返滴定法测定白矾散中白矾的含量

熊 玥，宋慧敏，毕昊容(江苏省兽药饲料质量检验所，南京 210036)

白矾散收载于《中国兽药典》2015年版二部，由白矾、黄芩等九味中药组成，主治肺热咳嗽，具有清热化痰，下气平喘的功效[1]。现行的质量标准主要集中在显微鉴别及薄层鉴别，未对方中君药白矾进行有效控制。白矾为临床常用矿物类中药，始载于《神农本草经》[2]，为硫酸盐类矿物明矾石经加工提炼而成的结晶，主要化学成分为含水硫酸铝钾〔KAl(SO4)2·12H2O〕，外用解毒杀虫，燥湿止痒；内用止血止泻，祛除风痰。白矾气微，味酸、微甘而极涩，性寒，有微毒，可少量食用。有文献报道白矾大剂量内服，刺激性强，会引起呕吐腹泻、虚脱甚至死亡[3]。故需建立白矾散中白矾含量测定的方法，以控制白矾散的质量。研究在相关检测方法[4]的基础上进行了改进，选用返滴定法测定白矾散中白矾的含量，并根据《兽药质量标准分析方法验证指导原则》对新建立方法的专属性、精密度、重复性、准确度等进行了考察。结果表明新建立的方法各项方法学指标均比较理想，可有效控制白矾散中白矾的含量，从而保证其疗效。

1 仪器与材料

1.1 仪器 XA105DU电子天平，德国梅特勒-托利多公司；L9/11/B170高温电炉，德国纳博热公司；XMTD-8222恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；DK-98-Ⅱ电子调温万用电炉，天津泰斯特仪器有限公司。

1.2 试药 含水硫酸铝钾(广州光华化学厂有限公司，分析纯，纯度≥99.5%， 批号20070830，作为对照品使用)、乙二胺四醋酸二钠(南京化学试剂股份有限公司)、硫酸锌(西陇化工股份有限公司)，二甲酚橙(天津市化学试剂研究所)、醋酸铵(南京化学试剂股份有限公司)、冰醋酸(南京化学试剂股份有限公司)、盐酸(南京化学试剂股份有限公司)等均为分析纯，水为纯化水。白矾散按《中国兽药典》2015年版二部规定处方制备，购买白矾等九味饮片，粉碎，过筛，混匀，即得。共制备三批，批号分别为161209、161210、161211。另制备不含白矾的阴性对照样品一批。

1.3 试剂配制 锌滴定液(0.05 mol/L)、乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05 mol/L)：配制及标定参照《中国兽药典》2015年版二部滴定液(附录8006)。醋酸-醋酸铵缓冲液(pH 6.0)：配制参照《中国兽药典》2015年版二部缓冲液(附录8004)。二甲酚橙指示剂：配制参照《中国兽药典》2015年版二部指示剂与指示液(附录8005)。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备及测定 取白矾散约1.5 g，精密称定，置坩埚中，缓缓炽热，至完全炭化时，移入高温电炉中600 ℃灰化2 h，取出，放冷，在坩锅中小心加入稀盐酸10 mL，用表面皿覆盖坩锅，置水浴上加热10 min，表面皿用热水5 mL冲洗，洗液并入坩埚中，滤过，用水50 mL分次洗涤坩埚及滤渣，合并滤液，加0.025%甲基红乙醇溶液1滴，滴加氨试液至溶液显微黄色，加醋酸-醋酸铵缓冲液(pH 6.0)20 mL，精密加乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05 mol/L) 25 mL，煮沸5 min，放冷，加二甲酚橙指示液1 mL，即得供试品溶液。用锌滴定液(0.05 mol/L) 滴定至供试品溶液自黄色转变为红色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1 mL的乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05 mol/L) 相当于23.72 mg的含水硫酸铝钾〔KAl(SO4)2·12H2O〕。

2.2 专属性考察 取不含白矾的阴性对照样品1.17 g，精密称定，按2.1项操作，结果供试品溶液消耗锌滴定液的体积为25.07 mL(n=3)，空白试验消耗锌滴定液体积为25.12 mL(n=3)，两者消耗锌滴定液体积无明显差异，说明经过高温灰化处理后，处方中其他药味对白矾的含量测定无明显干扰，方法的专属性良好。

2.3 精密度考察 取含水硫酸铝钾〔KAl(SO4)2·12H2O〕对照品0.3 g，精密称定，按2.1项制备成供试品溶液，按上述方法测得对照品中含水硫酸铝钾〔KAl(SO4)2·12H2O〕的含量，平行测定6份，以测定结果的相对标准偏差表示试验的精密度，计算RSD为0.2%，表明方法的精密度良好。

2.4 重复性考察 取白矾散(批号20161209)约1.5 g，平行6份，精密称定，按2.1项分别制成供试品溶液，进行测定，样品中白矾含量以含水硫酸铝钾〔KAl(SO4)2·12H2O〕计为0.3234 g/g，RSD为0.7%，表明该方法具有良好的重现性。

2.5 稳定性考察 取白矾散(批号20161209)约1.5 g，平行6份，精密称定，按2.1项方法制备供试品溶液，在室温条件下放置，每隔2 h，测定样品含量。考察供试品溶液在室温存放0、2、4、6、8、10 h含量的变化。测得在不同时间的含量平均值为0.3224 g/g，RSD为0.4%。结果表明，供试品溶液室温放置10 h，含量基本未变，说明供试品溶液在室温下比较稳定，满足含量测定对供试品溶液稳定性的要求。

2.6 加样回收考察 取已知含量的白矾散(批号：20161209)约0.75 g，精密称定，按高(120%)、中(100%)、低(80%)三个浓度水平分别添加含水硫酸铝钾〔KAl(SO4)2·12H2O〕对照品(每个浓度水平制备3份)，制得添加样品。按2.1项方法制备供试品溶液，进行含量测定。用实测量与样品中所含被测成分量之差，除以对照品添加量计算回收率，结果见表1，结果表明，高中低三个浓度水平加样回收率在96.36%～98.87%之间，平均加样回收率为97.62%，RSD为0.8%，表明方法回收率良好。

表1 加样回收率测定结果Tab 1 Results of recovery test

2.7 含量测定 取批号分别为161209、161210、161211的三批自制样品，按2.1项方法制备供试品溶液，分别测定，样品中含白矾以含水硫酸铝钾〔KAl(SO4)2·12H2O〕计，分别为0.3234、0.3188、0.3302 g/g，结果见表2。

表2 白矾散中白矾含量测定结果(n=3)Tab 2 The contents of alumen in baifan powder(n=3)

3 讨论与小结

3.1 检测方法的选择 目前测定白矾含量，主要通过测定其中AL3+的含量，常见的AL3+测定方法有化学分析法(配位滴定法、重量法等)和仪器分析法(原子吸收分光光度法[5]、ICP-MS[6]、可见分光光度法[7]等)。仪器分析方法测定AL3+，灵敏度高，选择性好，对测定微量铝更有优势，但需要借助分析仪器，不适合我国大部分兽药生产企业的日常检测。滴定法简单易行，但AL3+对二甲酚橙指示剂有封闭作用，故不宜采用直接滴定法，需要采用返滴定法。AL3+与EDTA-2Na配位缓慢，需要调节溶液pH值到5～6，加入过量EDTA-2Na并加热煮沸，配位反应才比较完全，再用锌滴定液滴定剩余的EDTA-2Na，从而计算出白矾的含量。该方准确度较高，测定范围宽，基本符合实验要求。

3.2 样品提取方法的优化 考察多种样品提取方法，结果发现直接用水/盐酸超声提取，过滤后滴定，操作简单，但提取液颜色过深，对滴定终点判定有明显干扰；用高氯酸-硝酸消解样品，不仅提取液颜色有干扰，而且高氯酸产生烟雾会对环境造成污染；本实验最终采用马弗炉高温灰化法，除去样品中大部分有机物，消除方中其他药物对滴定终点的影响。白矾散在450 ℃灰化4 h才能完全，在600 ℃时2 h即可完全灰化。高温下白矾会失去结晶水分解为难溶于水的枯矾及Al2O3[8]，加入稀盐酸水浴加热，可使不同形态的铝全部换成溶于水的AL3+，溶液澄清无色，提取完全，重复性好。

3.3 样品中其他金属元素对测定结果的影响 EDTA及其盐能与大多数金属离子形成1∶1的配合物。乔婷婷等[9]利用ICP-OES/MS技术对不同产地的12批白矾饮片的无机元素进行了分析，结果表明常量元素在白矾中K、Al的含量最高，均值分别为8.8%、7.4%，微量元素中除 Cr、Sr外，平均含量都低于1 mg/kg，重金属和有害元素含Hg、Cd、As、Pb、Cu的平均含量依次为0.004、0.002、0.096、0.229、0.182 mg/kg 。除了白矾以外，处方中其他饮片，如黄芩等也均含有微量的金属元素[10]。设计实验考察样品中其他金属元素对滴定终点的影响，处理样品时加入适量的掩蔽剂NH4F，NH4F与溶液中的 AL3+在pH值5～6时发生配位掩遮，使得AL3+不再与EDTA-2Na发生配位反应，用锌滴定液进行滴定，消耗锌滴定液的体积为25.04 mL(n=3)，与空白实验消耗锌滴定液体积25.12 mL(n=3)，无明显差异，说明其他金属离子的存在对本实验干扰较小，影响基本可以忽略。

[1] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典 2015年版(二部)[S].

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