多发性骨髓瘤患者淋巴细胞亚群变化对免疫功能的影响研究

贾海英+黄睿+王玲玲+黄国虹+杨丽玮+余亮+王昌敏

摘 要：目的 分析多发性骨髓瘤（MM）患者外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤（NK）细胞的变化。方法 收集69例MM患者及52例健康体检人员的抗凝血，用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞总数（Lym）、CD3+ T淋巴细胞、CD19+ B淋巴细胞及CD16+56+ NK细胞数量。结果 与对照组比较，MM组Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+等6个项目差异均有统计学意义（P<0.05），CD16+56+差异无统计学意义（P>0.05）。结论 MM患者在疾病进程中与T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞、Lym密切相关，对评价MM患者的免疫状况、疾病进展和疗效等方面具有重要作用。

关键词：多发性骨髓瘤；淋巴细胞亚群；流式细胞术

中图分类号：R733.3 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.057

文章编号：1006-1959（2018）01-0147-02

The Effect of Lymphocyte Subgroup Changes on Immune Function in Patients with Multiple Myeloma

JIA Hai-ying1，HUANG Rui1，WANG Ling-ling1，HUANG Guo-hong1，YANG Li-wei1，YU Liang2，WANG Chang-min1

（Clinical Laboratory 1， Pediatrics 2， People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830001，Xinjiang，China）

Abstract：Objective To analyze the multiple myeloma（MM）in peripheral blood of patients with T lymphocytes，B lymphocytes and natural killer （NK） cell changes.Methods Anticoagulated blood were collected from 69 MM patients and 52 cases of healthy people，with the total number of flow cytometry in peripheral blood lymphocytes（Lym），CD3+T lymphocytes，CD19+B lymphocytes and CD16+56+NK cells.Results Compared with the control group，MM group，Lym，CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+，CD19+and other 6 projects，the differences were statistically significant（P<0.05），there was no significant difference between CD16+56+（P>0.05）.Conclusion The MM patients in disease progression and T lymphocyte subsets and B lymphocytes， closely related to Lym to evaluate the immune status of patients with MM，and has an important role in disease progression and therapeutic effect.

Key words：Multiple myeloma；Lymphocyte subgroup；Flow cytometry

多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）系肿瘤性浆细胞在骨髓中多灶性恶性增生所致的一种血液系统疾病，其特点主要为血清或尿中出现单克隆免疫球蛋白或其成分（M蛋白）、可累及全身的溶骨性损害、骨痛、贫血、高钙血症等，发病率位居血液系统恶性肿瘤的第二位[1]。目前MM发病原因及机制尚不清楚，有研究表明MM患者存在细胞免疫功能紊乱[2]。本文用流式细胞术检测新疆地区69例MM患者及52例健康体检人员的淋巴细胞总数（Lym）、T淋巴细胞（CD3+）、B淋巴细胞（CD19+）和NK细胞（CD16+56+）指标，探讨其变化对MM患者机体免疫功能的影响，为进一步深入研究MM发病机制、判断预后及评价疗效提供有价值的参考指标。

1资料与方法

1.1一般资料 选取2016年1月～2017年7月在本院就诊的MM患者69例，其中男39例，女30例，年龄44～85岁，平均年龄（61.75±9.60）岁。所有程序经医院伦理委员会批准。健康对照组为在本院体检中心进行健康体检人员52例，其中男20例，女32例，年龄17～83岁，平均年龄（44.81±15.70）岁。MM诊断符合张之南主编的第3版《血液病诊断及疗效标准》[3]，排除其他急慢性感染、肿瘤及自身免疫性疾病。

1.2主要仪器和试剂 BriCyte E6流式细胞仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产）及配套荧光标记单克隆抗体试剂CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC、流式细胞仪用溶血剂，质控微球为美国Spherotech公司生产的Sphero Supra Rainbow Fluorescent Particles。

1.3方法

1.3.1标本处理 抽取空腹外周静脉血 2 ml，用 EDTA 抗凝。具体步骤：取试管2支，编号，加入全血 50 μl（反向加样），分别加入不同的四标单克隆抗体 20 μl，充分混匀，室温下避光孵育15 min；然后加入 1×免洗溶血素 450 μl，充分混匀，室温下避光孵育15 min，待上机检测。endprint

1.3.2检测 开机后启动MRFlow软件，运行自动化设置和质控，质控在控后进入细胞获取界面，获取细胞得出结果。

1.4统计学方法 采取EXECL2003软件进行数据收集。各组测量值以（x±s）表示，以SPSS13.0统计软件进行统计分析，组间比较采用两样本均数比较的t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

MM组与对照组比较，7个项目Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD16+56+均低于对照组，其中Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+计6个项目差异有统计学意义（P<0.05），CD16+56+差异无统计学意义，见表1。

3讨论

MM是一种起源于前B 细胞的骨髓浆细胞异常增生的恶性肿瘤。而淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体，占外周血白细胞总数的20%～45%。根据其细胞表面分化群（cluster of differentiation，CD）分子表达情况可将其分为CD3+ T淋巴细胞、CD19+ B淋巴细胞、CD16+56+ NK淋巴细胞等。其中CD3+ T淋巴细胞又可分为CD3+CD4+ T即CD4+辅助/诱导T细胞和CD3+CD8+ T即CD8+抑制/杀伤T细胞（简称Th细胞和Ts细胞）。这些淋巴细胞在免疫应答过程中相互协作、相互制约、共同完成对机体异物的识别、应答、和清除，从而维持机体内环境稳定[4]。

Shen等[5]研究发现，MM患者不但有体液免疫功能缺陷，其细胞免疫功能也有异常，尤其是T淋巴细胞的表型和功能异常。本研究发现，Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+ MM组均低于对照组，且差异有统计学意义（P<0.05），与黄亚丽等[6]的研究一致。CD16+56+ MM组虽然低于对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）。可见本组患者T淋巴细胞和B淋巴细胞均有异常。CD4+ Th细胞表达受到抑制致使数量显著减少，而CD8+ Ts细胞降低不明显，导致CD4+/CD8+比值下降，机体细胞免疫功能受到影响，肿瘤得以逃避免疫监视，抗肿瘤能力降低。

B淋巴细胞是体内唯一能产生抗体（免疫球蛋白）的细胞，其主要作用是产生抗体，提呈抗原以及分泌细胞因子参与免疫调节，发挥体液免疫功能。本研究结果提示，MM患者B细胞比正常人显著降低，可能的原因为MM常伴有异常单克隆免疫球蛋白（M蛋白）增多，反馈抑制正常多克隆B细胞分化发育，使MM患者外周血多克隆B细胞减少，导致体液免疫功能缺陷。NK细胞又称自然杀伤细胞，无须预先致敏可直接杀伤靶细胞，具有抗感染、抗肿瘤、免疫调节等功能。本研究提示MM患者NK细胞比正常人略降低，且差异无统计学意义（P>0.05），可能与本组患者所处疾病时期有关，说明本组患者机体抗肿瘤能力已经被削弱，提示患者可能预后不良。

总之，运用流式细胞术检测MM患者外周血淋巴细胞亚群变化可及时了解患者机体免疫状态，通过监测T细胞来观察细胞免疫功能、通过监测B细胞可观察体液免疫功能，而NK细胞可反映机体抗肿瘤能力，从而及时掌握患者病情变化，为患者制定适合有效的诊治方案及判断预后提供可靠的依据。

参考文献：

[1]郭秀臣，全丽娜，李红，等.多发性骨髓瘤患者骨髓中Treg细胞与预后相关性研究[J].实用肿瘤学杂志，2014，28（1）：54-58.

[2]赵霞，许庆，丁慧芳，等.DC-CIK联合化疗对多发性骨髓瘤患者细胞免疫功能的影响[J].中国免疫学杂志，2015，31（4）：490-496.

[3]张之南，沈悌.血液病诊断及疗效标准[M].第3版.北京：科学出版社，2007：232-233.

[4]龚非力.医学免疫学[M].北京：人民卫生出版社，2008.

[5]Shen CJ，Yuan ZH，Liu YX，et al.Increased numbers of T helper 17 cells and the correlation with clinicopathological characteristics in multiple myeloma[J].J Int Med Res，2012，40（2）：556-564.

[6]黄亚丽，杨丽萍，廖建军，等.T细胞亚群与NK细胞在难治性多发性骨髓瘤患者表达水平的研究[J].黑龙江医药，2015，28（3）：485-488.

收稿日期：2017-8-28；修回日期：2017-9-6

編辑/杨倩endprint