H5+H7禽流感疫苗免疫抗体检测试验报告

邢清洁，景建江，杨雪珍，郝建敏

（1.内丘县动物疫病预防控制中心，河北内丘054200；2.邢台县动物疫病预防控制中心，河北邢台054001）

2017年秋防集中免疫，内丘县180余万只鸡全部使用了禽流感H5N1Re8株+H7N9 H7 Re1株灭活疫苗 （以下简称H5+H7）免疫，免疫注射结束后，为科学评估H5+H7疫苗临床使用的安全性和免疫效果，我们对其中的80个养鸡场共计3.68万只鸡按每户20只鸡抽检1600份进行了跟踪调查及抗体检测化验。结果表明，首次免疫注射30天后H7抗体可以达到6以上，加强免疫后的H5N1Re8抗体达到8以上，临床使用安全，现将检测结果报告如下：

1　试验鸡群选择

随机选择注射过H5+H7疫苗的80个3000只以上存栏鸡场，为了解疫苗对产蛋鸡生产性能的影响，年龄选择均为120～400日龄的产蛋鸡群。要求鸡群健康无发病史，鸡群按常规免疫程序免疫，在本次免疫之前未使用过含有H7N9流感的疫苗，且本次使用H7N9疫苗免疫后满30天左右鸡，每场采血20份，每羽采血量1ml，分离血清后冷冻保存备检。

2　疫苗及监测试剂

内丘县疫苗使用的为国家统一招标采购的H5+H7疫苗，生产厂家包括哈尔滨维科生物技术开发公司、青岛易邦生物工程有限公司及广东永顺生物制药股份有限公司三个厂家，注射剂量为每羽0.5ml，注射部位为胸部或大腿外侧。采样单设计包括鸡日龄、注苗时间、注苗量、不良反应描述、曾经使用过的禽流感疫苗等几项关键数据。检测用试剂为哈尔滨维科生物技术开发公司生产，禽流感病毒H5亚型Re8株病毒血凝抑制试验抗原，批号为2016005；禽流感病毒H7亚型病毒血凝抑制试验抗原，批号为2017004。

3　监测方法及结果

血凝抑制试验使用96孔V型135度微量反应板进行，检测方法按 《高致病禽流感诊断技术》国家标准 （GB／T18936-2003）方法进行检测。为保证结果的准确性，实验中设阳性对照、阴性对照，并对配制的4单位病毒均进行回归试验。结果判定标准（按log2表述，如4则代表为4 log2）。检测项目为H5N1-Re8抗体及对应血清的H7抗体。

经对1600份血清化验，其中H5N1-Re8血清血凝抑制抗体均达到8以上，H7血清血凝抑制抗体平均达到6以上。

以上80个养鸡场经实地调查注射疫苗后一周内产蛋率下降均不超过5%，一周后即恢复正常。

4　结果分析

4.1通过以上实验证明，H5+H7疫苗田间使用免疫应答性显著，临床使用安全。按要求抗体水平达到4以上即可抵抗高致病禽流感的侵袭，首次免疫H7抗体即可达到6以上说明H7N9流感疫苗免疫效果可靠。

4.2本试验对H5N1使用检测试剂抗原为H5N1-Re8株，与使用的H5+H7疫苗中H5N1-Re8株对应。 H5N1-Re8抗体水平都在8以上（本次试验为提高效率实验只做到8，实际抗体效价可能更高）。尽管抗体效价较高，但不能反应是本次疫苗注射的效果，因为使用H5+H7疫苗前这些养鸡户执行的是本次秋防前的免疫程序，按程序均使用过2次以上的禽流感H5N1-Re6.7.8株疫苗。检测数据反映出的是H5N1-Re8加强免疫后抗体水平。分析H5+H7疫苗免疫后H5N1-Re8的抗体效价还有待于鸡群完全使用单一的H5+H7疫苗后抽血检测方可。

4.3为提高结果的准确性，实验中对4单位病毒配比比例准确性至关重要，每次试验一定要对配好的4单位病毒进行凝集性回归试验。

4.4检测中发现个别鸡场H7抗体效价有比平均值偏高1～2个滴度的情况，调查显示这些户注射疫苗量都超过0.5ml，说明疫苗注射量明显影响抗体效价。因此，为了提高保护率，有必要首免后30天内再进行一次加强免疫。