趋化因子CXC家族基因多态性与丙型肝炎抗病毒治疗效果的相关性分析

陈红波，徐银，张永峰，王一凡，黄鹏，张美玲，陈明珠，喻荣彬

（1.江苏大学附属句容医院感染性疾病科，江苏句容212400；2.南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系，江苏南京211166）

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染引起的一种全球流行性疾病，是导致肝硬化、肝细胞癌等终末期肝病的重要原因之一，主要通过血液及血制品、性接触及母婴传播［1］。据WHO最新统计，全球约有1.85亿人感染HCV，每年新发丙肝病例300万～400万例。然而由于病毒生物学特征及宿主免疫功能等多方面的因素，机体感染HCV后往往难以有效地清除病毒，HCV感染者约有80%会发展成慢性肝炎，其中20%～30%会发展成肝硬化，肝硬化患者中每年有1%～4%会发展成肝细胞癌［2－3］。由于HCV基因组的高突变性，目前尚无有效疫苗来预防感染。因此，HCV感染是一种危害严重的传染病，及时进行有效的抗病毒治疗是治疗及阻止疾病进展的重要措施。

目前国际公认的传统治疗方案为聚乙二醇化干扰素联合利巴韦林。只要诊断明确，有临床抗病毒治疗的适应证／无禁忌证的慢性丙型肝炎患者，都要进行积极的抗病毒治疗。经过正确及时的抗病毒治疗后，获得持续病毒学应答（sustained virological response，SVR）的患者可实现临床治愈，并可降低肝硬化及肝癌等的发生率［4］。但影响慢性丙型肝炎患者达到SVR的因素尚未明确，因此，本研究选择接受抗病毒治疗后的慢性丙型肝炎患者进行流行病学随访，以探索影响抗病毒治疗的因素，为有效开展丙肝的抗病毒治疗提供更多依据。

1　对象与方法

1.1　病例

本研究选取的282例研究对象为2011年1月至2015年12月间在句容市人民医院感染科住院及门诊确诊的慢性丙型肝炎患者。纳入标准：①HCV抗体阳性，且HCV RNA阳性；②未合并乙型肝炎病毒和（或）艾滋病毒感染；③无其他导致肝病的原因；④所有患者均接受抗病毒治疗，且为聚乙二醇干扰素α（pegylated interferon-α，Peg-IFN-α）联合利巴韦林，根据丙型肝炎防治指南，全部患者均在48周内每周1次皮下注射Peg-IFN-α-2b，剂量180μg，联合口服利巴韦林600～1 000 mg／d。

1.2　调查内容

对每位患者均采用“人群健康状况调查表”进行问卷调查，内容包括一般人口学特征、既往患病史，家族患病史、是否合并乙肝感染、是否有脂肪肝、胆囊炎、慢性肾炎、高血压等疾病信息。并收集基线病毒载量、血常规、尿常规、各项生化指标（包括肝功能、肾功能、甲状腺功能等指标）等资料。全部病例均进行肝脏B超检查。每名患者在接受检查后，分别采集5 mL静脉血进行血清学检测和DNA提取。对研究对象进行随访并收集治疗48周及治疗结束后24周的病毒载量资料。

1.3　病毒检测和基因分型

采用酚 氯仿抽提法提取外周血DNA［5］。SNP位点基因型检测采用ABI公司设计的TaqMan-MGB荧光探针PCR法。基因分型选择位于3′UTR的CXCL9 rs10336、rs3733236、CXCL12 rs1801157，基因分型率达100%。通过SDS 2.3软件包（美国Applied Biosystems公司）读取基因分型结果。

1.4　质量控制

所有调查表及检查项目由专业人员负责分工完成，所有从业人员均经培训合格后方可参与该项研究工作。临床诊断和治疗由专业医务人员开展。专门人员负责样本实验室检测。所有的标准均严格统一。项目负责人定期定额随机抽取相关项目复查，制订科学的具体实验室操作手册，达到控制质量的目的。由专人随机抽取10%的实验结果，进行重复检测。为保证数据质量，所有数据均采用双人双轨法录入。

1.5　数据统计分析方法

采用EpiData 3.10和STATA 12.0软件管理、描述及分析数据。临床资料描述采用（±s）或构成比。t检验和χ2检验用于比较SVR和非SVR组间社会人口学特征以及其他相关因素的分布差异；以是否获得SVR为应变量，多因素Logistic回归分析用于筛选影响慢性丙型肝炎治疗效果的相关因素，关联强度指标采用OR及其95%CI。采用向前逐步法，纳入标准为 P＜0.05，剔除标准为 P＞0.051。检验水准 α＝0.05。

2　结果

2.1　病例基线特征

282例接受Peg-IFN-α联合利巴韦林抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者，平均年龄为（53.05±8.31）岁；其中男 68例 （24.11%），女 214例（75.89%）。治疗 48周后，180例（63.83%）达到SVR，102例（36.17%）未出现 SVR反应（非 SVR组）。SVR组与非SVR组间基线HCV-RNA、空腹血糖、血清促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）和甲胎蛋白含量差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1　两组慢性丙型肝炎患者的基线特征

2.2　候选基因位点与SVR的关系

结果如表2所示，SVR组与非SVR组CXCL9 rs10336、rs3733236、CXCL12 rs1801157间差异无统计学意义。CXCL9 rs10336的TT基因组由于样本量过少，P值缺乏。分析这3个位点与SVR的关联时，采用显性、隐性及相加模型，调整因素为年龄、性别、Log HCV-RNA、空腹血糖、TSH及甲胎蛋白水平。结果未显示 CXCL9 rs10336、rs3733236、CXCL12 rs1801157位点影响患者SVR的获得。

2.3　多因素Logistic回归分析结果

将单因素分析中有统计学意义的变量纳入多因素分析。结果显示，基线HCV-RNA、TSH水平和空腹血糖是预测慢性丙型肝炎治疗是否达到SVR的独立影响因素。Log HCV-RNA水平低（OR＝0.72，95%CI＝0.53～0.99）、TSH水平高（OR＝1.22，95%CI＝1.04～1.42）和空腹血糖水平低（OR＝0.85，95%CI＝0.72～0.99）的患者越容易达到SVR。见表3。

表2　所选的位点基因型分布与SVR关联分析　例（%）

表3　3个变量的逐步Logistic回归分析

3　讨论

慢性丙型肝炎的治疗是世界性难题，在国内外一些研究报道中，HCV和宿主的基因型、病毒载量、维生素的摄取以及自身抗体等都会影响抗病毒治疗的效果［6－11］。本次研究共纳入282例接受抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者，其中180例获得SVR，SVR率为63.83%。SVR率较高的原因可能是本研究排除了依从性不好的患者，既往研究表明，依从性是影响丙肝治疗效果最直接的原因之一；另一方面由于未获得HCV基因型信息，可能对结果造成一定的影响。

本研究结果显示，基线低病毒载量可能更易获得SVR，这与之前国内外的研究结果一致［12－14］。流行病学研究表明，HCV感染与糖尿病密切相关，增加了糖尿病的发生风险［15］，空腹血糖正常者可能更易获得SVR［16］。而本研究结果显示空腹血糖低者可能更易获得SVR，可能原因是本次获得SVR的研究对象中血糖正常者占73.33%。另外本研究还发现基线TSH水平高可增加患者达到SVR的可能性，这在以往的报道中并未涉及很多，其中的影响机制有待于进一步研究。

许多研究证明，趋化因子受体基因多态性可影响慢性丙型肝炎的炎症和纤维化进展［17－18］。研究发现 CXCL9 rs10336 TT基因型作为保护因素与HCV基因型1和4患者的SVR发生率升高相关［19－20］。但本研究未发现CXCL9 rs10336、rs3733236和CXCL12 rs1801157的各基因型与SVR间存在显著性关联，可能是由于本研究人群中CXCL9 rs3733236和rs10336的等位基因T频率均较低，对结果造成了一定影响，需要在以后的工作中进一步扩大样本量，以验证本研究得出的结论。

本研究中的患者全部来自江苏句容地区既往献血人群，长期居住在户籍地，流动性小，联系便捷，有效降低了失访率。另外本研究排除了依从性不好的患者。但本研究只是对慢性丙型肝炎抗病毒治疗效果的影响因素进行了初步分析，只使用了SVR一个指标进行衡量，并且没有涉及慢性丙肝抗病毒治疗的机制。在今后的研究中，应结合更多的以实验为基础的研究，探讨慢性丙肝抗病毒治疗的具体机制，为实现更有效的丙肝治疗提供参考依据。

［参考文献］

［1］Lingala S，Ghany MG.Natural history of hepatitis C［J］.Gastroenterol Clin North Am，2015，44（4）：717－734.

［2］Bertino G，Ardiri A，Proiti M，et al.Chronic hepatitis C：This and the new era of treatment［J］.World JHepatol，2016，8（2）：92－106.

［3］Taherkhani R，Farshadpour F.Epidemiology of hepatitis C virus in Iran［J］.World J Gastroenterol，2015，21（38）：10790－10810.

［4］张艳茹.维生素D对慢性丙型肝炎抗病毒治疗疗效和预后的影响分析［D］.广州：南方医科大学，2014.

［5］Saldanha J，Gerlich W，Lelie N，et al.An international collaborative study to establish aWorld Health Organization international standard for hepatitis B virus DNA nucleic acid amplification techniques［J］.Vox Sanguinis，2001，80（1）：63－71.

［6］陈海英.慢性丙型肝炎患者干扰素治疗前后丙肝病毒基因部分序列分析［D］.长春：吉林大学，2007.

［7］梅儒齐.单核苷酸多态性与丙肝患者临床表现及抗病毒治疗应答的相关性研究［D］.长春：吉林大学，2016.

［8］Rong X，Lu L，Wang J，etal.Correlation of viral loads with HCV genotypes：higher levels of virus were revealed among blood donors infected with 6a strains［J］.PLoSOne，2012，7（12）：e52467.

［9］Kitson MT，Dore GJ，George J，etal.Vitamin D status does not predict sustained virologic response or fibrosis stage in chronic hepatitis C genotype 1 infection［J］.J Hepatol，2013，58（3）：467－472.

［10］孙艳.两种维生素在慢性肝病患者中浓度和疗效及分子机理的理论研究［D］.济南：山东理工大学，2013.

［11］房熙峰.检测慢性丙肝患者血清中自身抗体的临床价值［J］.世界最新医学信息文摘，2017，17（11）：106－107.

［12］张彦芳，张彦敏，孙春秀，等.丙型肝炎持续病毒学免疫应答影响因素分析［J］.标记免疫分析与临床，2016，23（02）：186－189.

［13］王瑞，刘玉佩，钱静，等.慢性丙型肝炎抗病毒治疗后患者体内持续病毒学应答率影响因素分析［J］.山东医药，2013，53（27）：7－10.

［14］Poordad F，Bronowicki JP，Gordon SC，et al.Factors that predict response of patients with hepatitis C virus infection to boceprevir［J］.Gastroenterology，2012，143（3）：608－618.

［15］Petit JM，Bour JB，Galland-Jos C，et al.Risk factors for diabetesmellitus and early insulin resistance in chronic hepatitis C［J］.JHepatol，2001，35（2）：279－283.

［16］Manos MM，Darbinian J，Rubin J，et al.The effect of hepatitis C treatment response on medical costs：a longitudinal analysis in an integrated care setting［J］.JManag Care Pharm，2013，19（6）：438－447.

［17］Limou S，Coulonges C，Herbeck JT，et al.Multiple-cohort genetic association study reveals cxcr6 as a new chemokine receptor involved in long-term nonprogression to aids［J］.J Infect Dis，2010，202（6）：908－915.

［18］Estrabaud E，Vidaud M，Marcellin P，etal.Genomics and HCV infection：Progression of fibrosis and treatment response［J］.JHepatol，2012，57（5）：1110－1125.

［19］Butera D，Marukian S，Iwamaye AE，et al.Plasma chemokine levels correlate with the outcome of antiviral therapy in patients with hepatitis c［J］.Blood，2005，106（4）：1175－1182.

［20］Pineda-Tenor D，Berenguer J，Jim nez-Sousa MA，et al.Cxcl9，cxcl10 and cxcl11 polymorphisms are associated with sustained virologic response in hiv／hcv-coinfected patients［J］.JClin Virol，2014，61（3）：423－429.