TCT联合HPV-DNA检测在宫颈病变筛查中的应用

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球妇女恶性肿瘤发病率中居第二位，仅次于乳腺癌。据世界卫生组织报道，全世界每年约新发50万宫颈癌病例，其中80%发生在发展中国家[1]。中国每年新发病例约13.15万，占世界宫颈癌新发病例的28.8%，而且近年来宫颈癌的发病趋于年轻化[2]。宫颈癌的发生、发展需要经历一个较长的癌前病变期，其发生、发展是由量变到质变，由渐变到突变的过程[3]。一般来说，从宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）发展为宫颈侵袭癌需10～15年[3]。鉴于宫颈癌的发病特征及现状，必须做到早发现、早治疗，因此及时而规范的筛查成为早期发现宫颈病变，降低宫颈癌发生的重要环节[4]。本研究采用TCT联合二代杂交捕获技术（HC-2）检测高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染以及病理学检查的方法，探讨TCT和HC-2检测技术在宫颈病变筛查中的价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象

以2016年1—12月在我院门诊因慢性宫颈炎、接触性出血、血性白带等原因就诊的患者481名为研究对象，年龄22～50岁，平均年龄为（35.00±2.33）岁，有性生活2年以上，受检者无盆腔手术史，3天内未行性生活，24小时未行阴道冲洗，目前未妊娠。对以上患者行TCT及HPV-DNA检查，对TCT检测出现不典型鳞状上皮细胞（atypical squamous cells of undetermined significance，ASCUS）及以上病变或HC-2检测出现HPV阳性的患者进行阴道镜下取活组织行病理学检查，根据病理学检查的结果分为正常组，宫颈癌前病变（CIN组）及宫颈癌组。

1.2 检测方法

1.2.1 细胞学检查 采用宫颈细胞学TBS分级系统进行细胞学的诊断[5]：保存完好的上皮细胞覆盖率＞10%为满意涂片；诊断包括：正常或良性反应改变（WNL）；未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）；低度鳞状上皮内病变（LSIL）；高度鳞状上皮内病变（HSIL）；鳞状细胞癌（SCC）；腺癌（AC）。TBS报告正常或炎症为细胞学阴性，ASCUS及以上病变为细胞学阳性。

1.2.2 HPV-DNA检测 采用HC-2检测方法，首先将宫颈口的分泌物擦拭干净，然后采用配套的宫颈采样器在宫颈口沿同一方向旋转3～5圈，立即放入保存液中保存。之后的操作步骤严格按照美国Digene公司的HC-2检测技术进行，主要步骤有细胞裂解、杂交、捕获、信号放大及检测。HC-2可一次性检测13种型别的高危型HPV（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68）。

1.2.3 阴道镜及病理学检查 在阴道镜下使用碘染色的方法取宫颈病变部位的组织，若宫颈光滑，取3、6、9、12点检查，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋后切片，切片的厚度为3 μm。病理诊断由至少两位病理科的医生镜下观察确定，结果为正常、宫颈癌前病变（CIN）、宫颈癌。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行数据处理和统计分析，计数资料以“%”表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

481名患者行TCT检查，结果异常者有81例（16.84%），行HPA-DNA检查阳性例数为139例（28.9%），病理学检查结果异常者有63例（13.09%）。见表1。

表1 TCT、HPA-DNA及病理学结果

63例病理学异常者中，行TCT检查阳性例数为42例，检出率为66.67%；HPV-DNA检查阳性例数为49例，检出率为75.34%；TCT联合HPV-DNA检测阳性例数为57例，检出率为90.47%。TCT和HPV-DNA分别与TCT+HPV-DNA的检测率相比，检出率的差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 TCT、HPA-DNA单独及联合检出率的结果（n，%）

以组织学结果作为金标准，单独应用TCT检测敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为66.67%、90.67%、51.85%及93.5%；单独应用HPV-DNA检测，四项值分别为77.78%、78.49%、35.25%及96.13%；TCT联合HPV-DNA检测，四项值分别为90.47%、82.74%、90.47%及95.78%。见表3。

表3 TCT、HPA-DNA单独及联合检测结果（%）

3 讨论

目前国内外均认为持续的高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染是宫颈癌及宫颈上皮内瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）的必要条件[6]。HPV感染后一般在12～18个月会自行消除，但这个时候病毒可能只是处在一个静息期，另外之前感染过HPV者有再次感染的可能性，所以HPVDNA检测作为宫颈病变筛查的一种重要手段受到肿瘤工作者的重视而应用于临床。该技术采用杂交捕获信号放大的原理，可一次检测13种高危型HPV，其是导致宫颈病变的主要类型[7]。具有操作简便、稳定可靠、灵敏度高、干扰因素少等优点，适用于大范围人群的筛查[8]。

TCT是目前被认为是一种较好且实用的宫颈病变的筛查的方法。取材部位在宫颈癌高发的移行带区，收集该部位的宫颈脱落细胞，保存在特定的固定液中，并采用全自动制片机进行制片，弥补了常规方法取材时可能出现细胞丢失和涂片质量差的问题，该方法是国内外公认的漏诊率低，细胞涂片质量好，病变成分保存完全的方法，从而提高了对宫颈癌前病变及宫颈癌的诊断。

本研究的结果表明，TCT和HPV-DNA二种检测方法在临床上均是常用的宫颈病变早期筛查方法，但是TCT只能发现细胞学的变化，不能预测可能出现宫颈病变的病例，HPV-DNA虽然可以明确与宫颈病变密切相关的高危型HPV感染的类型，但是不能判断宫颈病变的程度。联合采用TCT和HPV-DNA检测的检出率高于单独应用其中一种方法，比较其差异均有统计学意义（P＜0.05）。而且联合采用TCT和HPV-DNA检测其敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值均较高，由此我们推测，TCT和HPV-DNA联合检测适用于临床上宫颈病变的筛查，二者同时使用可提高宫颈病变的诊断率，减少漏诊，并指导临床治疗，此外对宫颈病变的预后判断也有非常重要的意义。但是HPV-DNA检测费用相对较高，对于经济状况较好的女性，可以选择联合TCT和HPV-DNA进行宫颈病变的筛查。

[1]Parkin DM，Bray F，Ferlay J，et al．Estimating the world cancer burden ：Globocan 2000[J]．Int J Cancer，2001，94（2）：153-156．

[2]Kim K，Ryu SY．Major clinical research advances in gynecologic cancer 2009[J]．J Gynecol Oncol，2009，20（4）：203-209．

[3]丰有吉，沈铿．妇产科学[M]．北京：人民卫生出版社，2006：317．

[4]杨亚军，杨明珠，秦文芝．不同级别宫颈病变中HPV感染状态的临床分析 [J]．中国实验诊断学，2015，19（1）：71-74．

[5]Solomon D，Nayar R．The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology[M]．2nd ed．New York ：Springer，2004 ：77-90．

[6]梁慧，付敏，任玲，等．高危型HPVDNA联合TCT在子宫颈癌前病变筛查中的诊断价值[J]．中国妇幼保健，2011，26（36）：5829-5830．

[7]de Sanjose S，Wheeler CM，Quint W，et al．Age-specific occurrence of HPV16 and HPV18 related cervical cancer[J]．Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2013，22（7）：1313-1318．

[8]Schlecht NF，Trerium A， Duroc-France E，et al．Viral load as a predictor of risk of cervical intraepithelial neoplasia[J]．Int J Cancer，2003，103（4）：519-524．