宫颈癌组织lncRNA MALAT1表达变化及其与预后的关系

孙敏，孙屏，虞蔚，刘建文，王丽佳

(1无锡市第三人民医院，江苏无锡214000；2无锡市第二人民医院；3无锡市妇幼保健院)

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌[1]。随着技术的进展，宫颈癌治疗方法从外科手术为主逐渐转变为多种传统及新辅助治疗相结合的方法[2]。但宫颈癌复发率较高，病死率下降并不明显[3]。因此，进一步了解宫颈癌的发生、进展机制有助于改善宫颈癌患者预后。有研究表明，与表观遗传学表达相关的分子可能在宫颈癌的进展中具有重要作用[4]。长链非编码RNA(lncRNA)是一类重要的表观遗传学表达相关分子。lncRNA已被证实能够通过干扰转录因子与启动子的结合、干扰沉默基因、干扰临近基因表达、参与染色体修饰等作用，广泛参与细胞周期调控、胚胎干细胞分化、机体生长发育等多种生理进程[5]。已有多种lncRNA被证实与癌症的发生、发展密切相关[6,7]。肺癌转移相关转录本1(MALAT1)是最早被发现的lncRNA之一。本研究观察了宫颈癌组织MALAT1表达变化，并分析其与患者临床病理参数及预后的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取无锡市第三人民医院2012年1月～2016年12月收治的宫颈癌患者。纳入标准：①经病理科确诊为原发性宫颈癌；②病例资料、组织标本保存完整；③患者术前未经放、化疗等其他抗肿瘤治疗；④患者未合并其他恶性肿瘤；⑤患者未合并其他影响生物指标检测的严重疾病。共纳入患者83例，年龄≤55岁46例、>55岁37例；鳞癌71例、腺癌12例；组织分化程度为高分化22例、中分化42例、低分化19例；肿瘤分期为Ⅰ期35例、Ⅱ期39例、Ⅲ期8例、Ⅳ期1例；有淋巴结转移14例、无淋巴结转移69例。所有患者经宫颈细胞涂片检查，均为高危型HPV阳性。获得患者的存档标本83例份。标本为于筋膜外全子宫切除术、次广泛全子宫切除术及广泛性全子宫切除术中切取的宫颈癌组织及距肿瘤组织边缘大于5 cm的癌旁正常组织。本研究经无锡市第三人民医院医学伦理委员会批准，患者或其家属知情同意。

1.2 MALAT1表达检测 采用实时荧光定量PCR法。将保存的标本取出，PBS冲洗3次，按照RNAisoTMPlus Tatol RNA提取试剂盒(购自日本TaKaRa公司)说明提取总RNA。用紫外分光光度计检测总RNA纯度，取OD260/OD280在1.8～2.0的样本。按PrimeScriptTM反转录试剂盒(购自上海名劲生物科技有限公司)使用说明将总RNA逆转录为cDNA。以GAPDH为内参。MALAT1上游引物序列为5′-GGTAACGATGGTGTCGAGGTC-3′，下游引物序列为5′-CCAGCATTACAGTTCTTGAACATG-3′；GAPDH上游引物序列为5′-ACAGTCAGCCGCATCTTCTT-3′，下游引物序列为5′-GACAAGCTTCCCGTTCTCAG-3′。每个样本设3个复孔，反应体系共20 μL。反应条件为95 ℃预变性10 min，95 ℃变性1 min，再经60 ℃退火及延伸45 s，以上循环40次。以2-ΔΔCt法计算MALAT1相对表达量。

1.3 预后观察 以患者术后出院为观察起始，结合患者复诊病历，利用电话对患者或其家属进行随访。随访截至2017年12月。记录患者生存时间并计算生存率。

2 结果

2.1 宫颈癌组织及癌旁正常组织MALAT1表达比较 宫颈癌组织及癌旁正常组织MALAT1相对表达量分别为0.413±0.305、0.201±0.192，宫颈癌组织MALAT1相对表达量高于癌旁正常组织(P<0.05)。

2.2 MALAT1表达与宫颈癌患者临床病理参数的关系 Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期宫颈癌患者肿瘤组织MALAT1相对表达量依次升高，有淋巴结转移者MALAT1相对表达量高于无淋巴结转移者(P均<0.05)。MALAT1表达与患者年龄、肿瘤直径、病理类型、组织分化程度无关(P均>0.05)。详见表1。

2.3 宫颈癌组织MALAT1表达与患者预后的关系 随访时间12～63个月，中位随访时间32个月。以宫颈癌组织中MALAT1相对表达量均数为界，将宫颈癌患者分为MALAT1低表达组(50例)与MALAT1高表达组(33例)。MALAT1低表达组生存率为88.00%(44/50)、生存时间为(56.9±2.3)个月，MALAT1高表达组分别为66.67%(22/33)、(46.5±3.8)个月。与MALAT1低表达组相比，MALAT1高表达组生存率更低、生存时间更短(P均<0.05)。详见图1。

3 讨论

全球每年近50万新发宫颈癌病例中，超过80%发生在未普及宫颈癌筛查的发展中国家。我国

表1 MALAT1表达与宫颈癌患者临床病理参数的关系

注：与肿瘤分期Ⅰ期者相比，*P<0.05；与肿瘤分期Ⅱ期者相比，#P<0.05；与无淋巴结转移者相比，△P<0.05。

图1 MALAT1低表达组与MALAT1高表达组Kaplan-Meier生存曲线

每年新发宫颈癌患者约13万例，发病率已高居世界第二位[8]。目前我国宫颈癌防治工作仍以机会性筛查为主，普通群众对筛查的参与度仍然不足[9]，且我国公共卫生相关基础建设与发达国家相比差距明显，因此卫生经济学相关的问题日益受到重视[10]。对于接受治疗的宫颈癌患者选取合适的预后指标进行监测，有助于合理分配医疗资源，最大限度提高患者生存率，延长术后生存时间。

lncRNA是一类长度超过200个核苷酸的非蛋白质编码RNA。不同于传统的基因转录“噪音假说”，lncRNA虽不直接参与编码蛋白质，但在机体正常生理活动(包括转录前与转录后调控、细胞周期调控、表观遗传学修饰及免疫应答)中起重要作用[11]，而且与肿瘤的发生、发展密切相关[12]。MALAT1定位于染色体11q13.1，全长6.7 kb，由Ji等[13]于观察非小细胞肺癌转移现象时发现并命名。一项研究[14]通过检测正常组织与恶性肿瘤组织中的多种lncRNA发现，MALAT1在原发于食管、胆囊、脑、骨髓、软骨、卵巢等17种不同部位的恶性肿瘤组织中高表达。本研究结果显示，宫颈癌组织MALAT1表达增高，与MALAT1在其他恶性肿瘤组织中的表达趋势一致，提示MALAT1的异常表达可能与宫颈癌的发病密切相关。

Guo等[15]于体外实验中利用短发夹RNA抑制人宫颈癌CaSki细胞中MALAT1表达，发现MALAT1可通过调控Caspase-3、Caspase-8、Bax、Bcl-2、Bcl-xL等基因相关信号通路，促进宫颈癌细胞增殖、加速细胞周期进程，增强细胞侵袭力。Liu等[16]发现，敲除MALAT1基因的宫颈癌HeLa与SiHa细胞出现增殖减慢、侵袭抑制、凋亡增加等效应。本研究发现，MALAT1表达与宫颈癌肿瘤分期、淋巴结转移有关，提示MALAT1能够促进宫颈癌的增殖与侵袭等恶性进展。

研究显示，临床分期、病理类型、淋巴结转移、治疗方式等为宫颈癌患者的重要预后因素[17,18]。本研究随访结果显示，与MALAT1低表达组相比，MALAT1高表达组生存率更低、生存时间更短，这从临床结局方面印证了MALAT1可促进宫颈癌细胞增殖与侵袭。已有研究表明，MALAT1表达较高的多发性骨髓瘤[19]、膀胱癌[20]、神经胶质瘤[21]等恶性肿瘤患者预后均较差。本研究结果与上述报道基本一致。因此，对于MALAT1表达较高的患者，需要加强术后监护，合理应用辅助抗肿瘤技术，以提高患者术后生存率，延长术后生存时间。

综上所述，MALAT1在宫颈癌组织中异常高表达，且与宫颈癌的发生、发展相关。MALAT1低表达患者预后优于MALAT1高表达患者，因此MALAT1有望成为评估宫颈癌患者预后的新指标。