骨肉瘤组织XIAP蛋白表达临床意义的研究

李从达 万磊 林祥波 王宾 王代宪

【摘要】 目的 综合分析骨肉瘤组织X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的临床意义， 深入研究骨肉瘤发生和发展相关作用。方法 28例骨肉瘤组织标本作为实验组， 28例正常骨组织作为对照组。两组均采用免疫组织化学SP染色法。比较两组XIAP蛋白阳性表达情况， 观察XIAP蛋白阳性表达与骨肉瘤组织患者临床参数关系。结果 实验组XIAP蛋白阳性表达率为64.29%， 对照组XIAP蛋白阳性表达率为0， 实验组XIAP蛋白阳性表达率显著高于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。XIAP蛋白高表达与XIAP蛋白低表达患者性别、年龄比较差异均无统计学意义（P>0.05）；XIAP蛋白高表达与XIAP蛋白低表达患者病理分型和临床分期比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 骨肉瘤组织XIAP蛋白呈现高表达， 对骨肉瘤患者的预后具有参考价值。

【关键词】 骨肉瘤组织；X连锁凋亡抑制蛋白；表达；临床意义

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.09.005

【Abstract】 Objective To comprehensively analyze the clinical significance of X-linked inhibitor of apoptosis protein （XIAP） expression in osteosarcoma tissue， and further study the related role of occurrence and development. Methods There were 28 osteosarcoma tissue as experimental group， and 28 normal bone tissue as control group. Immunohistochemistry SP staining was used in both groups. The positive expression of XIAP protein in two groups was compared， and the relationship between the positive expression of XIAP and the clinical parameters of osteosarcoma tissue patients was observed. Results The experimental group had positive expression of XIAP as 64.29%， which was 0 in the control group. The control group had obviously higher positive expression of XIAP than the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in gender and age between high and low expression of XIAP patients （P>0.05）. There was no statistically significant difference in pathological classification and clinical staging between high and low expression of XIAP patients （P>0.05）. Conclusion The high expression of XIAP in osteosarcoma tissue is of reference value for the prognosis of osteosarcoma patients.

【Key words】 Osteosarcoma tissue； X-linked inhibitor of apoptosis protein； Expression； Clinical significance

骨肉瘤是較为常见的一种恶性骨肿瘤疾病， 好发于青少年人群， 具有以下几种临床特点：①侵袭性非常强；②预后效果较差；③转移率高[1]。为了能够研究出骨肉瘤预后指标， 相关学者进行了大量的临床研究。XIAP蛋白是最新发现的细胞凋亡调节因子， 在肠癌、胰腺癌和肺癌患者的肿瘤细胞表达中呈现高表达， 而XIAP蛋白的高低表达水平与肿瘤的预后效果密切相关[2]。但是， XIAP蛋白在骨肉瘤中的表达和预后效果等研究资料较少。本文将综合分析骨肉瘤组织XIAP蛋白表达的临床意义， 深入研究骨肉瘤发生和发展相关作用， 为治疗骨肉瘤患者提供科学的数据参考。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取本院2015年11月～2017年11月收治的28例骨肉瘤组织标本作为实验组， 选取同一阶段28例正常骨组织作为对照组。纳入标准：①所有入组者均在知情下参与本次研究；②实验组均经过病理学、临床研究和影像学等确诊；③两组均进行手术治疗且在标本采集之前未实施放化疗。排除标准：①中途退出本次研究者；②精神障碍者。实验组中男19例， 女9例；年龄12.22～20.32岁， 平均年龄（16.27±3.32）岁；体重36.33～55.15 kg， 平均体重（45.74±10.13）kg；骨肉瘤组织类型：2例腓骨、10例肱骨、8例股骨、8例胫骨；Enneking临床分期：Ⅰ期6例， ⅡA期7例， ⅡB期10例， Ⅲ期5例。对照组中男21例， 女7例；年龄12.25～20.29岁， 平均年龄（16.27±3.35）岁；体重36.35～55.12 kg， 平均体重（45.73±10.16）kg。两组性别比例、平均体重、平均年龄等一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 实验方法 两组入选者均采用免疫组织化学SP（组织标本用10%甲醛浸泡， 石蜡包埋， 常规厚4 μm连续切片， 常规脱蜡、水化， 灭活）染色法， 滴入XIAP蛋白多克隆抗体， 其他试剂（DAB显色试剂盒、EDTA抗原修复液和PBS粉剂）由北京某医院病理科所提供。操作过程中需要严格按照说明书， 以PBS代替一抗作为阴性对照。

1. 3 观察指标及判定标准 比较两组XIAP蛋白阳性表达情况， 观察XIAP蛋白阳性表达与骨肉瘤组织患者临床参数关系。XIAP蛋白表达：根据细胞着色程度评分：0分为不着色、1分为浅黄色、2分为棕黄色、3分为棕褐色。随机观察10个高倍视野（×400）， 计数100个骨肉瘤细胞， 再计算阳性百分率；各视野计数相加之和除以10作为最后计分。综合计分（颜色计分与阳性细胞百分率的乘积为每例组织染色的综合计分）中低水平表达为0～1分， 高水平表达为>1分。

1. 4 统计学方法 采用SPSS13.0计学软件对研究数据进行分析处理。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两组XIAP蛋白阳性表达率比较 实验组XIAP蛋白阳性表达率为64.29%（18/28）， 对照组XIAP蛋白阳性表达率为0（0/28）， 实验组XIAP蛋白阳性表达率显著高于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。

2. 2 XIAP蛋白阳性表达与骨肉瘤组织患者临床参数关系 XIAP蛋白高表达中男10例、女4例， XIAP蛋白低表达中男9例、女5例；XIAP蛋白高表达中年龄<18岁有6例、≥18岁有8例， XIAP蛋白低表达中年龄<18岁有7例、≥18岁有7例；XIAP蛋白高表达与XIAP蛋白低表达患者性别、年龄比较差异均无统计学意义（P>0.05）。XIAP蛋白高表达与XIAP蛋白低表达患者病理分型和临床分期比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3 讨论

骨肉瘤是最为常见的原发性骨肿瘤之一， 在化疗之前， 5年内的骨肉瘤生存率仅占18.83%。随着影像学技术和外科技术的不但发展， 5年内的骨肉瘤生存率上升到58.98%～62.33%[3]。常見的骨肉瘤标本一般为手术切除标本， 化疗会影响到XIAP水平的表达敏感性。基于此， 为了消除化疗产生的影响， 必须对骨肉瘤化疗之前的穿刺标本加以研究分析， 从而方便认清XIAP水平表达和骨肉瘤发生发展的关系[4]。

XIAP是一种独特的处于细胞增殖和细胞死亡分界面的分子， XIAP能够显著抑制凋亡蛋白酶， 使得肿瘤细胞能够逃避细胞周期检测点的监控， 从而促进肿瘤细胞的分裂和增殖。XIAP在胰腺癌细胞系和大肠癌细胞系中呈现高表达， 在皮肤纤维原细胞系和正常人乳腺上皮细胞系中呈现低表达[5， 6]。在急性髓性白细胞疾病中， XIAP的异常增高与预后效果不良密切相关。除此之外， XIAP表达增高与生存期限过短密切相关， 高表达XIAP水平也是胰腺癌化疗耐药的主要原因。本文研究结果显示实验组XIAP蛋白阳性表达率显著高于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。研究资料显示[5]， XIAP与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。通过上述数据不难发现 ， XIAP在正常骨组织和骨良性病变组织表达中呈现低表达水平， 在骨肉瘤组织中表达量显著上升。在骨肉瘤组织中， 通过采取放射治疗方法和化学治疗方法等， 促进肿瘤细胞凋亡， 在一定程度上释放骨肉瘤组织对放射治疗和化学治疗不敏感的原因。

本文研究结果还显示， XIAP蛋白高表达与XIAP蛋白低表达患者性别、年龄比较差异均无统计学意义（P>0.05）；XIAP蛋白高表达与XIAP蛋白低表达患者病理分型和临床分期比较差异均无统计学意义（P>0.05）。研究资料显示， 胰腺癌细胞系中的XIAP表达与化疗耐药密切相关， XIAP在胰腺癌细胞系中呈现高表达， 在正常细胞系中呈现极低表达， 与此同时对肿瘤细胞的耐药性也产生一定影响， XIAP蛋白水平表达能够作为评价骨肉瘤生物学行为的一个独立危险因

素[7]。通过研究资料证实， XIAP在骨肉瘤组织中的表达水平与肿瘤大小以及肿瘤转移密切相关[8， 9]。XIAP水平表达能够抑制肿瘤细胞的分化， 积极诱导细胞凋亡， 组织细胞进入到G0期。XIAP对恶性肿瘤的调节与其自身特殊结构密切相关， XIAP由N端杆状病毒的IAP重复区域和C端环状锌指结构所组成， 分别由4个阅读框转录翻译而成。XIAP是一种抑制细胞凋亡的基因， 编码产物XIAP蛋白的过度表达会抑制细胞凋亡， 最终促进肿瘤的发生和发展。研究资料显示， 运用免疫组化方法检测人胎盘滋养细胞的XIAP蛋白表达水平[10]。从上述研究结果不难看出， XIAP蛋白水平在妊娠早期滋养层中过于旺盛表达， 在妊娠晚期时， XIAP水平表达显著下降， XIAP的表达与细胞增殖密切相关。XIAP在人类白血病和肝癌患者和子宫颈癌患者中有增高表达。XIAP抑制凋亡的作用对骨肉瘤的发生具有显著作用， 因此提示XIAP抑制细胞凋亡的作用与早期骨肉瘤分子事件密切相关。

综上所述， 骨肉瘤组织XIAP蛋白呈现高表达， 对骨肉瘤患者的预后具有参考价值。

参考文献

[1] 张龙， 王景峰， 刘宝平， 等. 骨肉瘤组织中XIAP和NF-κB的表达变化及意义. 山东医药， 2016， 56（45）：57-59.

[2] 尹军强， 谢显彪， 温丽丽， 等. 华蟾酥毒基诱导骨肉瘤细胞凋亡的体外实验研究. 中华骨科杂志， 2014， 34（4）：472-477.

[3] 何畔， 梁珊， 王愉思， 等. RNAi沉默XIAP基因抑制MG-63细胞增殖及其分子机制. 江苏医药， 2011， 37（2）：148-151.

[4] 申莹莹， 苏小桃， 欧军， 等. 二甲双胍联合异羟肟酸对骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响. 中南医学科学杂志， 2016， 44（1）：11-15.

[5] 邢旻琰， 何爱娜， 余文悉， 等. 骨肉瘤组织XIAP蛋白表达临床意义的研究. 中华肿瘤防治杂志， 2013， 20（3）：214-216， 220.

[6] 杨运发， 杜洪， 王建炜， 等. 凋亡抑制蛋白XIAP在骨肉瘤组织中的表达及意义. 中国骨与关节杂志， 2008， 7（3）：000146-000148.

[7] 邓超. XIAP和caspase-3在骨肉瘤中的表达及其意义. 哈尔滨医科大学， 2008.

[8] 杨运发， 杜洪， 黄蘋， 等. XIAP表达在ⅡB期骨肉瘤早期预后的意义. 中国骨科临床与基础研究杂志， 2009， 1（1）：62-65.

[9] 杨湘丞. XIAP和Caspase-3在骨肉瘤中的表达及意义. 中南大学， 2009.

[10] 邓超， 曲国蕃. XIAP和Caspase-3在骨肉瘤中的表达及其意义. 哈尔滨医科大学学报， 2010， 44（2）：156-159.

[收稿日期：2017-12-13]