咽炎消合剂对慢性咽炎肝郁脾虚大鼠5-HT调控机制研究

王 艺，周家璇，施志强，黄春江

(云南中医学院第一附属医院，云南 昆明 650021)

慢性咽炎为咽部黏膜、黏膜下及淋巴组织的慢性弥漫性炎症，是上呼吸道慢性炎症的一部分，多见于成年人，以咽部不适、干燥感或微痛、灼热感、梗阻感、痒感、蚁行感、刺激性咳嗽等为主要临床特征，且患者经临床治疗后，局部炎症已完全得到控制，局部黏膜组织已恢复到接近于正常，但是患者仍旧觉得咽部不适，伴随有焦虑、急躁和紧张等精神症状[1-3]。对于局部炎症消退后为何还会存在异物感,长期反复发作后为何会出现焦虑、抑郁等心理及精神症状，两者发病是否具有相关性等一系列问题尚待研究[4]。本研究通过不同方法构建慢性咽炎大鼠模型，观察了中药咽炎消合剂对慢性咽炎大鼠血清5-羟色胺(5-HT)水平的影响，探讨了慢性咽炎的发生发展与影响情绪的关键神经递质5-HT异常表达的相关性，现将结果报道如下。

1 实验资料

1.1实验动物 4月龄雄性Wistar大鼠49只，北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：SCXK(川)2015-030，体质量(200±20)g，送达动物房后适应性喂养1周后开始造模。

1.2主要药品、试剂和仪器 咽炎消合剂 (院内中药复方制剂，由浙贝母、僵蚕、法半夏、柴胡、厚朴、桔梗、白术、茯苓等组成，采用咽炎消合剂临床成人用量与动物体型系数计算法换算成大鼠灌胃的等效剂量)；5-HT 96T ELISA试剂盒(Abcam公司)；10%氨水(SIGMA公司，批号：201610101)，250 mL瓶装；肝素钠(SIGMA公司)；6×Loading buffer(Takara公司)；喉头喷雾器(金喉健喷雾剂10 mL药瓶)；透射电镜及多用光学显微镜(JEOL公司，JEM-1200EX)，酶标仪(Bio-Rad公司)，自制开口器。

1.3实验方法 将49只Wistar大鼠随机分为空白对照组、标准模型组、标准模型药物低剂量组、标准模型药物高剂量组、肝郁脾虚模型组、肝郁脾虚药物低剂量组、肝郁脾虚药物高剂量组，每组7只。除空白对照组外，标准模型各组参考文献[2]方法建立慢性咽炎标准模型：用10%氨水喷大鼠咽部，每次用喷雾器喷2揿，间隔8 h 1次, 连续21 d，造模第22天开始停止上述造模因素,自然饲养条件下观察。肝郁脾虚各组参考文献[5-6]方法建立慢性咽炎肝郁脾虚模型：在标准模型造模方法基础上，每日8：00—11：00将大鼠束缚于束缚筒内(用于限制大鼠的活动),同时隔日喂食(隔日禁食,隔日足量给食),连续21d，造模第22天开始停止上述造模因素,自然饲养条件下观察。确定造模成功后，2种模型的药物低剂量组给予咽炎消合剂1 mL/d(含生药量2.0 g/mL)灌胃，2种模型的药物高剂量组给予咽炎消合剂2 mL/d(含生药量2.0 g/mL)灌胃，2种模型组和空白对照组给予生理盐水2 mL灌胃，均连续10 d。

1.4观察指标 实验过程中观察各组大鼠的体温、食量、体质量、大便等情况。灌胃结束后采用眼眶取血法取不低于1 mL的血液，低速离心后制备血清，并于当日参照Abcam厂家说明书(ab133053-Serotonin ELISA Kit v6 (website).pdf)检测5-HT水平。然后处死各组大鼠，取咽部组织，制作病理切片，HE染色镜下重点观察结缔组织、复层扁平上皮层、腺体、肌细胞情况。

2 结 果

2.1各组大鼠一般情况 标准模型组和肝郁脾虚模型组大鼠体质量略低于正常对照组大鼠，且模型大鼠都存在喉中鸣响症状，有搔抓口唇两侧动作。标准模型组大鼠饮水量增加；肝郁脾虚模型组大鼠饮水量趋于正常，但存在皮毛疏松、粗糙、无光泽，纳食少、活动少、体质量减轻、时有便溏、肛门污秽表现，以造模20 d后尤为明显，符合中医肝郁脾虚证型的特征，并且与临床上慢性咽炎伴随精神症状具有一定的相似性。各给药组大鼠灌胃结束后局部症状已不明显，纳食、活动基本正常，便溏、肛门污秽表现也基本消失。

2.2各组大鼠血清5-HT水平 空白对照组、标准模型组、标准模型药物低剂量组、标准模型药物高剂量组、肝郁脾虚模型组、肝郁脾虚药物低剂量组、肝郁脾虚药物高剂量组血清5-HT水平分别为(1 485.34±56.54)ng/mL、(1 273.69±26.95)ng/mL、(1 410.55±42.26)ng/mL、(1 431.93±85.86)ng/mL、(1 267.83±29.60)ng/mL、(1 607.48±86.24)ng/mL、(1 458.69±46.64)ng/mL。标准模型组和肝郁脾虚模型组血清5-HT水平均明显低于空白对照组(P均<0.05)，标准模型组和肝郁脾虚模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)；标准模型给药组和肝郁脾虚给药组血清5-HT水平均明显高于相应模型组(P均<0.05)，且肝郁脾虚给药组血清5-HT水平明显高于标准模型给药组(P均<0.05)。

2.3各组大鼠咽部组织病理表现 空白对照组大鼠咽部黏膜层、肌层、骨骼肌层组织正常，见图1；标准模型组和肝郁脾虚模型组大鼠咽部组织有轻微的上皮组织增生，乳突状或者钉状增生明显，小血管有扩增现象，有炎细胞浸润，部分区域有组织充血情况，黏液腺肿大，分泌物增加，少数有纤维组织增生和固有层肿胀，也有大鼠表现为上皮层变薄，见图2和图3。各给药组大鼠咽部上皮增生和炎细胞浸润情况明显改善，钉状增生减少，血管扩张现象基本消失，组织无充血，黏液腺无肿大，表现接近于空白对照组。

图1 空白对照组咽部组织病理表现

图2 标准模型组咽部组织病理表现

图3 肝郁脾虚型模型组咽部组织病理表现

3 讨 论

中医认为慢性咽炎属于“慢喉痹”“虚火喉痹”范畴，病因病机以肝郁气滞、脾胃虚弱、虚火灼咽、痰湿瘀阻为多见，其中肝郁可化火，火热日久可致伤阴耗液，虚火灼咽；而持久的情志活动会造成内脏气机紊乱，气滞则肝郁，气虚则脾失所养，气机阻滞血行不畅，瘀滞于喉[7]；另外七情所伤可致气逆液浊而变为痰饮，痰气结于咽喉为梅核气，梗梗不利。用现代应激理论来解释就是，咽部不适症状为一种应激源，应激源的长期刺激可引起机体应激反应，即中医的“证”(证候)。不同证候就是不同个体表现出的不同反应状态，这种状态就是现代医学有关生理及病理(包括功能性和器质性)的综合反应，因此应激反应与中医证候在本质上具有高度的相关性。在一定条件下，应激反应同时也可作为一种应激源对机体造成影响。慢性应激反应可使大鼠外周及中枢神经递质合成代谢紊乱，如5-HT含量明显改变等[8-9]。基于以上理论，本研究利用慢性应激原理诱导建立大鼠标准慢性咽炎模型及肝郁脾虚型慢性咽炎模型，观察了咽炎消合剂对5-HT代谢的影响。

本研究结果显示，肝郁脾虚慢性咽炎模型大鼠除了具有标准慢性咽炎模型大鼠的特征外，还出现了摄食率降低、体质量减轻、时有便溏、肛门污秽以及骚动不安或活动次数下降等行为改变，符合中医肝郁脾虚证型的特征，并且与文献[10]报道相符；给予咽炎消合剂灌胃10 d后，慢性咽炎大鼠局部症状基本消失，无明显焦虑、抑郁等精神症状，且咽部组织病理表现基本恢复正常。检测血清5-HT水平发现，标准模型组和肝郁脾虚模型组血清5-HT水平均明显低于空白对照组，各给药组血清5-HT水平均明显高于模型组，推测慢性咽炎与5-HT的代谢异常具有一定的相关性，咽炎消合剂的疏肝解郁、健脾益气功效在动物模型上除了能够控制和消除局部炎症症状外，对神经中枢也具有调节作用。值得注意的是，肝郁脾虚给药组血清5-HT水平明显高于标准模型给药组，肝郁脾虚药物低剂量组的5-HT水平甚至高于空白对照组，这说明肝郁脾虚的动物模型比标准动物模型更符合中医肝郁脾虚这一中医证候学特征，同时也说明咽炎消合剂可通过调节5-HT代谢进而改善慢性咽炎的躯体和精神症状。

综上所述，慢性咽炎与5-HT的代谢异常具有一定的相关性，肝郁脾虚为主要病

机；咽炎消合剂除了能够控制和消除咽部炎症症状外，对神经中枢也具有调节作用。

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