JJG861-2007《酶标分析仪》检定规程解读和探析

(福建省三明市计量所 福建 三明 365000)

一、概述

酶标分析仪(以下简称酶标仪)广泛地应用在艾滋病检测、临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中，是对酶联免疫检测(EIA)实验结果进行读取和分析的专业仪器。

酶标仪可简单地分为半自动和全自动2大类。而规程的规定按单双波长和通道的区别分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类。目前企事业单位中，半自动或Ⅰ类的仪器较为普及。近年来，全自动酶免仪逐渐得到应用，它将酶免分析和洗板机联成一体，操作过程标准化、规范化，避免了手工操作的误差和交叉污染，提高了检测的精确度和特异性，重复性好，同时大大降低了操作人员的劳动强度，提高了工作效率。

二、主要内容解读和探析

(一)范围

规程不仅适用于酶标仪的首次、后续检定和使用中检验，还可用于型式评价和样机试验，说明该规程比一般的规程适用范围更大一些。但笔者以为，对于全自动酶免仪的检定是否适用，有待商榷。因为全自动酶免仪中增加了洗板机的功能，自动对酶标板进行清洗，清洗干净与否严重影响到检测结果。判断酶标板是否清洗干净，通常用每孔清洗液残留量来表示，而规程中对此没有做任何规定。

(二)计量性能要求

1.关于吸光度指标

对照JJG861-1994酶标分析仪旧规程，笔者发现:新规程删去了对“线性误差、换档误差、测试速度和波长透光特性”等检定项目的要求，增加了对“波长重复性、通道差异”等检定项目的要求，此外，对吸光度单位作了重大修改：旧规程吸光度的单位用“A”表述，而新规程则采用吸光度无单位的表述。笔者认为这是一个正确的修改，因为根据郎伯-比尔定律的数学表达式吸光度A=abc,a、b、c都是有单位的，分别为L/(g·cm)、cm、g/L，三者相乘后，是无单位的。而且，吸光度A值也称光密度OD值,而光密度的定义是入射光强度与透射光强度之比值的常用对数值，是没有量纲单位的一个对数值，显然也是无单位的。此举更正了长期以来业内对吸光度单位描述的失误，并与国际通行的描述接轨了。

2.关于灵敏度指标

规程中灵敏度的单位为L/mg，而在规程中检定方法里对灵敏度的检定没有作计算公式的描述，笔者认为这是该规程的一大失误。其值应为测得的吸光度值除以酶标仪用灵敏度溶液标准物质的浓度值5mg/L，比值大于0.01L/mg时，则可判定该指标符合规程要求。该算法应在规程中明晰地表达出来，以免发生歧解。

(三)通用技术要求

规程中对样品室和运动部分作了明确的规定，确实很有必要。因为酶标仪实质上就是分光光度计，光源的单色尤为重要。样品室若有漏光现象，就会直接影响测量结果。还有，运动部分若有显著的空回，会造成酶标板往返不在同一位置上，也会直接影响测量结果，造成误判。

(四)计量器具控制

1.环境条件

此项中，对光线和振动的要求往往容易被忽略，而这两项尤为重要。光线的直射显然跟样品室漏光一样，直接影响测量结果。酶标仪在测样品的测试过程中，大都要对酶标板里的样品要进行震荡，若有振动干扰，必对测试极为不利。因此，酶标仪应放置在远离窗户、远离室内照明灯的阴暗处为佳。

2.检定设备

规程表3中，对兆欧表的等级要求为0.1级。笔者以为，似乎高了些。规程表1“计量性能要求”里对绝缘电阻并没有特别的规定，只在“通用技术要求”中作了“不小于20MΩ”的规定，并在后续检定中不作要求。而在其他大多数医用电子仪器检定规程中，若有绝缘电阻要求的，对兆欧表的等级也只要求到10级。因此，笔者认为，兆欧表的等级要求到10级即可。

3.标准物质

规程规定，必须使用有证标准物质。在此建议光谱中性滤光片还是向模拟酶标板大小、滤光片固定嵌在其中的制作机构购买，因为若滤光片固定不好，会造成误差。

4.检定项目和检定方法

(1)对照JJG861-1994《酶标分析仪》旧规程，新规程将“波长示值误差”由旧规程的必检项目改为首检项目，在后续检定中不需检定，这大大增强了在实际工作的可操作性，避免了以前检定“波长示值误差”时因为要取下酶标仪所附干涉滤光片而几乎无法实施检定的尴尬局面。当然，对于需首次检定和经维修后可能对仪器有较大影响的仪器，“波长示值误差”和“波长重复性”仍要进行检定，此时，最好请仪器厂家的售后服务技术人员将酶标仪所附干涉滤光片进行拆卸，用Ⅰ级双光束分光光度计检定完后再安装回去。

(2)示值稳定性的检定中，特别要注意仪器吸光度的最大值应取5min、10min中的大者，与初始值相减，并不是我们通常理解的最大值减最小值。

(3)吸光度示值误差和重复性、通道差异的检定，都是使用特定的光谱中性滤光片。目前，很多计量机构仍在使用单片定值的四个滤光片进行检定，此时，特别要注意的是:第一，滤光片要固定好位置，不能在移动酶标板的过程中有丝毫的位置变动；第二，吸光度的读数必须使用同一个孔的吸光度值，否则就会引入通道差异的误差，影响测量结果；第三，对通道差异的检定，规程并没有规定6个吸光度值必须按一定顺序取值，因此，取值的通道应以能固定好滤光片为原则，任意在每个通道上取6次即可。可见，这种使用单片定值的四个滤光片进行检定，给实际操作带来不便，并且容易因位置的变动带来误差。据悉，已有人研制出把四个滤光片固定在96孔微孔酶标板上的装置，使用该装置，就能完全避免位置误差，实际操作极为便利。

(4)在灵敏度的检定中，必须特别强调：第一，所使用的微孔酶标板中的某一孔，必须未含有任何抗原或抗体，换言之，就是必须使用经洗板机清洗甩干后干净的酶标杯；第二，所使用的加样器必须是经检定合格的A级加样器。

三、结束语

酶标仪属于医疗卫生计量器具，仪器准确与否直接关系到广大人民群众的身体健康和生命安全，因此，认真做好酶标仪的检定是从业人员义不容辞的责任。笔者结合工作实际，提出了对规程的一些可能不成熟的理解和心得体会，若有不当之处，欢迎批评指正。