紫杉醇注射液制备工艺研究以及质量控制

闫肃 孙晓雪

摘 要： 目的 建立紫杉醇注射液的制备工艺及质量控制标准。方法 将一定量的紫杉醇与PEG 400混合后，得到溶液A；然后将2份的大豆卵磷脂加入水中，接着加入1份泊洛沙姆，搅拌均匀后，形成B溶液，将溶液A缓慢滴加到溶液B中，边滴加边搅拌，搅拌均匀后过滤除菌得到溶液即为紫杉醇溶液。采用高效液相色谱法对紫杉醇注射液的主要成分紫杉醇的含量进行测定。结果 紫杉醇在0.4～4 μg范围内与峰面积呈现良好的线性关系，平均回收率为99.54%，RSD值为0.51%。结论 采用本方法制备的紫杉醇溶液，操作简单、工艺稳定可靠，建立的高效液相色谱法检测含量的方法灵敏、准确，可用于紫杉醇注射液的质量控制。

关键词： 紫杉醇注射液；质量控制；制备工艺；高效液相色谱法

紫杉醇是一种具有抗肿瘤活性的天然产物，最初是从红豆杉的树皮中提取的粗提物，在对获得粗提物进行活性筛选中，科学家发现这种粗提物能明显抑制小鼠肿瘤细胞的生长，通过实验手段，将这种活性物质得到分离，但由于天然产物中含量极低，一直到20世纪，最初这种活性物质的发现者才同美国Duke大学教授应用x-射线技术分析确定了该活性成份的化学结构为一种四环二萜类化合物，并把它命名成为紫杉醇（Paclitaxel）[1]。紫杉醇已经得到广泛使用，是近十几年来临床治疗恶性肿瘤的重大突破之一[2-3]。本文采用HPLC法以紫杉醇含量为指标对紫杉醇注射液的质量进行控制。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

液相色谱仪（日本岛津），C18色谱柱（150mm×4.6mm，日本岛津）。乙腈为色谱纯（sigma公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。紫杉醇对照品（购自中国药品生物制品检定所），紫杉醇原料（南京道斯夫生物科技有限公司）。

1.2 紫杉醇注射液的制备

将100 mg的紫杉醇与一定量的PEG 400混合后，得到溶液A；然后将2份的大豆卵磷脂加入水中，接着加入1份泊洛沙姆，搅拌均匀后，形成B溶液，将溶液A缓慢滴加到溶液B中，边滴加边搅拌，搅拌均匀后过滤除菌得到溶液即为紫杉醇溶液，浓度为6mg/ml。

1.3色谱条件

高效液相色谱法，色谱条件为C18柱；检测波长220 nm；流速1.0 mL/min；柱温25℃；流动相为乙腈和水体积比为4：1，冰醋酸调pH值。

1.4绘制标准曲线

使用电子天平（梅特勒公司）精密称取一定量的紫杉醇对照品，使用容量瓶配置成2mg/ml的对照品溶液。分别准确进样2、5、10、15、20 μL。以峰面积为横坐标，进样量为纵坐标，得回归方程。

1.5精密度

精密吸取紫杉醇注射液100 μL，转移置10 mL量瓶内，用流动相稀释至刻度，摇匀，重复四次。吸取等量对照品液进行检测，进样量20L，测5次，测量峰面积。计算得平均含量为标示量的99.54%，RSD=0.51%。

1.6稳定性

取步骤1.5配置的紫杉醇供试品溶液，2 h进样一次，共计5次，计算得RSD=1.19%，结果表明供试品溶液在10 h内稳定。

1.7回收率

精密吸取6份紫杉醇注射液，100 μL/份，分别转移置10 mL量瓶中，得到待测样品6份，每瓶加入紫杉醇对照品0.3 mg，计算得平均回收率99.54%。

2 结果

2.1标准曲线

紫杉醇对照品溶液连续进样5次，将获得色谱峰比较并叠加得标准曲线。HPLC结果表明紫杉醇保留时间7.49min。

2.2样品的含量测定

精密量取3批紫杉醇样品各100 μL，置10mL容量瓶中，加流动相至所需刻度，摇匀。经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液2 mL，进样20μL，测得峰面积，计算紫杉醇含量。紫杉醇含量为标示量的97.54%。

3 讨论

紫杉醇是臨床上重要的天然抗癌药物，在多种肿瘤临床上均有广泛的应用，取得了较好的治疗效果[4-5]。紫杉醇亲脂性较高，难溶于水，血浆蛋白结合率约为93%，生物半衰期为5.3～17.4小时，代谢器官主要为肝脏，肾脏清除率仅为5 %。紫杉醇抗癌谱较为广泛，主要适用于乳腺癌和卵巢癌，同时对于黑色素瘤、肺癌、淋巴瘤、大肠癌等均有一定疗效，效果较为显著[6-8]。本研究主要摸索了不同比例的甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈-水系统作为流动相时色谱峰的峰形等，结果显示，醇-水系统下，峰形拖尾较为严重，加少量冰醋酸亦不易调整。本实验同时考察了甲醇-水、乙腈-水等流动相系统，乙腈-水、甲醇-乙腈-水系统下，峰形较好。理论塔板数至少可达5000，添加少量冰醋酸可以使色谱峰形美观，当流动相冰醋酸-乙腈-水（1：400：100）时出峰时间较为合适，且峰形对称性较好。

本实验以含量为指标，采用的HPLC法可以准确地测定紫杉醇注射液中紫杉醇的含量，为提高和完善紫杉醇注射液的质量控制提供依据。

参考文献

[1] Mcphail A T， Breen J J， Quin L D. X-ray analysis of 1-phenyl-4-phosphorinanone. Evidence for a chair conformation with an axial substituent[J]. Journal of the American Chemical Society， 1971， 93（10）： 2574-2575.

[2] Sandler A， Gray R， Perry M C， et al. Paclitaxel-carboplatin alone or with bevacizumab for non-small-cell lung cancer.[J]. New England Journal of Medicine， 2006， 355（24）：2542-2544.

[3] Miller K， Wang M， Gralow J， et al. Paclitaxel plus Bevacizumab versus Paclitaxel Alone for Metastatic Breast Cancer[J]. New England Journal of Medicine， 2007， 357（26）：2666-2667.

[4] 刘海霞. 紫杉醇联合卡铂化疗同步放疗治疗中晚期宫颈癌近期疗效观察[J]. 山东医药， 2017， 57（6）：83-84.

[5] 吴开林， 林龙， 赵国栋. 表柔比星联合紫杉醇治疗三阴性乳腺癌的效果分析[J]. 实用临床医药杂志， 2017， 21（15）：165-167.

[6] 李学明， 王永禄， 程晓丹，等. 紫杉醇纳米混悬剂的制备及其在动物体内的药动学与组织分布研究[C]// 2010施慧达杯全国青年药学工作者最新科研成果交流会. 2010.

[7] 余修祥， 熊景辉， 方征远，等. 一种紫杉醇注射液及其制备方法：， CN 104257607 A[P]. 2015.

[8] 潘邻霖， 董敬， 王思玲，等. 紫杉醇注射液的制备及其物理稳定性的初步评价[J]. 沈阳药科大学学报， 2004， 21（2）：101-104.