固相萃取-气相色谱法测定油料和植物油中草除灵

韦丹青，胡永健，杨亚琴，刘进玺，王会锋，冯书惠，曹　秀，钟红舰

（河南省农业科学院 农业质量标准与检测技术研究所，郑州　450002）

草除灵（benazolin-ethyl）化学名称为4-氯-2-氧代苯并噻唑-3-基乙酸乙酯，分子式为C11H10ClNO3S，商品名好实多、高特克等。其为选择性、内吸传导型芽后除草剂，用于油菜、苜蓿等防除多种一年生阔叶杂草[1]。草除灵对油菜田猪殃殃和繁缕等高效，对油菜安全[2-3]。虽然草除灵相对安全，但长期使用也会造成一定的污染，国内国际相关限量标准也相继出台。我国规定草除灵在油菜籽中的最大残留限量为0.2 mg/kg[4]；2004年，草除灵被欧盟列入禁止销售和使用的农药。有关草除灵原药及制剂的液相、气相色谱检测方法已有报道[5-7]，但是对草除灵残留量的测定及其降解的研究甚少[8-10]。本文中草除灵残留采用乙腈提取，弗罗里硅土柱净化，气相色谱-电子捕获检测器（GC-ECD）测定，建立气相色谱定量分析油料和植物油中草除灵残留量的方法。

1　材料与方法

1.1　材料与试剂

固相萃取（SPE）柱（弗罗里硅土，1 000 mg，6 mL），上海月旭公司。油菜籽、大豆油，市售产品。草除灵标准品（＞99.5%），德国Dr.Ehrenstorfer公司；乙腈（色谱纯），默克化工技术（上海）有限公司；正己烷（色谱纯），赛默飞世尔科技（中国）有限公司；丙酮（色谱纯），美国J.T.Baker公司；其余试剂为分析纯；超纯水由Milli-Q超纯水系统制。

1.2　仪器与设备

岛津GC-2010 Plus气相色谱仪（配ECD检测器），日本Shimadzu公司；色谱柱TR-5ms（30 m×0.25 mm，0.25 μm），美国Thermo Fisher Scientific公司；分析天平（精度0.000 1 g），瑞士Sartorius公司；分析天平（精度0.01 g），英国艾德姆衡器（武汉）有限公司；自动均质仪，美国Tomtec公司；Milli-Q超纯水发生器，美国Millipore公司；RE-52AA型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；QGC-12T氮气吹干仪，上海全岛公司；HY-6双层摇瓶机，金坛市医疗仪器厂；GL-21B高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；SK-1快速混匀器，金坛市中大仪器厂；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司。

1.3　试验方法

1.3.1溶液的配制

称取草除灵标准品10 mg（精确至0.000 1 g），用丙酮溶解并定容至10 mL，制得1 g/L的标样储备液，于4℃避光储存。根据需要，将储备液用正己烷稀释成不同质量浓度的标样工作溶液，即用即配。

2%丙酮正己烷溶液：量取丙酮2 mL，用正己烷溶解并定容至100 mL。

6%丙酮正己烷溶液：量取丙酮6 mL，用正己烷溶解并定容至100 mL。

1.3.2样品前处理

1.3.2.1样品的提取

将油料样品粉碎，使其通过425 μm的标准网筛。称取粉碎油料样品5.00 g（精确至0.01 g）于100 mL均质瓶中，加入20 mL水浸泡2 h。加入50 mL乙腈，在匀浆机中高速匀浆2 min后过滤，滤液收集到装有5～7 g氯化钠的100 mL具塞量筒中，盖上塞子，剧烈振荡1 min，在室温下静置30 min，使乙腈相和水相分层。从具塞量筒中吸取10 mL乙腈溶液，转入圆底烧瓶，40℃水浴旋转蒸发至近干，加入2.0 mL正己烷，盖上铝箔，待净化。

称取搅拌均匀的植物油样品2.00 g（精确至0.01 g）于100 mL离心管中，加入10 mL正己烷溶解后，再加入50 mL正己烷饱和乙腈溶液，充分混合后振荡30 min，3 000 r/min离心5 min，吸取10 mL乙腈溶液，转入圆底烧瓶中，40℃水浴旋转蒸发至近干，加入2.0 mL正己烷，盖上铝箔，待净化。

1.3.2.2样品的净化

将弗罗里硅土萃取柱（1 000 mg，6 mL）依次用5 mL丙酮＋正己烷（体积比为1∶9）、5 mL正己烷活化，当溶剂液面至柱吸附层表面时，立即倒入1.3.2.1中待净化溶液，用5 mL 2%丙酮正己烷溶液冲洗烧杯后淋洗弗罗里柱，然后用10 mL 6%丙酮正己烷溶液洗脱，收集全部洗脱液，40℃水浴中氮气吹干，用正己烷定容至2.0 mL，待GC-ECD测定。

1.3.3色谱条件

色谱柱：TR-5ms柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；检测器：ECD检测器，温度310℃。载气为N2（＞99.999%），流速1.0 mL/min。进样体积1 μL，不分流模式进样，进样口温度280℃。升温程序：初始柱温为120℃，保持1 min；然后以20℃/min升至240℃；再以3℃/min升至270℃，保持1 min；最后以20℃/min升至290℃，保持1 min。在上述色谱条件下，草除灵的保留时间为9.958 min。0.01 mg/L草除灵标样溶液色谱图见图1。

图1　0.01 mg/L草除灵标样溶液谱图

2　结果与分析

2.1　提取溶剂的选择

在农药残留分析中，常以甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯等作为提取溶剂。由于乙腈对农药的提取效率高，并能有效减少油脂与色素的干扰，且在氯化钠饱和的状态下，乙腈能与水清晰分层，而不需要引入非极性溶剂[11]。因此，本试验选择乙腈作为提取溶剂。油料选取油菜籽样品，植物油选取大豆油样品进行试验。试验结果证明：乙腈对油菜籽样品中草除灵的提取效果很好，能满足农药残留检测的要求。乙腈提取大豆油样品时会溶解部分油脂，对样品净化及分析造成一定的干扰，因此使用正己烷饱和乙腈溶液作为提取溶剂，则提取液中的油脂含量大大减少。

2.2　净化柱及淋洗液的选择

弗罗里硅土柱又称硅镁复合吸附剂，可从非水溶液中吸附低极性和中等极性化合物，具有灵敏度高，吸附容量大，稳定性好等特点[12]。其常用于农药残留检测的净化、分离等，尤其适用于有机氯类农药。采用不同洗脱溶剂进行弗罗里硅土柱净化效果验证。选用弗罗里硅土柱（1 000 mg，6 mL），依次用5 mL丙酮＋正己烷（体积比1∶9）、5 mL正己烷活化，将2 mL质量浓度0.025 mg/L的草除灵标样溶液（正己烷为溶剂）转入弗罗里硅土柱，然后用5 mL不同体积分数的丙酮正己烷溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干后用正己烷溶解，待GC-ECD测定。回收率结果见表1。由表1可知：5 mL 6%丙酮正己烷溶液可将目标

表1　不同体积分数丙酮正己烷溶液洗脱对回收率的影响 %

物洗脱完全；8%丙酮正己烷溶液极性更大，会有相对多的杂质被洗脱。

2.3　线性相关性测定

用1 mg/L标样储备液配制质量浓度分别为0.001,0.005,0.01,0.02,0.06,0.10 mg/L草除灵标样溶液，各取1 μL进行气相色谱测定。以草除灵色谱峰的峰面积为纵坐标，标样溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线（见图2）。结果显示，草除灵的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，线性方程为y=7 233 498 x＋15 621，相关系数为0.999 4。

图2　草除灵标准曲线

在上述色谱条件下，草除灵的最小检出量为1.0×10-12g；在上述提取方法和测定条件下，草除灵的定量限（LOQ）为0.05 mg/kg。

2.4　方法准确度和精密度测定

选取油菜籽和大豆油空白样品，以0.05,0.10,0.20,0.40 mg/kg为添加水平进行回收率试验。样品添加草除灵后，涡旋30 s，静置30 min，待草除灵被样品充分吸收后，按照上述样品前处理方法和仪器条件进行测定，每个水平重复5次，结果见表2。

表2　方法加标回收率和相对标准偏差（n=5）

由表2可知：草除灵的平均回收率为74.4%～110.9%，相对标准偏差为3.1%～6.8%。方法符合农药残留检测的要求。油菜籽和大豆油空白样品及添加色谱图见图3～图6。

图3　油菜籽空白谱图

图4　油菜籽添加草除灵（0.1 mg/kg）谱图

图5　大豆油空白谱图

图6　大豆油添加草除灵（0.1 mg/kg）谱图

3　结论

本文建立了油料和植物油中草除灵残留量的气相色谱检测方法。此方法的回收率为74.4%～110.9%，相对标准偏差为3.1%～6.8%，LOQ为0.05 mg/kg。结果表明，本方法可满足油料和植物油中草

除灵残留量的分析要求。

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