水貂变形杆菌病的检测与防治

张笑春，王瑛华，陈 刚

（肇庆学院生命科学学院，广东肇庆 526061）

变形杆菌（Proteeae）是一类大小、形态不一的细菌，有时呈球形，有时呈丝状，具有明显的多形性；周身鞭毛，能运动且运动活泼；无芽孢荚膜，需氧及兼性厌氧，为革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科。变形杆菌病是各种动物均易感的一种传染病。水貂变形杆菌病主要由变形杆菌属细菌引起。近年来，不断有各种禽类、鹿、熊猫等动物感染变形杆菌的报道[1-4]，同时也有变形杆菌感染水貂引起发病的相关报道[5-6]。

2015年3月某水貂养殖场的水貂每天死亡4～8只。病貂死亡前出现气喘，口吐血水、血沫，下痢等症状。用青霉素和土霉素对发病水貂进行治疗，未见好转。剖检病死貂，可见肺脏多为紫红色，有大量出血点，肺脏、气管切开后有泡沫状血水；胸腔大量积液，心脏、心包膜有出血点；肠道呈弥散性出血。经流行病学调查、临床诊断、病理剖检、实验室检验，鉴定为变形杆菌病。现将对该病例的诊断和治疗报告如下。

1 材料与方法

1.1 被检病料

病料来自畜主送检的水貂（貂场规模500只）。无菌条件下，取心、肝、脾、肺、肾等病变明显的内脏组织样品，4 ℃冷藏备用。

1.2 培养基和试剂

鲜血琼脂培养基、普通琼脂培养基、麦康凯培养基、十六烷琼脂培养基：按常规方法配置并灭菌，在无菌条件下制成平板培养基；大豆肉汤培养基：按常规方法配制[7]；革兰氏染色液和细菌生化微量鉴定管：购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.3 试验动物

12只健康昆明小白鼠（4周龄、平均体重20 g）。

1.4 犬瘟热和犬细小病毒检测

使用犬瘟热病毒快速检测试纸、犬细小病毒快速检测试纸条（韩国安捷公司）进行检测。严格按照生产商说明书，垂直滴加4滴无气泡样本混合液于试纸卡加样孔（S）内，开始计时。阳性结果为：除质控区（C）外，另有1条粉红色带出现在检测区（T）。阳性结果表示加入样本中含有犬瘟热或犬细小病毒抗原。

1.5 细菌分离与镜检

在无菌条件下，对水貂病变部位进行涂片、镜检；发现有细菌存在后，用灭菌接种环挑取病死水貂的病变部位，接种于十六烷琼脂平板、普通营养琼脂平板、麦康凯平板、全血琼脂平板，37 ℃培养1 d；挑取单个菌落涂片，革兰氏染色后镜检。

1.6 细菌鉴定

各种糖（醇）发酵试验：在无菌条件下，用接种针将分离的细菌接种到发酵微量管中，恒温置于生化培养箱培养1 d后，观察结果并记录。

其他试验：按常规方法分别进行脲酶试验、触酶试验、硫化氢试验、MR试验和VP试验。

1.7 药敏试验

按姚火春[8]的圆纸片扩散法，即用灭菌棉球擦拭涂布器后，蘸取纯培养物制成的细菌悬液，均匀涂布于普通营养琼脂表面，盖好平皿；在室温干燥5 min，待平板表面稍干即可放置药敏片；用灭菌镊子无菌操作取出药敏片，贴在涂有细菌的平板培养基表面[9]，于恒温培养箱中37 ℃培养16～18 h，观察结果。

1.8 动物试验

将体重为20 g左右的12只健康小鼠随机分为2组，分别是攻毒组、空白对照组，每组6只。攻毒组小鼠腹腔注射0.2 mL109cfu 的变形杆菌肉汤稀释液；空白对照组小鼠腹腔注射0.2 mL无菌肉汤液。连续观察2 d，记录小鼠的存活情况；剖检死亡小鼠观察病变，并取心脏、肝脏进行细菌分离鉴定。

2 试验结果

2.1 病毒检测

犬瘟热与犬细小病毒检测均为阴性；除质控区（C）外，未见有粉红色带出现在检测区（T），说明病貂体内不含有犬瘟热与犬细小病毒。

2.2 细菌形态

经染色镜检可见革兰氏阴性、单个或成对的球杆状、长丝状或短链状多形性杆菌；以杆状为主，多为单个存在，无芽胞和荚膜。

2.3 分离培养

该菌在十六烷琼脂培养基中生长良好，呈薄膜状扩散、厚薄交替呈层层波状的同心环样菌苔。在普通琼脂平板上形成半透明、光滑菌落，边缘有迁徙生长现象。在鲜血琼脂培养基上有薄膜样菌落生成，无溶血现象。在麦康凯琼脂培养基上有半透明、光滑、粉色菌落。

2.4 生化试验

该菌经培养后可以分解葡萄糖、乳糖、木糖；甘露醇、硫化氢、脲酶、触酶、MR、苯丙氨酸、半乳糖、甘露醇试验阳性（在种间有不同的反应）。这些与变形杆菌的生化特性基本相符（表1）。

表1 生化试验结果

2.5 药敏试验

通过药敏试验发现，该菌对丙氟哌酸及奥复星敏感，对阿米卡星中等敏感，对其他药物不敏感（表2）。抗菌药物的抑菌环与敏感标准见表3。

表2 分离菌药敏试验结果

表3 抗菌药物的抑菌环与敏感标准

2.6 动物试验

攻毒组，注射3 h后小鼠出现呼吸急促、腹泻、阵痛、精神沉郁等症状，1 d内小鼠无死亡；扑杀剖检其中3只，可见小鼠脾脏肿大，肝脏发黄，肠道水肿、臌气；从肝脏、心脏中均分离出变形杆菌；1～2 d内有3只小鼠死亡。空白对照组，6只小鼠在2 d内无异常反应；扑杀后分离不到任何细菌。经生化试验、细菌学试验鉴定，证实小鼠体内分离的细菌和从水貂体内分离的细菌是同一种菌。

3 讨论

3.1 水貂变形杆菌病的病理变化特点

变形杆菌是一种食源性条件致病菌，是肠道内正常菌群，广泛存在于水、泥土和被粪便污染的物质之中，一般情况下不致病，但在特殊条件下可引起动物发病，是引起医源性感染的重要条件致病菌，在临床上常为混合感染或继发感染。近年来，该菌在发病水貂体内经常分离到，给广大养殖户造成很大经济损失，因此应引起水貂养殖业的高度重视。水貂感染变形杆菌的典型病理变化是肺脏淤血，呈鲜红色，个别边缘坏死，胸腔大量积液，心脏、心包膜有出血点；肠道呈弥散性出血；肠系膜淋巴结肿大，脾脏呈深红色，上有淤血斑，肾脏呈深红色，上有出血斑，甚至化脓灶。本病例中患病水貂症状与该病的典型症状基本一致。

3.2 初步诊断注意事项

接诊病例时，应以浅显明确的问讯方式向畜主了解情况。首先要了解貂场情况、发病史、免疫情况，然后对饲养水平做出基本判断。正常情况下变形杆菌属致病机理主要有以下两个方面：（1）由于机体防卫功能减弱，引起自身感染；（2）由于正常菌群寄居部位改变，发生了定位转移，引起疾病[10]。所以，消除诱发因素是防治变形杆菌病的重要手段。

3.3 药物治疗与药敏试验

针对水貂变形杆菌病，使用土霉素对发病水貂养殖场进行大群投喂，在辽宁省的效果不明显，后改用喹乙醇，每只每次30 mg入饲料中投喂，2次/d，3～4 d后病情得到控制[11]。在药敏试验中，四环素对细菌生长抑制和杀灭作用不明显，因此临床使用土霉素对发病水貂的治疗效果不佳。在使用药物治疗细菌病时，最好先进行药敏试验，再选择对该菌敏感的药物进行治疗。这样既可以节省成本，缩短治疗时间，亦可达到良好的治疗效果。根据本试验中的药敏试验结果及各地区用药治疗情况，对该病例采用口服丙氟哌酸和补液盐，在饮水中加入适量水溶性维生素，投服葡萄糖粉和维生素E粉等措施，病情得到基本控制。在用药期间要注意饲喂优质且易于消化的饲料，补充营养，若水貂下痢严重，要注意补充电解质。

同时应做好消毒隔离工作，避免病菌扩散。将病死貂和扑杀的病重貂深埋，清除养殖舍内粪便并集中烧毁；对貂舍、饲具，用百毒杀消毒药水喷洒消毒或用3%～5%来苏儿、10%石灰乳、15%漂白粉进行消毒；舍外则选用20 g/ L 的烧碱喷洒消毒，以达到彻底消灭病原菌的目的；严禁非饲养人员不经防护随便进出貂舍，以防止疾病传入。

3.4 预防措施

据了解，水貂发病前，水貂养殖场所在地区出现了暴雨天气，加上饲养场内排水不畅，出现大量积水，饲料也进行了更换，所以环境因素及饲料的变更是这次疾病暴发的重要原因。变形杆菌广泛存在于水、土壤中的腐败有机物，以及人和动物的肠道中，为条件致病菌，多为继发感染。因此，做好饲料卫生，加强日常饲养管理，对于预防本病的发生具有重要作用。在饲养中，饲养员应注意观察水貂的饮食和健康状况，保证饲料营养全面，以免因营养不均衡造成机体抵抗力下降而引发疾病。

4 结论

本试验通过细菌分离培养、细菌生化试验、药敏试验及动物试验，同时进行病毒检测，最终诊断致病菌为变形杆菌。该病多以呕吐、腹泻为主要临床症状，病理变化多呈现全身性出血性败血症表现。随后通过药敏试验发现变形杆菌对丙氟哌酸和奥复星敏感，对阿米卡星中等敏感。本次治疗采用对该菌最为敏感的丙氟哌酸进行治疗，配合补液，最终达到了良好的治疗效果。

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