不同溶剂艾蒿提取液对黄瓜枯萎病菌的抑菌活性研究

秦凯+刘永震

摘要 利用甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮4种有机溶剂在相同温度和相同浓度下分别多次提取的方法提取了艾蒿中的抑菌成分，对经多次提取得到的不同有机溶劑的艾蒿提取液进行减压浓缩，得到浓度为0.5 g/mL的艾蒿提取液。通过对比在加入不同量的不同有机溶剂提取液的PDA培养基上病原菌的生长直径，测定了艾蒿提取液对黄瓜枯萎病菌的抑菌活性。结果表明，浓度相同时，艾蒿的乙酸乙酯提取液抑菌活性最好，且随着加入量的增加，抑菌活性逐渐增强。

关键词 艾蒿；提取物；黄瓜枯萎病菌；抑菌活性

中图分类号 S436.421.1+3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）01-0107-01

艾蒿（Artemisia argyi）也称艾草，属于菊目菊科蒿属，对多种真菌都有抗拒特性，能够抑制菌丝生长和孢子萌发，还具有抗病毒作用[1]。本试验利用几种有机溶剂对艾蒿茎叶进行提取，通过试验测定其对黄瓜枯萎病菌的抑制效果，以为艾蒿在植物病害防治应用方面提供理论依据，为开发新型农药提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

艾蒿茎叶采集于邢台市平乡县河古庙镇董固村，取茎和叶，洗去尘土，置于阴凉背风处自然风干。利用万能粉碎机将风干后的艾蒿茎叶粉碎成粉末状，盛入预先消毒的牛皮纸袋中，密封，保存。

PDA培养基；甲醇、75%乙醇、乙酸乙酯、丙酮、均为分析纯；黄瓜枯萎病病原菌。

1.2 试验方法

1.2.1 艾蒿抑菌物质的提取。准确称取4份粉末状的艾蒿茎叶7 g迅速放入4只容积为250 mL的三角瓶中，分别倒入60 mL甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮，迅速用封口膜密封，振荡1～2 min，使粉末与有机溶剂均匀分布在三角瓶中。将三角瓶放入恒温振荡器中25 ℃ 振荡提取24 h后，取出三角瓶用真空抽滤泵对液体进行抽滤，滤液密封后放入冰箱中4 ℃保存，依此提取3次，将3次抽滤得到的滤液分别混合，得到提取液[2]。

将甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮提取艾蒿茎叶得到的滤液分别放入旋转蒸发器中浓缩，艾蒿的甲醇提取液在60 ℃ 水温下浓缩，乙醇提取液和乙酸乙酯提取液在70 ℃ 水温下浓缩，丙酮提取液在50 ℃ 水温下浓缩，4种提取液均浓缩至14 mL，最终均得到0.5 g/mL艾蒿提取液，密封，放入冰箱中4 ℃ 保存[3]。

1.2.2 抑菌活性测试。在无菌条件下倒PDA培养基平板（每皿30 mL），待平板冷却凝固后，用打孔法将黄瓜枯萎病原菌接种到培养皿中，重复4皿，作为对照组，放入25 ℃ 恒温培养箱中倒置培养。分别在4个装有120 mL PDA培养基的三角瓶中分别加入0.4 mL 4种有机溶剂的艾蒿提取液作为试验组的第1个浓度梯度，在4个装有120 mL PDA培养基的三角瓶中分别加入0.8 mL 4种有机溶剂的艾蒿提取液作为试验组的第2个浓度梯度，在4个装有120 mL PDA培养基的三角瓶中分别加入1.6 mL 4种有机溶剂的艾蒿提取液作为试验组的第3个浓度梯度。在无菌条件下用持皿法倒混入提取液的培养基平板（每皿30 mL），待平板冷却凝固后，用打孔法将病原菌分别接种到混入不同浓度提取液的PDA培养基的平皿中，每个浓度梯度接种4皿，25 ℃ 恒温培养箱中倒置培养。

待对照菌落长满全皿时，分类记录各个培养基中植物病原菌的半径。对照组中每种植物病原真菌的平均直径作为最终采用的对照组菌落直径。根据对照组菌落的直径和试验组菌落的直径分别计算出每种植物病原真菌在不同有机溶剂提取和不同提取液混入量下的抑制率[4]。

2 结果与分析

由表1可知，当加入提取液量相同时，艾蒿的乙酸乙酯提取物对黄瓜枯萎病病原菌的抑制效果最好，且随着乙酸乙酯提取物浓度增加抑菌活性在增强，分别为51.10%、54.21%和55.94%，均高于加入相同量提取液的甲醇提取液、乙醇提取液和丙酮提取液的抑菌活性。在加入同等浓度不同溶剂提取液中，艾蒿的丙酮提取物对黄瓜枯萎病病原菌的抑制效果最差。由此可见，在艾蒿中提取对黄瓜枯萎病病原菌有抑制作用的物质时，乙酸乙酯效果好，应作为优先考虑使用的有机溶剂。

3 讨论

艾蒿中具有抑菌效果的物质主要为黄酮类和挥发油，两者对植物病原菌均有一定的抑制效果，提取物的浓度与其抑制率成正相关[5]。黄酮类化合物具有较强的抗氧化性，可以起到抗氧化、清除自由基的作用，对很多植物类病原菌都有抗拒特性，能够抑制菌丝生长和孢子萌发。通过有机溶剂浸泡法制得的艾蒿提取液中的抑菌物质热稳定性不好，同时温度较高会加速有机溶剂的挥发，从而减弱了提取效果。通过本试验可以推测，艾蒿的有机溶剂浸提物对一些黄瓜枯萎病原菌具有一定的抑制作用，但由于本试验是在离体培养条件下进行的，因而室外自然生长状态下的抑菌效果以及艾蒿提取液的有效成分对各类植物病原菌的抑制作用机理还需进行研究[6]。

4 参考文献

[1] 卢学根.艾叶中抑菌物质的提取及抑菌作用研究[J].食品科技，2006（10）：54-56.

[2] 胡林峰，崔乘幸，吴玉博，等.艾蒿化学成分及其生物活性研究进展[J].河南科技学院学报（自然科学版），2010，38（4）：75-77.

[3] 孙福娟，陈莉，孙卫国.微波法艾蒿色素提取及抗菌性能研究[J].毛纺科技，2011，39（2）：17-20.

[4] 徐芙清，何伟，郑星，等.野艾蒿及其有几提取物对铜绿微囊藻生长的抑制作用[J].生态学报，2010，30（3）：745-750.

[5] 吴娜，张瑞巧，孙智达.艾蒿中黄酮类化合物的提取工艺研究[J].食品工业科技，2008（1）：228-229.

[6] 陈纯.艾蒿的抑菌作用及其在果蔬保鲜中的应用[D].福州：福建农林大学，2009.