复方黄芪养心合剂对缺血性心律失常大鼠室性心律失常的作用*

祝丹陈启兰#祝光礼赫小龙夏益

1 浙江省杭州市中医院 浙江 杭州 310007

2 浙江省杭州市富阳区中医院 浙江 杭州 311400

缺血性心脏病是指心脏血流灌注减少，不能满足心脏正常活动所需，进而导致心肌及其细胞能量代谢发生变化得一种病理状态[1]。缺血性心律失常是其主要临床表现之一。复方黄芪养心合剂（CAMYM）为我院院内制剂（浙药制字Z20100032），临床运用中观察到其具有一定的抗缺血性心律失常作用。现将其抗缺血性心律失常的发生作用机制作一定探讨。

1 材料与方法

1.1 动物：雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重180-200g，清洁级，无人畜共患疾病，由浙江中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（沪）2013-0016。

1.2 药品：中药：CAMNH（黄芪20g（批号101010），党参20g（批号101005），太子参20g（批号101013），苦参20g（批号101022），甘松20g（批号101019），炙甘草10g（批号101018），生山楂15g（批号101007）。单味中药均由浙江省临安市中药药材有限公司提供。西药：琥珀酸美托洛尔（47.5mg阿斯利康制药有限公司批号1312028），戊巴比妥钠（25g/瓶，批号WS20080118）。生理盐水（500ml/瓶杭州市中医院）。

1.3 主要试剂和仪器：DH-150动物呼吸机，Medlab-U/4CS生物信号采集处理系统，低温冰箱，酒精，苏木素，中性树胶，DAB试剂盒，戊巴比妥钠，苦味酸，二甲苯，手术材料：眼科剪、手术剪刀（大、小）、血管钳、持针器、针管、组织镊、冻存管、刀片、生化管等。

1.4 实验方法：分述如下。

1.4.1 实验分组和给药：将60只SD雄性大鼠随机分为MSSRT组、CAMNH小剂量组、CAMNH中剂量组、CAMNH大剂量组、模型组、假手术组，每组10只。给药剂量：MSSRT 7g/7ml/kg/d，CAMNH小剂量7g/7ml/kg/d，CAMNH中剂量14g/7ml/kg/d，CAMNH大剂量组28g/7ml/kg/d,模型组14g/7ml/kg/d(生理盐水)，假手术组14g/7ml/kg/d(生理盐水)。灌胃干预时间为两周。

1.4.2 SD大鼠缺血性心律失常模型的制作：冠状动脉左前降支高位结扎法[2]，具体操作方法参考《药理实验方法学》并稍作改进：大鼠称重，麻醉，固定，消毒，分离颈部筋膜及肌肉，暴露气管，将动物呼吸机插管插入气管内，固定，动物呼吸机选择潮气量3ml/100g，呼吸频率60次/分，呼吸比2：1，此时可见大鼠胸部随呼吸机起伏，证明气管插管成功。接入大鼠Ⅱ导联心电图，通过Medlab-E观察大鼠心电图，连续记录。消毒胸部皮肤，逐层顿性分离浅深筋膜及肌肉，暴露第3-5肋骨并剪断，用镊子轻轻撕破心包，充分暴露心脏血管。用5-0的线在左心耳下的左冠状动脉前降支根部下2-3cm处结扎。结扎成功的标志为心电图导联上ST段抬高大于0.2mv以上。结扎时间为30min。结扎时间到后，取下心脏标本。MSSRT、CAMNH小剂量组、CAMNH中剂量组、CAMNH大剂量组、模型组造模方法同上，假手术组基本方法同上，但只穿线，不结扎。

2 检测指标及方法

2.1 大鼠心肌酶谱测定：造模后取血，由杭州市中医院生化检验科协助完成。

2.2 大鼠心肌组织病理切片常规HE染色：心肌组织石蜡包埋及组织切片（由杭州市中医院病理科协助完成）。70°烤箱考片1h；二甲苯及各级酒精脱蜡（二甲苯（I）6min，二甲苯（II）6min，100%酒精3min，95%酒精3min，80%酒精2min，75%酒精2min，蒸馏水2min）；苏木素染色10-15min，自来水冲洗；盐水乙醇分化30-50s；自来水浸泡5-10min；伊红液复染2min；常规脱水，透明(100%酒精（I）2min，95%酒精2min，100%酒精（II）2min，二甲苯石碳酸（3：1）1min，二甲苯（I）1min，二甲苯（II）1min)；中性树脂封片；Olypmus显微镜读片。

2.3 根据记录到的心电图进行室性心律失常（VA）评分：根据Ravingerova T等[3]的方法进行室性心律失常评分。无室性心律失常或有＜5次的室性早搏，计0分；仅有≥5次的室性早搏计1分；仅有一阵＜60s的室性心动过速，计2分；有一阵≥60s或室性心动过速阵累计＜60s的室性心动过速计3分；多阵室性心动过速累计＞60s计4分；出现室性颤动计5分；出现持续5min以上的室性颤动或在观察期间死亡计6分。

3 结果

3.1 实验动物存活情况：SD雄性大鼠共60只，灌胃死亡2只，CAMNH小剂量组死亡1只，CAMNH中剂量组死亡2只。麻醉死亡2只，分别为MSSRT组和模型性组各一只。左前冠状动脉结扎死亡5只，分别MSSRT组1只、CAMNH小剂量组2只、CAMNH中剂量组1只、CAMNH大剂量组1只。共死亡大鼠10只，存活50只，总体死亡率20%。

3.2 SD大鼠心肌酶谱CK、CK-MB的分析：造模后采取腹主动脉取血，利用血清检查心肌酶CK、CK-MB（采用免疫抑制法检测，具体操作由杭州市中医院检验科生化室完成），根据检测数据利用SPSS进行分析。与假手术组比较，模型组、MSSRT组、CAMNH小剂量组、CAMNH中剂量组、CAMNH大剂量组心肌酶谱中肌酸激酶（CK）、同工酶（CK-MB）均有升高，但与模型组相比药物组心肌酶CK、CK-MB升高的程度相对少。见表1。

表1 SD大鼠心肌酶谱CK、CK-MB

3.3 缺血30min后心肌组织HE染色结果观察：通过光学显微镜下观察心肌组织缺血30min后经HE染色心脏病理切片发现CAMNH组（大剂量组和中剂量组）和MMSRT组均无胞浆嗜酸性变、颗粒变性和凝固性坏死，而模型组在心肌缺血早期即出现典型的胞浆嗜酸性变、颗粒变性和凝固性坏死；CAMNH组（小剂量组）在缺血30min后亦出现了胞浆嗜酸性变和颗粒变性，但未出现凝固性坏死。见表2及图1。

表2 心肌组织HE染色后

图1 HE染色

3.4 VA评分：CAMNH组（大剂量组、中剂量组）和MMSRT组VA评分均低于模型组和假手术组（P＜0.05）；CAMNH组（小剂量组）VA评分低于模型组（P＜0.05）；但与假手术组比较无显著性差异（P＞0.05）；CAMNH各组间比较无显著性差异（P＞0.05）。见表3。

表3 VA评分

4 讨论

中医学并无心律失常的说法，因心律失常多表现为“心动悸、脉结代”，故心律失常在中医学中归于“心悸”范畴。心悸包括心悸与怔忡，多云“悸久怔忡”。其病位在心，与其它脏腑之病均有一定相关性。多属本虚标实，虚实夹杂之证。虚者当分清气、血、阴、阳亏虚，实者当辨别气、火、痰、瘀血等不同病理因素。虚者多由气、血、阴、阳亏虚，日久造成心失所养而致病。实者可为气血运行不畅、痰火扰心、痰蒙神窍、水凌心肺等引起。而且，实证日久，必然引起正气的亏耗，形成虚实夹杂。故心律失常的治疗因从整体观念出发，辨证论治。其治则应当是阴阳并补、气血兼顾、补泄并施。治法可以是宁心安神、养心安神、理气通络、活血化瘀、滋阴补血、化痰理气、清热解毒等等。

CAMNH作为本院院内制剂，临床应用多年，由黄芪、党参、太子参、苦参、甘松、炙甘草、生山楂组成。方中黄芪、党参、太子参共同起到补益心气；苦参清心经之火；山楂活血祛瘀、养心安神；甘松理气；炙甘草益气和中，调和诸药。全方配伍，共奏益气活血、祛瘀清心之功效。临床运用过程中我们发现它对于心律失常患者，可有效缓解患者胸闷胸痛、气短乏力、心悸、头晕等症状。而在前期实验研究中，CAMNH能使缺血再灌注室性早搏与室性心动过速出现时间提前，室性心动过速阵数减少，室性心律失常总评分降低，其有效改善大鼠缺血再灌注心律失常作用与β受体阻滞剂相近[4]。

本研究结果显示，CAMNH能减少心肌缺血时心肌酶谱CK、CK-MB升高程度，对心肌组织在心肌缺血时能减轻损伤程度，能降低心肌缺血时VA评分，提示CAMNH具有抗缺血性心律失常的作用。

综上，CAMNH具有抗缺血性室性心律失常作用，尤以CAMNH大剂量组和CAMNH中剂量组效果明显，且CAMNH大剂量组与MSSRT抗缺血性室性心律失常作用接近。

[1]杨宝峰．药理学[M].6版.北京：人民卫生出版社，2005：208-220.

[2]刘涛，王伟，赵明镜，等.左冠状动脉前降支结扎法制作大鼠心肌梗死模型.实验动物与比较医学，2009，29（2）：120-123.

[3]Ravingerova T,Tribulova N,SlezakJ,etal.Brief,intermediate and prolonged is chemiain the isolated crystaloid perfusedrat heart∶relationship between susceptibity to arrhythmias and degree of ultras tructural injury[J].JMol Cell Cardiol,1995,27(9)：1937-1951.

[4]陈启兰,龚一萍,祝光礼,等.复方黄芪养心合剂对缺血再灌注大鼠室性心律失常的作用[J].浙江中医杂志,2013,48（4）：267-269.