百合地黄汤对抑郁模型大鼠行为及海马内单胺类 神经递质和单胺氧化酶含量的影响

薛剑,李冀

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

抑郁症(depression)已是全球高发疾病，WTO预测在2020年以后成为继高血压之后第二大临床慢性疾病[1]。百合地黄汤是治疗百合病的代表方剂，中医理论中百合病属于现代医学中，抑郁症的范畴。抑郁症临床症状中多有学习上的障碍，有时会有一定的情感障碍及记忆能力的下降。在诸多抑郁症病因假说中指出，单胺类神经递质的功能紊乱会直接导致抑郁症的发生发展，而研究指出使单胺类递质含量的升高可以有效缓解抑郁症，是减轻抑郁水平的重要途径[2]。当抑郁症发生时，脑组织中的海马区是与情绪、记忆功能密切相关的脑组织区域，研究指出海马区也是应激易损伤的重要靶点区域，因此本实验通过建立慢性轻度不可预见性刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)加孤养模型，并给予百合地黄汤进行抗抑郁干预治疗，观察造模前后，百合地黄汤灌胃前后大鼠的行为学变化，取海马区的单胺类神经递质及单胺氧化酶作为抗抑郁机制的研究[3-4]，探讨百合地黄汤对大鼠抑郁行为的影响及大鼠脑内海马区单胺类神经递质、单胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)含量的影响,为治疗抑郁症的提供依据。

1 材料与方法

1.1 药物主要实验药品试剂及仪器

百合地黄汤组成为百合、地黄，药物购自黑龙江中医药大学附属第一医院天江中药局，百忧解胶囊(盐酸氟西汀，批号:苏州制药公司)。

1.2 试剂盒

去甲肾上腺素(NE)、5羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.3 仪器

KDL-40低速离心机(科大创新股份有限公司)；anthos酶标仪(安徽实达电脑科技有限公司)。

1.4 实验动物及分组

雌性健康成年SD大鼠40只，黑龙江中医药大学动物中心提供，动物合格证：SCXK(黑)2007003。大鼠体质量为180～200 g。适应性饲养1周，自由进食饮水，室温为(22±3)℃。大鼠随机分为空白组、模型(CUMS)组、阳性药组、百合地黄汤组(简称百地组)，每组10只。

1.5 分组给药

给药从造模第22天开始所有大鼠连续给药14 d。阳性药组给予百优解(盐酸氟西丁胶囊)20 mg/日，空白组和模型组每天给予5 mL/kg生理盐水灌胃。百地组每天给予计算后5 mL/kg的百合地黄汤灌胃。

1.6 抑郁模型的建立

根据文献建立CUMS加孤养模型[5]，并根据具体环境情况加以改进。空白组大鼠正常条件饲养无任何干预；其余3组大鼠用CUMS应激刺激进行抑郁造模并单笼饲养，进行21 d随机方式刺激，刺激方式包括电击足底(强度10 mA，1次持续刺激10 s，共刺激20次)、冰水游泳(4℃，5 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)、黑白颠倒(24 h)、夹尾(1 min)、潮湿垫料(24 h)共7种，每日随机给予1种刺激方式，每种刺激方式全程共3次，同种刺激不能连续出现，使大鼠不能预测刺激的发生，造模共21 d，建立不可预知性抑郁模型。

1.7 大鼠强迫游泳实验(forced swimmingtest，FST)

将大鼠单独置于强迫游泳的刻度圆筒内，桶内装清水，水温24～26℃，桶内径为40 cm ，高度为70 cm，水面高度为35 cm，将大鼠放置其中，放置时动作柔和避免过度刺激。实验共测试5 min，前1 min为大鼠适应阶段，后4 min纳入不动状态的时间。全程用摄像机采集影响材料。大鼠漂浮或小肢体运动为大鼠的不动状态标准。为了避免重复用水对大鼠产生影响，则每只大鼠测试后需要更换一次水。每只大鼠实验结束后需用毛巾、吹风机干燥身体后放回单笼。统计的不动状态时间作为抑郁程度的指标。

1.8 取材

行为学实验完成后，断头处死大鼠取脑并迅速剥离出海马组织，将组织分为左右部分，左侧用于单胺类神经递质检测，右侧用于单胺氧化酶检测，将组织分好后放入适量生理盐水捣碎制成匀浆，低温3 000 r离心10 min取上清液，按照试剂盒说明书检测NE、5-HT、DA及MAO含量。

1.9 统计学方法

2 结果

2.1 百合地黄汤干预后各组大鼠行为学指标变化

与空白组比较，模型组大鼠强迫游泳不动时间明显延长(P<0.01)；阳性药组时间对比模型组有所缩短，百合地黄组大鼠强迫游泳不动时间明显缩短(P<0.01),见表1。

2.2 各组大鼠海马单胺类神经递质含量变化

经过28 d慢性不可预知性温和性应激刺激后，与空白组相比较，模型组大鼠海马区单胺类神经递质均有降低；与模型组相比，阳性药组百合地黄汤组大鼠海马区单胺类神经递质含量明显升高。见表2。

表1 各组大鼠强迫游泳指标变化与空白组比较

注：与空白组比较，*P<0.01；与模型组比较，△△P<0.01

表2 各组大鼠海马单胺类神经递质含量变化

注：与空白组比较，*P<0.05；与模型组比较，△△P<0.01

2.3 治疗后各组大鼠海马单胺氧化酶含量变化

经过28天慢性不可预知性温和性应激刺激后，与空白组相比较，模型组大鼠海马区MAO有所升高；与模型组相比，阳性药组和百合地黄汤组大鼠海马区MAO含量有所降低。见表3。

表3 各组大鼠海马MAO含量变化

注：与空白组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05

3 讨论

现代社会，由于环境等因素，抑郁症严重影响人们的身心健康。本实验运用CUMS结合孤养的方法建立抑郁大鼠模型，与人类抑郁症的发展机理较为接近，被国际学者广泛运用。行为学实验中，采用了大鼠强迫游泳实验，本实验是将大鼠置于圆形水桶环境中，观察动物在水中拼命挣扎后，漂浮于水面的“不动状态”的时间，这种不动状态即动物的行为学上的绝望状态。时间越长，说明大鼠绝望状态越严重，则可以说明抑郁越严重。通过21 d的造模和14 d的药物组干预，行为学测试中与空白组比较，模型组大鼠表现出的不动时间明显变长，表明模型组的抑郁模型复制成功。行为学实验中同时发现，阳性药组与百地组在大鼠强迫游泳的不动时间上对比模型组时间均有缩短，从行为学角度也说明百合地黄汤具有一定的抗抑郁作用。

单胺类神经递质主要包括去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)等，查阅文献中可以得知自1965年开始提出5-HT和NE含量改变能改善抑郁的假说开始，单胺类神经递质的研究便与抑郁症的研究密不可分。研究中得出5-HT和NE的减少与抑郁症的发生机制有关[6]。有效促使5-HT和NE的升高，则抑郁症缓解明显。多巴胺(DA)是下丘脑和脑垂体腺中的关键性神经递质，能直接影响人的情绪，研究中证明DA可以产生兴奋的情绪，增加行动力[7]。因增加单胺类神经递质在大脑内的含量水平，是有效减轻抑郁的重要途径之一。本实验中百合地黄汤组的对比模型组中单胺类神经递质的含量均有升高(P<0.05)。从单胺类递质方面的研究可以说明百合地黄汤可以有效改善抑郁症。

单胺氧化酶(MAO)是一种催化单胺氧化脱氨反应酶。研究中发现MAO具有一定的抗抑郁、抗焦虑的作用[8-10]。MAO增高，单胺类神经递质的分解力度则会加强，则单胺类神经递质含量则会降低，抑郁症便会发生发展。而本实验中可以得出百合地黄汤可以降低MAO的活性含量，从而减少了DA、5-HT、NE的分解，避免其含量降低。实验中百地组的MAO指标比模型组有显著的降低(P<0.05)。因此,从单胺氧化酶的实验分析中可以得出百合地黄汤有着一定得抗抑郁作用。

综上所述，百合地黄汤对CUMS结合孤养的抑郁模型大鼠具有抗抑郁作用，其机制与抑制MAO，从而升高大鼠的单胺类神经递质含量有关。

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