NRF2 启动子区-617G/T多态性与胶质瘤易感性的关联

王春辉，胡国忠，刘 颖，谷洁冰，唐 栋，李松涛*

(1.吉林省人民医院 神经外科,吉林 长春130021；2.吉林大学中日联谊医院 a药剂科;b神经内一科)

胶质瘤是我国最常见的神经上皮细胞肿瘤[1]。由于呈浸润性生长，与正常脑组织无明显界限，难以完全切除，因此极易复发，预后较差。胶质瘤的发病与多种因素有关，包括环境暴露和遗传因素[2,3]。人类核因子E2相关因子2(NRF2)是一类重要的转录因子，通过与抗氧化反应元件(ARE)结合，不仅具有细胞解毒、抗炎和抗氧化作用，而且在化学药物预防肿瘤中起着正反两方面调控作用。胶质瘤中NRF2呈差异性表达[4,5]，NRF2启动子区-617bp的单核苷酸多态性(SNP)rs6721961T等位基因与NRF2蛋白低表达有关[6]。查阅文献，未见该SNP位点rs6721961与胶质瘤相关性的研究报道。本研究运用病例-对照研究探讨rs6721961多态性与我国东北地区胶质瘤的关系，以期为胶质瘤的个体化治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1研究对象

研究对象分为两组：胶质瘤组和正常对照组。样本分别来源于我院神经外科和健康体检中心，相同时期收集，均为汉族个体。

胶质瘤组：经临床病理确诊为胶质瘤患者共156例，平均年龄45.8±16.0岁，中位年龄46岁，其中男性90例，女性66例。星形细胞瘤和多形性胶质母细胞瘤各59例，室管膜瘤19例，混合性胶质瘤7例，中枢细胞瘤6例，少突胶质细胞瘤6例。按照1997年世界卫生组织中枢神经系统肿瘤分级标准：Ⅰ-Ⅱ级89例，Ⅲ-Ⅳ级67例。

正常对照组：经我院体检中心体检健康样本共185例，平均年龄44.5±12.5岁，中位年龄44岁，其中男性100例，女性85例。正常对照组和胶质瘤组年龄和性别分布差异无统计学意义。正常对照组无神经系统和心血管系统疾病，否认肿瘤家族史。

1.2NRF2rs6721961基因分型

采集外周静脉血2 ml，置于乙二胺四乙酸二钠抗凝管中。DNA 提取试剂盒(天根生物技术有限公司，北京)提取DNA，按照说明书操作。运用Taqman基因分型技术对NRF2 rs6721961进行分型。PCR反应总体积10.0 μl，含2 × 通用PCR Master mix 5.0 μl，探针0.5 μl，DNA模板20 ng，无菌去离子水补足体积10.0 μl。7500 Fast实时荧光定量PCR 仪、2 ×通用PCR Master mix 和探针均购自美国ABI 公司。PCR 反应条件：95.0 ℃ 10 min，95.0 ℃ 15 s,60.0 ℃ 1 min，40 个循环。

1.3统计学处理

运用SPSS13.0软件进行统计处理。采用t检验比较胶质瘤组和对照组年龄差异，采用χ2检验分析Hardy-Weinberg平衡、两组间性别差异及NRF2 rs6721961基因型分布，并计算优势比(OR)和95%可信区间(CI)以评价脑胶质瘤的发病风险。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

两组样本NRF2 rs6721961基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡定律(胶质瘤组：χ2=0.004，P=0.95；对照组：χ2=2.26，P=0.13)。病例组和对照组中均检测到三种NRF2 rs6721961基因型：GG、GT和TT。这三种基因型在对照组中的频率分别为48.6%、45.4%和5.9%，而在胶质瘤组中分别为39.7%、46.8%和13.5%。经卡方检验，携带TT基因型者患胶质瘤的风险是携带GG基因型者的2.77倍(χ2=6.59，P=0.01)。G和T等位基因在对照组中频率分别为71.4%和28.6%，而在胶质瘤组中的频率分别为63.1%和36.9%，经卡方检验，携带T等位基因者患胶质瘤的风险是携带G等位基因者的1.45倍(χ2=5.21，P=0.02)(表1)。根据性别、年龄和病理分级进行分层分析，结果显示，以上因素与NRF2 rs6721961多态性无关联(表2)。

表1 NRF2 rs6721961多态性与胶质瘤的相关性 [n(%)]

表2 NRF2 rs6721961多态性与胶质瘤临床特征的相关性 [n(%)]

3 讨论

核因子NRF2是一种重要的抗氧化转录调节因子，在包括胶质瘤的多种肿瘤中差异性表达[4,5]，通过多条信号通路参与肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移和对多种化疗药物耐药[7-9]。

NRF2位于人类第2号染色体长臂3区1带，由NFE2L2编码。2007年，Marzec等[10]分析了NRF2启动子区的SNP功能，发现转录起始位点上游-617bp的rs6721961多态性影响了NRF2的表达，减弱了ARE介导的基因转录。由于rs6721961是一个功能性多态位点，因此，多项遗传易感性研究调查了其与多种肿瘤的相关性。Okano等[11]报道携带rs6721961TT基因型的日本非吸烟女性人群更容易患肺腺癌，并且具有更长的生存期。Hartikainen等[6]报道携带rs6721961 TT基因型的芬兰人群患乳腺癌的风险增加了4.656倍。本研究运用病例-对照研究调查了rs6721961多态性与胶质瘤的相关性，发现携带TT基因型的我国东北人群患胶质瘤的风险增加了2.77倍。推测可能机制是rs6721961T等位基因减弱了NRF2与DNA结合蛋白的亲和力，降低了NRF2的转录，致使NRF2表达下降，促进胶质瘤的发生。然而，Reszka等[12]则报道rs6721961多态性与波兰人群膀胱癌的发病无关。造成以上不一致结果的可能原因是：其一、不同类型肿瘤可能存在不同的易感基因；其二、不同种族rs6721961 GG基因型分布不同，在波兰正常人群中的频率为77.5%[12]，而在本研究人群中的频率为48.6%。其三、肿瘤是多因素共同作用的结果，入选样本的抽样误差及不同环境暴露均可导致不一致的结果。因此，有必要开展不同种族的遗传多态性研究，深入探讨rs6721961多态性及基因-环境交互作用与不同种族胶质瘤的相关性，为胶质瘤的易感基因筛选及个体化治疗提供理论依据。

总之，本研究初步发现，NRF2启动子区rs6721961多态性是我国东北地区胶质瘤的易感因素。然而，其与胶质瘤进展、复发、预后的预测价值及确切的调控机制有待进一步研究。

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