芫花根水提物镇痛机制的研究

潘琳琳,史仁杰

(1.南京中医药大学 研究生院，江苏 南京　210001；2.江苏省中医院 肛肠科，江苏 南京　210001)

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1实验动物SD大鼠，雌性，体质量180～220 g,饲养在温度(23±1) ℃、湿度(55±10)%和光暗周期为10 h(光)/14 h(暗)的动物饲养室中,自由取食、饮水，江苏省中医院药理实验室提供。

1.1.2实验药材(1)芫花根水提取物浸膏：取1 000 g芫花根药物饮片，首先加5倍体积的水浸没药材，浸泡24 h后，进行减压提取，保持85°微沸2 h，双层纱布过滤，分离煎出液，药渣依法煎出2次，合并各次煎出液。(2)黄芩油膏：江苏省中医院院内制剂。

1.2　方法

1.2.2深Ⅱ度烫伤模型的制备将大鼠用棉线固定在木板上，在老鼠背部用剃毛器剃毛备皮。准备一个直径为2.8 cm的无底玻璃管，玻璃管下方以薄膜周围固定，将其按在大鼠背部正中央，将30 ml(95±1)℃的热水倒进管内，用力按住玻璃管，使充分接触鼠背，保持20 s 后，移开玻璃管。大鼠烫伤后，伤口暴露，单笼饲养。烫伤后创面皮肤立即变白，轻度肿胀，未形成水泡，烫伤部位和正常皮肤之间有明显界限，24 h后伤口部位开始出现轻微硬痂般棕色，界限更为明显，48 h后会出现早期硬痂，与创面面积相同，基本符合深Ⅱ度烫伤特征，表明模型制作成功。空白对照组不做任何处理，B组烫伤处外敷芫花根水提物浸膏纱布，C组敷黄芩油纱布。

1.2.4检测方法(1)加样：加一定稀释的待检样品0.1 ml于上述已包被之反应孔中，置37 ℃孵育1 h，(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)；(2)洗涤，PBST洗涤五次，每次30秒；(3)加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1 ml。37 ℃孵育0.5～1 h；(4)洗涤，PBST洗涤五次，每次30 s；(5)加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1 ml，37 ℃ 10～30 min；(6)终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05 ml；(7)用酶标仪测定每孔在450 nm处的OD值。

1.3　统计学处理

2　结　　果

2.1　用药后对大鼠痛阈的影响

造模后大鼠痛阈较正常明显降低，随给药时间的延长，芫花根水提物及黄芩油膏组痛阈较对照组有提高，空白组痛阈仍较低，表明芫花根水提物及黄芩油膏均可提升大鼠痛阈，与空白组相比较有差异(P<0.05)，但芫花根组与黄芩油膏组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

组　别3h6h12h正常组15．22±0．9716．00±1．2215．44±0．72空白对照组7．11±0．607．55±1．016．77±0．67芫花根水提物组7．11±0．787．66±1．008．44±1．13黄芩油膏组6．88±0．787．44±1．139．00±1．32

2.2　用药后对大鼠疼痛级别的影响

给药后，各受试组大鼠的疼痛级别评分均降低，且这种作用随着给药时间的延长而增强，表明芫花根水提物及黄芩油膏均可降低大鼠疼痛级别，但两组间比较无统计学意义(P>0.05)，而与空白组相比有差异(P<0.05)。

组　别3h6h12h空白对照组2．44±0．521．66±0．501．33±0．50芫花根水提物组2．44±0．521．55±0．520．77±0．44黄芩油膏组2．44±0．521．55±0．520．66±0．70

2.3　缓激肽含量测定

结果表明，与空白对照组相比，芫花根水提物和黄芩油膏组对缓激肽的生成均有显著的抑制作用(P<0.001)，且这种作用随给药时间的延长而有所增强，黄芩油膏组对缓激肽的抑制作用较芫花根组更为明显，组间差异显著(P<0.001)。

组　别3h6h12h正常组12．95±1．8612．95±1．8612．95±1．86空白对照组37．38±1．0440．87±0．9940．87±0．99芫花根水提物组27．79±1．7922．45±3．2722．45±3．27黄芩油膏组21．26±1．2718．34±2．1818．34±2．18

组　别3h6h12h正常组113．06±6．92113．06±6．92113．06±6．92空白对照组295．57±9．79305．52±9．99318．36±7．49芫花根水提物组251．38±9．16203．79±5．40156．98±8．19黄芩油膏组201．54±7．49175．88±7．54129．34±11．1

3　讨　　论

[参考文献]

[9] 何羽.芫花根水提物对肛瘘术后疼痛、炎性反应与创面愈合影响的临床研究[D].南京：南京中医药大学，2016.

[10] 陈建.芫花根水煎剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑杀作用的研究[D].南京：南京中医药大学，2016.