蛋白，并分析Vit D水平与Ki-67、p53蛋白表达的相关性，旨在进一步明确Vit D在TNBC发生、进展中的可能作用。

1　资料与方法

1.1临床资料选取2016年6月～2017年6月唐山市人民医院收治的TNBC患者235例，均为女性，年龄(47.16±9.42)岁。纳入标准：①经免疫组化法或结合荧光原位杂交法确定雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(Her-2)受体表达阴性；②临床资料完整；③无其他恶性肿瘤；④肿瘤分期无远处转移者；⑤无其他恶性肿瘤病史及心、肝、肾功能严重损害；⑥非妊娠/哺乳期女。另选取同期确诊的非三阴型乳腺癌患者235例作对照，均为女性，年龄(48.44±10.38)岁。纳入标准：①经免疫组化法或结合荧光原位杂交法确定的非三阴的乳腺癌患者；②其他条件同TNBC患者。所有乳腺癌患者排除标准：①病理资料不完整，或由于各种原因未按要求进行相关检查者；②乳腺癌晚期者。

1.2血清Vit D检测方法所有患者在确诊后未进行相关治疗前采集静脉血5 mL，采用酶联免疫吸附法检测血清1,25(OH)D3用以判定患者血清Vit D水平。以1,25(OH)D3≥30 ng/mL为Vit D正常，20～<30 ng/mL为Vit D不足，<20 ng/mL为Vit D缺乏。

1.3瘤组织Ki-67、p53蛋白检测方法经穿刺活检标本或手术大体标本，采用免疫组化法检测瘤组织中Ki-67、p53蛋白。二者染色以棕褐色颗粒位于细胞核内判定为阳性。根据参照着色强度并结合阳性细胞所占百分比判断分级，无明显着色和阳性细胞数<5%为阴性(-)，阳性细胞数5%～25%为弱阳性(+)，阳性细胞数25%～50%为中阳性(++)，阳性细胞数≥50%为强阳性(+++)。本研究将显色0～+判定为阴性，++～+++为阳性。阳性结果以%表示。

2　 结果

2.1 TNBC患者和非三阴的乳腺癌患者血清Vit D、瘤组织Ki-67、p53蛋白表达比较TNBC患者和非三阴的乳腺癌患者血清Vit D水平分别为(23.38±9.72)、(36.12±9.42)ng/mL，Ki-67蛋白阳性率分别为65.5%(154/235)、34.6%(82/235)，p53蛋白阳性率分别为64.9%(157/235)、36.2%(85/235)，两者比较，P均<0.05。

2.2不同Vit D水平TNBC患者Ki-67、p53蛋白阳性率比较Vit D正常、不足、缺乏的TNBC患者Ki-67蛋白阳性率分别为26.5%(22/235)、66.7%(52/235)、86.5%(80/235)，p53蛋白阳性率分别为49.4%(41/235)、73.1%(57/235)、86.9%(79/235)，两两比较，P均<0.05。

2.3TNBC患者血清Vit D水平与瘤组织Ki-67、p53蛋白表达相关性分析TNBC患者血清Vit D水平与Ki-67、p53蛋白表达均呈负相关(r=-0.714、-0.699，P均<0.05)。

3　讨论

ER、PR、Her-2缺乏的乳腺癌称为TNBC。TNBC发病占乳腺癌的15%左右，具有浸润性强、复发转移率高等特点，患者预后及生存期不良。明确TNBC发病进程中病理机制，对TNBC诊疗及改善患者预后具有重要的意义。

Vit D和乳腺癌的关系已明确，Vit D水平越低则罹患乳腺癌的风险越高；前期研究我们发现，Vit D水平降低与TNBC患者新辅助化疗敏感性呈负相关，即Vit D水平降低可增加乳腺癌患者化疗抗拒性增高和预后不佳[8]。Ki-67蛋白被认为是核增殖标记物，除不在G0期表达外，在细胞周期的G1、G2和M期均有表达，可反映恶性肿瘤增殖率。研究[9]证实，淋巴结远处转移的乳腺癌患者Ki-67蛋白表达高于无转移病例者，Ki-67蛋白高表达乳腺癌患者预后不良。王永南等[10]认为，Ki-67蛋白表达与TNBC患者化疗的获益相关。p53蛋白定位于17p13.1，分为野生型和突变型两类，野生型p53蛋白为抑癌基因，免疫组化检测不到；容易被免疫组化检测到的为突变性p53，是促癌基因，可促进细胞的恶性转化，目前国内外学者均有报道乳腺癌组织学分级与p53蛋白的表达关系密切，p53蛋白表达率越高，肿瘤组织学级别越高，分化越差、预后越差[11]。李志华通过Meta分析，指出p53蛋白可作为乳腺癌辅助化疗疗效预测的指标之一[12]。

本研究显示，TNBC患者血清Vit D水平低于非三阴的乳腺癌患者，我们认为Vit D水平低下可能是TNBC易于复发或转移的诱因之一。研究[13,14]发现，Vit D具有激素样作用，Vit D对乳腺癌细胞株的作用多为ER阳性的，可通过与Vit D受体相互作用抑制癌基因c-myc、p21、p27转录，调控Cyclin D1、CDK4等活性从而抑制癌细胞的作用。本研究还显示，TNBC患者瘤组织Ki-67、p53蛋白阳性率高于非三阴的乳腺癌患者，此结果与相关报道[10,11]相符合。本研究中Vit D缺乏的TNBC患者Ki-67蛋白和p53蛋白阳性表达率更高，相关分析显示血清Vit D水平与瘤组织Ki-67、p53蛋白表达呈负相关，这些结果提示TNBC疾病进展中Vit D水平变化与Ki-67、p53蛋白存在一定的内在联系。研究[13]表明，Vit D可通过脂酰肌醇3-激酶通路降低转录因子E2F活性，将细胞阻滞于G0/G1期，阻止肿瘤细胞的有丝分裂，从而阻止细胞增殖和转移；此外，Vit D可通过下调促存活基因、抑制p53的突变诱导癌细胞的死亡[15]。本文中TNBC患者血清Vit D水平降低，Vit D水平与瘤组织Ki-67、p53蛋白表达呈负相关，提示Vit D参与TNBC发生、进展的可能机制是Vit D通过影响肿瘤调控基因进而影响细胞的增值、分化和其侵袭性。Vit D检测便捷，临床上可通过动态监测血清Vit D变化早期预测乳腺癌患者病情进展，有一定的指导意义。

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