常山柴胡组方对三黄鸡球虫病疗效研究

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(河南牧业经济学院 动物医学院，河南 郑州 450046)

鸡球虫病(Coccidiosis in Chicken)是鸡常见且危害十分严重的寄生虫病，可感染各个年龄段的鸡只，对养鸡业造成巨大的经济损失[1]。鸡球虫病病原为艾美耳科艾美耳属球虫，在我国已发现有9种球虫，其中柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的致病力最强，其寄生部位是盲肠[2]。目前我国控制鸡球虫病的主要方法是应用化学合成类、抗生素类药物进行防治，这些药物疗效显著，但易产生耐药性，且大剂量使用后可造成鸡只掉毛、食欲降低等副作用，在禽类生产中已经出现了明显弊端。

中草药具有副作用小、不易产生耐药性等优点，是新型抗球虫药物的重要研发方向[3]。常山别名鸡骨常山、黄常山，其药用部位为其干燥的根部。常山为常用的中草药，汉代的医药学巨著《神农本草经》对该中药已经有所记载，具有抗疟疾、催吐、退热、抗病毒、抗阿米巴原虫等功效[4]。柴胡别名地熏、山菜，为《中国药典》收录的中药，其药用部位为其干燥的根部。柴胡的主要功效是和解表里、疏肝解郁、升阳举陷、退热截疟[5]。鸡球虫感染的一个重要过程是在肠道上皮细胞移行，移行过程中会造成肠道炎症，引起机体发热。本试验拟将常山的抗原虫作用和柴胡的解热作用相结合，通过组方配比，研究不同给药剂量对鸡球虫病的疗效，筛选最佳给药浓度，为鸡球虫病的防治提供参考。

1　材料与方法

1.1　试验动物

1日龄正阳三黄鸡100羽，购自河南省原阳林海禽业土禽育种公司，饲养在河南牧业经济学院动物房。饲养室提前消毒、熏蒸，保证无球虫卵囊污染。雏鸡饲料由本课题组购买原料配制，确保无抗球虫药物。饲料配方如下；玉米60%、豆粕20%、麦麸10%、菜籽粕5%、其它青饲料5%。

1.2　试验药物

常山、柴胡购自郑州大地中草药批发中心，粉碎后等量配比，加入适量蒸馏水文火熬制40 min，取汁，定容，计算单位体积液体相当于中草药原粉的质量。熬制前中草药和水的相对质量比控制在1100，熬制过程中可适量补充蒸馏水。地克珠利水溶性粉剂(含量>99%)购自浙江国邦药业有限公司，通过饲料添加给药，添加浓度为1mg/kg饲料。

1.3　攻虫用虫株

鸡柔嫩艾美尔球虫由本课题组于2015年从郑州市惠济区某种鸡场分离、保存。应用前进行雏鸡接种、复苏，收集盲肠内容物，按照常规方法收集卵囊，置于2.5%重铬酸钾溶液，29 ℃培养。待90%以上卵囊出现孢子后置于4 ℃冰箱备用。

1.4　试验组设定

鸡苗饲养至11日龄后，每日抽样采集雏鸡粪便，饱和盐水漂浮法检查球虫卵囊，连续检查3d。确定无球虫感染后选择14日龄雏鸡80只，称重。选取体重接近的雏鸡苗，随机分成8组，每组10只：5组不同剂量组方、地克珠利对照组(按照1 mg/kg饲料给药)、阳性对照组(攻虫不给药)和阴性对照组(不攻虫不给药)。组方组给药方式是通过药汁拌料，给药剂量分别相当于每只每日0.6 g、1.0 g、2 g、4 g、6 g中药组方原粉。

1.5　球虫感染动物模型构建

取完全孢子化的卵囊，计数、混匀。除阴性对照组外，其余各组鸡苗经口感染球虫卵囊，感染量为6万个/羽。攻虫后24 h开始给药，让雏鸡自由采食、饮水。连续给药7 d后剖检，进行相关疗效指标评价。

1.6　不同试验组雏鸡临床特征观察

攻虫后第3d开始，每天上午定时观察各组雏鸡的临床表现，同时对粪便性状、血性分泌物的量等做好详细记录，进行血便记分。收集粪便，计算克粪便卵囊数，直到试验结束。试验过程中如果发生雏鸡死亡情况应做好详细记录。

1.7　不同试验组雏鸡病理学变化

试验结束后对全部存活鸡只称重后剖检，检查盲肠、十二指肠等脏器组织的病理学变化。分离盲肠，纵向剪开后进行病变计分。用手术刀片刮取盲肠内容物，称重，进行盲肠内容物卵囊量计数(OPG值)。

1.8　不同试验组药物疗效评价

1.8.1相对增重率统计分别于攻虫前和试验结束后按照分组对每只雏鸡称重，做好记录，计算每组的平均相对增重率。相对增重率的计算方法如下:平均相对增重率=试验组平均增重率/健康对照组平均增重率×100%。

1.8.2存活率统计

试验结束后统计每个试验组鸡只存活数目，计算存活率。存活率的计算方法如下:每组存活率=存活数目/试验前数目×100%。

1.8.3病变值统计

病变值是指各个试验组盲肠的病理变化程度，其计算方法为:病变值=每组平均记分×10。本统计参照李国清等[6]记分标准进行病变值统计。病变值记分的标准如下:0分-黏膜无眼观病变；1分-黏膜有少量出血点；2分-肠壁稍增厚，黏膜有多量出血点，盲肠内容物含少量血液；3分-肠壁肿胀，内容物含多量血液；4分-肠壁极度肿胀，外观呈暗紫红色，内容物含有大量血凝块；因球虫病死亡鸡只病变值记为4分。

1.8.4卵囊值统计

卵囊值的统计参照角田清等[7]提供方法执行，将1.7中每组OPG值以(卵囊数×106)形式表示，当卵囊数为0-0.1时卵囊值记为0；当卵囊数为0.11-1.0时卵囊值记为1；当卵囊数为1.1-1.9时卵囊值记为10；当卵囊数为2.0-5.9时卵囊值记为20；当卵囊数为6.0-10.9时卵囊值记为30；当卵囊数>11.0时卵囊值记为40。

1.8.5抗球虫效果评价

参照Merck公司的抗球虫指数计算方法，根据统计的存活率、相对增重率、卵囊值和病变值，通过以下公式计算抗球虫指数(ACI):ACI=(相对增重率+存活率)-(病变值+卵囊值)。

抗球虫效果评价是以ACI为主要标准：ACI<120判定为疗效差；120180判定为高效。

2　结果

2.1　临床表现

接种球虫后第4d，除了阴性对照组外，其它各组雏鸡均出现不同程度的食欲减退、鸡冠苍白、精神沉郁、翅膀下垂、闭眼瞌睡、下痢、便中带血等。接种球虫卵囊后第5d，阳性对照组雏鸡排出大量血便，有两只雏鸡死亡，所有给药组雏鸡便中血量明显减少。第6d下午治疗组1、4、5(0.6 g、4 g、6 g给药量)各有1只雏鸡死亡，其余治疗组雏鸡便中血量进一步减少。

2.2　剖检变化

剖检结果表明，阴性对照组雏鸡所有脏器均无异常；试验过程中死亡雏鸡盲肠、十二指肠等明显肿胀，肠壁外侧能看到出血点、出血斑，剖检其内容物呈暗红色甚至黑红色；相对于阳性对照组雏鸡，所有给药组雏鸡盲肠、十二指肠肿胀有不同程度减轻，肠道内血性分泌物的量明显减少，其它脏器未见明显眼观病变。

2.3　常山柴胡组方抗球虫效果分析

通过分析相对增重率、鸡只存活率、病变值、卵囊值等计算各个试验组的抗球虫指数(ACI)。统计结果表明，地克珠利对照组(1 mg/kg饲料)的ACI指数为123.96；常山柴胡组方不同剂量治疗组ACI分别为91.17、133.25、149.5、106.96和100.86，均高于阳性对照组(62.14)；1.0 g/只/天的给药量(治疗组2)和2.0 g/只/天的给药量(治疗组3)的ACI高于地克珠利对照组，且均未发生雏鸡死亡。相关统计结果见表1。

表1　常山柴胡组方抗球虫病疗效相关指标分析

3　讨论与结论

鸡球虫病可以感染各个年龄段的鸡只，其中雏鸡感染后死亡率可达70%-80%，病愈后雏鸡食欲减退，生长缓慢。成年鸡感染后一般不发病，但为带虫者，可引起增重和产蛋能力降低，是球虫病的重要传播源。目前用于治疗鸡球虫病的药物主要是化学合成类药物如莫能菌素、地克珠利、磺胺二甲基嘧啶、盐酸氨丙啉等，这些药物分别作用于球虫发育的不同阶段，疗效好但易产生耐药性[8]。作为危害最严重的球虫病病原之一——柔嫩艾美尔球虫，其产生抗药性的速度更是惊人，甚至超过新药研发的速度。因此筛选疗效好、不易产生耐药性的中草药组方成为当前养鸡业迫切需要解决的问题。

相关的研究结果表明，从中草药常山中提取的常山碱具有良好的抗球虫效果，将常山碱进行溴代反应后形成的常山酮具有更强的抗球虫效果。目前临床上应用的常山酮主要靠进口，国内尚无规模化生产，价格昂贵，且已经有耐药性和药物残留的相关报道[9]。常山在我国产地广泛，资源丰富，其中含有常山碱、八仙花酚等生物活性物质，具有多种生理学作用，能够解热、降压、催吐、抗疟等[10]。常山作为一种常用中草药，具有低毒、低残留、疗效持久的优势。因此，本研究将常山和具有解热疗效的中药柴胡组方，以期筛选出抗球虫效果好、对机体保护作用强的中草药配方。

本研究中用于构建球虫感染动物模型的卵囊分离自郑州市郊爆发球虫病的某鸡场，经分离、纯化、鉴定为柔嫩艾美尔球虫卵囊[11]。课题组前期对卵囊毒力评价结果表明，该卵囊毒力较强，每只雏鸡经口感染8万个复苏的孢子化卵囊后3周内死亡率达到了30%，具有良好的感染能力，能够作为构建动物模型用虫株。

抗球虫指数分析表明，所有复方治疗组的ACI均未高于160，从疗效分析判定均为中等或较差，分析可能和虫株高毒力有关。实验结果表明，常山柴胡粉剂的水提取物能够有效控制鸡球虫病的发生，随着给药量从0.6 g/只增加到2.0 g/只，相对增重率逐渐增加，盲肠病变程度则逐渐减轻，盲肠平均卵囊数逐渐减少，抗球虫指数逐渐升高，其中1.0 g/只、2.0 g/只剂量组抗球虫指数均高于地克珠利对照组。随着给药剂量增加至4.0 g/只、6.0 g/只剂量，相对增重率反而下降且均出现死亡鸡只，盲肠平均卵囊数有增多的趋势，抗球虫指数较1.0 g/只、2.0 g/只剂量组低，分析原因可能是中药水提液味苦，适口性差，过量添加后抑制了雏鸡食欲，进而引起生长迟缓、免疫力低下等。通过本实验能够初步得到组方剂量和疗效之间的关系：常山柴胡组方按照1.0 g/只和2.0 g/只给药具有良好的抗球虫效果。结合生产用药成本，可确定1.0 g/只/日为有效的用药剂量。

参考文献：

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[4] 郭志坚, 王玲, 龚振兴, 等. 常山对人工感染的鸡球虫病疗效研究. 中国家禽, 2017,39(2): 57-59.

[5] 李云虎, 李东, 王春勇. 《伤寒论》大柴胡汤临症应用辨析. 中医杂志, 2017(58)6: 475-478.

[6] 李国清. 兽医寄生虫学[M]. 广州：广东高等教育出版社, 1999:228.

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[9] 杜会茹, 张越, 马东来, 等. 抗球虫药常山酮的研究进展[J]. 黑龙江畜牧兽医, 2013(2):29-31.

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[11] 张婷钰, 张永纳, 信素华, 等. 鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊的分离与纯化[J]. 郑州牧业工程高等专科学校学报, 2015(4):4-9.