咪鲜胺及其代谢物在丝瓜上的残留检测方法及动态研究

刘骞 程运斌 沈菁

摘要：采用气相色谱法（ECD）检测丝瓜中咪鲜胺及其代谢物的总残留量。用丙酮提取丝瓜中的咪鲜胺及其代谢物，在210～240 ℃条件下用吡啶盐酸盐将咪鲜胺及其代谢物全部水解成2，4，6-三氯苯酚，气相色谱法（ECD）测定2，4，6-三氯苯酚的含量，再换算成咪鲜胺的残留量。咪鲜胺在丝瓜中的平均添加回收率为73%～78%， 相对标准偏差（RSD）为4%～6%。咪鲜胺在丝瓜中最低检测浓度为0.02 mg/kg。残留动态研究表明， 咪鲜胺在丝瓜中消解速率快，3 d后，均检测不出咪鲜胺残留量。

关键词：气相色谱法（ECD）;咪鲜胺;丝瓜;消解动态

中图分类号：S642.4;O657.7+1         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2018）23-0136-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.23.032           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

咪鲜胺（Prochloraz）是咪唑类广谱性低毒杀菌剂，其作用机理是通过抑制麦角甾醇的生物合成，从而使菌体细胞膜功能受破坏而起作用。可用于防治白粉菌、炭疽菌等多种致病菌引起的油料作物、谷类、热带和亚热带水果、蔬菜、经济作物的病害，也可用于种子、苗木处理及水果贮存期病害的防治。咪鲜胺的最终降解产物2，4，6-三氯苯酚是环境中重要污染物之一，生物降解性差，会对人类的健康造成潜在威胁，并污染生态环境，因此，检测其在蔬菜水果中的残留量是非常有必要的[1-3]。

目前，检测咪鲜胺的方法主要有气相色谱法[4，5]、液相色谱法、气相色谱串联质谱法[6]、液相色谱串联质谱法[7，8]。罗逢健等[9]先将柑橘样品中的咪鲜胺及其代谢物提取出来，在高温下与盐酸吡啶盐反应全部转化成2，4，6-三氯苯酚，采用气相色谱法检测柑橘中2，4，6-三氯苯酚的含量，最后折算为咪鲜胺残留量。吴琼等[10]建立气质连用法测定牛奶中咪鲜胺及2，4，6-三氯苯酚的含量。王燕等[11]建立液相色谱串联质谱法测定人参和土壤中咪鲜胺的残留量。李天秀等[12]建立高效液相色谱法测定鸭梨中咪鲜胺及代谢物2，4，6-三氯苯酚的含量。由于不同的样本基质需要开发不同的残留检测方法，咪鲜胺及其代谢物在丝瓜上的残留分析方法还未见报道。本研究采用气相色谱法（ECD）检测丝瓜中咪鲜胺及其代谢物的总残留量，为制定咪鲜胺在丝瓜上的安全使用准则提供参考。

1  试剂与材料

1.1  试剂

丙酮、浓盐酸、二氯甲烷、吡啶盐酸盐、浓硫酸均为分析纯;助滤剂545;无水硫酸钠使用前在550 ℃下烘干4 h，冷却后使用;石油醚沸程为30～60 ℃;正己烷为色谱纯。

1.2  标准品

咪鲜胺标准品，纯度98.8%（上海市农药研究所有限公司）;咪鲜胺标准储备溶液，1 000 mg/L，准确称取咪鲜胺标准品0.050 0 g，加丙酮溶解并定容至50 mL的容量瓶中。

1.3  仪器设备及型号

6890N气相色谱仪，配ECD检测器（Agilent，美国）;HY-5A回旋振荡器（国华，中国）;HX-VP01泵（恒信，中国）;FYZD100分液漏斗振荡器（ANPEL，中国）;SENCO？誖旋转蒸发器（申生，中国）;ZNCL-DLS250ML智能磁力搅拌器;RK 100H超声波清洗器（BANDELIN SONOREX，德国）;MS 3涡旋仪（IKA，德国）;电子天平、移液枪、氮吹仪以及其他实验室常用仪器设备。

1.4  方法

1.4.1  提取  称取丝瓜样品40.00 g于250 mL锥形瓶中，加入5 mL盐酸，80 mL丙酮浸泡过夜（12～16 h），振荡提取60 min，提取液经装有助滤剂545的布氏漏斗抽滤，滤渣再用20～30 mL丙酮分次淋洗，合并滤液于500 mL分液漏斗中，用60 mL二氯甲烷振荡萃取15 min，下层有机相经装有无水硫酸钠的漏斗过滤于250 mL磨口圆底烧瓶中，并用适量二氯甲烷洗涤漏斗，用旋转蒸发仪器减压蒸馏至近干。

1.4.2  分解  在上述磨口圆底烧瓶中加入5 g吡啶盐酸盐，置于加热套内240 ℃加热回流1.5 h，冷却后，用10 mL去离子水冲洗冷凝管，取出磨口圆底烧瓶，超声溶解盐酸吡啶盐，并转入500 mL分液漏斗，并用40 mL去离子水分次冲洗圆底烧瓶后转入分液漏斗中，用石油醚萃取两次（每次50 mL），弃去水相，合并有机相。

1.4.3  净化  向上述有机相中加入5 mL硫酸，振摇后静止分层，弃去硫酸，重复3次。然后用去离子水洗涤有机相中残余硫酸，每次加50 mL，反复4～5次洗至中性，收集有机相，经无水硫酸钠干燥后用石油醚洗滌浓缩至干，并用正己烷定容至2～4 mL，待上机测定。

1.5  气相色谱条件

色谱柱：INNOWAX（30 m×0.32 mm×0.25 μm）;进样口：240 ℃;检测器（ECD）320 ℃，柱温150 ℃保持1 min，2 ℃/min升至180 ℃，保持2 min，40 ℃/min升至250 ℃，保持5 min。

气体流量：柱流量2 mL/min;隔垫吹扫3 mL/min;尾吹气流量58 mL/min。进样量1.0 μL，不分流进样。

在该色谱条件下2，4，6-三氯苯酚的保留时间为15 min，咪鲜胺标样的气相色谱见图1，丝瓜样品中咪鲜胺及其代谢物残留的气相色谱见图2。

式中，？籽为咪鲜胺标准工作溶液的浓度，mg/L;A样为样品溶液中吡唑醚菌酯的峰面积;A标为标准醚菌酯标准工作溶液中吡唑醚菌酯的峰面积;V为样品溶液定容体积，mL;m为试样的质量，g。

计算结果大于1 mg/kg时保留三位有效数字，当结果小于1 mg/kg时保留两位有效数字，当结果低于最低检测浓度时，以“<定量限”表示。

2  结果与分析

2.1  添加回收试验

检测方法的正确度用添加回收试验进行评价，即在空白对照试验小区采集的丝瓜样品中添加咪鲜胺标准工作溶液，使其含咪鲜胺的量分别为0.02、0.10、1.00 mg/kg，平行处理5组进行检测，检测结果见表1。5次重复的相对标准偏差（RSD）在4%～6%。

2.2  定量限

2.2.1  最小检出量  在上述仪器测定条件下，咪鲜胺的最低检出量为2.0×10-3 ng。

2.2.2  定量限  據添加回收率试验，在上述色谱条件下咪鲜胺及其代谢物在丝瓜中的最低检出浓度为0.02 mg/kg。

2.3  标准曲线

将1 000 mg/L的咪鲜胺标准储备溶液用丙酮稀释至适宜的浓度，以方便使用100、200 μL的移液枪，分别移取1、2、5、10、20、200 μg咪鲜胺于圆底烧瓶中，经过分解及净化得到以咪鲜胺计浓度为0.2、0.4、1、2、4、40 mg/L的系列标准溶液，在“1.5”条件下上机测定，以咪鲜胺的浓度为横坐标，由咪鲜胺转化生成的2，4，6-三氯苯酚峰面积为纵坐标，制作标准曲线。线性方程为：y=150 682.061x-7 118.405 8，相关系数为：r=0.997 5（图3）。其中以咪鲜胺计浓度为40 mg/L的标准溶液作为样品检测前稀释使用，有效期1个月。

2.4  咪鲜胺及其代谢物在丝瓜中的消解试验

在进行消解试验时，检测出丝瓜上的咪鲜胺残留量最大时为0.36 mg/kg，原始沉积量低，3 d后，均检测不出咪鲜胺残留量。可能的原因是生长稀释作用，丝瓜为牵藤作物，果实上不易着药。

3  小结

本检测方法的定量限为0.02 mg/kg，检测方法的添加回收率在73%～79%，相对标准偏差在4%～6%，满足NY/T 788《农作物中农药残留试验准则》的要求;标准曲线覆盖了2个数量级以上。该方法能满足残留量检测的要求，可用于检测丝瓜样品中咪鲜胺及其代谢物残留量。

参考文献：

[1] 乔  琳，侯红敏，朱爱东，等.咪鲜胺在小麦田中的残留消解与膳食风险评估[J].现代农药，2015，14（3）：43-46.

[2] 柳训才，沈  敏，李胜清，等.咪鲜胺及其代谢产物2，4，6-三氯苯酚在蘑菇及土壤中的残留动态[J].农药学学报，2009，11（3）：362-366.

[3] 陈  平，柳训才.咪鲜胺的应用概况及其残留检测研究[J].湖北农业科学，2007，46（3）：478-490.

[4] 高  洁，胡德禹，张钰萍，等.咪鲜胺及其代谢产物在橙汁中的残留检测方法研究[J].农药科学与管理，2011，32（6）：35-39.

[5] 韩丽君，钱传范，江才鑫，等.咪鲜胺及其代谢物在水稻中的残留检测方法及残留动态[J].农药学学报，2005，7（1）：54-58.

[6] 卢俊文，李  蓉，杨  芳，等.气相色谱-串联质谱法快速测定水果中咪鲜胺及其代谢物2，4，6-三氯苯酚的残留量[J].食品科学，2015，36（12）：213-217.

[7] 袁小雅，彭  梓，周慧平，等.香蕉中咪鲜胺的消解动态及安全性评价[J].食品安全质量检测学报，2016，7（1）：209-214.

[8] 程  莉，董丰收，刘新刚，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱方法快速测定小麦中的咪鲜胺残留[J].农药学学报，2009， 11（3）：357-361.

[9] 罗逢健，楼正云，汤富彬，等.咪鲜胺及其代谢物在柑桔中的残留检测方法及其动态研究[J].分析测试学报，2010，29（7）：730-734.

[10] 吴  琼，吕岱竹，韩丙军，等.咪鲜胺及2，4，6-三氯苯酚在牛奶中的残留检测方法[J].山西农业科学，2017，45（6）：937-939，948.

[11] 王  燕，王春伟，高  洁，等.咪鲜胺在人参和土壤中的残留动态及安全性评价[J].东北农业大学学报，2014，45（3）：25-30.

[12] 李天秀，王跃进，刘  波，等.咪鲜胺在鸭梨果体上的残留分析与降解动态研究[J].华南农业大学学报，2010，31（2）：36-39.