探讨CD146在人骨肉瘤患者组织中的表达及其临床意义

邱枫 王晓菲 朱明瀚

骨肉瘤是骨骼系统恶性肿瘤疾病，青少年也有不少患者发病，小儿患者的发病率大约是5%，该疾病对人类的生存产生了威胁。早期骨瘤肉患者（Enneking IIA期）的症状较轻，一般不容易觉察到，大部分患者都是在中晚期时确诊。现在新型辅助化疗和外科治疗相结合的方式获得一定的进展，因此，骨肉瘤患者的5年生存率能够提升至60%[1]，但还有50%的患者会出现肺转移，而肺转移患者的5年生存率大约是10%～15%[2-5]。研究显示，人体有许多的恶性肿瘤都呈现CD146高表达状态[6-8]。肿瘤的生长需要依靠血管提供氧和营养，恶性肿瘤细胞进入附近的肿瘤血管，以此为扩散途径。因此，肿瘤的生长、浸润、转移等过程都和肿瘤血管有关。但对于其在骨肉瘤的发生和发展作用的研究比较少，此次采取了免疫组织化学检验，检测CD146表达情况，并统计患者的微血管密度（microvessel density，MVD），探讨CD146表达对骨肉瘤患者的意义，现进行以下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院接收的骨肉瘤患者50例开展研究分析，其中有20例女性患者和30例男性患者，患者年龄最小7岁，最大31岁，平均（20.0±2.3）岁，经病理诊断确诊为骨肉瘤。

1.2 试剂及仪器

CD146：上游引物5'-GAAAAAGTGTGGCTGGAAGT-3'，下游引物5'-GTTGTCGTTGGTTGTCTC TT-3'；内参基因：核糖体蛋白S18：上游引物5'-CGA TGG GCGGCG GAA AAT A-3'，下游引物5'-CTGCTTTCCTCAACACCACA-3'； QPCR 反应仪为ABI 7500（ABI公司）；日本Olympus BX51 光学显微镜；Real Time反应试剂盒（OMEGA公司）；逆转录试剂盒（Sigma公司）；总蛋白提取试剂盒（BestBio公司）。鼠抗人CD146单克隆抗体（美国Santa Cruz 公司产品）。CD34 鼠抗人单克隆抗体、抗鼠即用型快速免疫组化MaxVisionTM 检测试剂盒及DAB 染色试剂盒（福州迈新生物技术有限公司）。

1.3 实验方法

CD146及CD34的免疫组化检测：将骨肉瘤及骨肉瘤周围非恶性组织标本制成4 μm切片，参照试剂盒说明书进行免疫组织化学染色。简要过程如下：切片用二甲苯脱蜡后浸泡，高压抗原修复，血清封闭加一抗，4℃孵育过夜，再复温后加入二抗，孵育。用DAB显色，苏木精对比染色后脱水、透明、封片。在光镜下观察结果。

1.4 统计学分析

应用SPSS 16.0软件完成统计学处理。计量资料用（均数±标准差）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结果

骨肉瘤患者的组织内CD146以阳性表达为主，全部患者的切片中，有36例阳性，14例阴性，阳性率是72%。染色结果显示所有骨肉瘤切片中CD34均呈阳性表达，根据Weidner的计数方法，骨肉瘤组中的MVD平均值为（48.68±4.00），周围非恶性组织的MVD平均值为（10.27±3.00），两者对比，差异有统计学意义（P＜0.01）。

3 讨论

骨肉瘤是现在对青少年生命产生较大威胁的疾病，临床中需要寻找可靠有效的治疗方式，肿瘤血管生成以及它对肿瘤的发展，转移，侵袭等过程产生的作用是研究的新方向[6-8]。肿瘤无血管阶段获取的营养物质以及清除代谢物质都是通过附近组织弥散作用来完成的，肿瘤增殖到一定程度就会产生血管，这就是血管期；因为新生血管结构不完整，不成熟，易被肿瘤细胞侵袭破坏。肿瘤组织的新生血管数量和肿瘤增生速度成正比，和转移的几率呈正比，和患者的生存期限呈反比。

此次研究中，骨肉瘤患者的组织内CD146以阳性表达为主，全部患者的切片中，有36例阳性，14例阴性，阳性率是72%。在光学显微镜下可见CD146表达阴性阳性判断是根据胞膜或胞浆中的颗粒颜色和胞质内的棕黄色颗粒出现情况来判断，在前者中出现为阳性，在后者中出现为阴性。患者的CD146表达和骨肉瘤分期和肺转移情况有直接联系（P＜0.01）。

总之，骨肉瘤组织的CD146表达可以作为诊断骨肉瘤的指标和依据，对其进行监控，能够对患者的病情发展程度和转移情况进行了解，为临床治疗提供更加多的有用信息，临床中对于这方面的研究应该继续深入。

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