洪智敏
摘要:猪呼吸道疾病是当前规模化猪场普遍存在却难以根治的问题,猪肺炎支原体普遍被认为是呼吸道疾病的主要元凶,近年来,猪鼻支原体作为呼吸道疾病第二大病原被越来越多报道。猪鼻支原体不同于与猪肺炎支原体专性定值呼吸道,能定位机体多个组织,表现出多样的寄生方式,能感染多种细胞,引起广大养殖户、兽医及研究学者的重视。本文从流行病学、发病机理、临床症状、病理剖检、实验室诊断、治疗措施以及预防措施等方面进行综述,以期为临床上有效控制猪呼吸道疾病的发生提供参考。
关键词:猪鼻支原体;综合防治
猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是一种类似细菌但无细胞壁结构,能在无生命的人工培养基中培养的原核微生物。Mhr大小介于细菌和病毒之间,具有高度的多形性,寄生于真核细胞的胞内或胞膜,属于革兰氏阴性菌,对青霉素等可干扰细胞壁形成的药物有抵抗性。Mhr从猪体内首先被分离出来,属于寄生在猪鼻腔内的常在菌,可引发猪地方性肺炎和仔猪多发性浆膜炎、胸膜炎、肺炎、心包炎、关节炎、中耳炎等临床症状,也是实验室常见的污染源之一。该病在猪群中广泛流行,以高发病率和低死亡率为特征,主要通过呼吸道传播,侵害断奶仔猪。临床上常与其他病原微生物混合感染,造成严重的猪呼吸道综合征,导致仔猪的死亡率显著升高,给养猪业带来巨大的经济损失。目前,对于该病尚无理想的抗生素药物治疗和有效的疫苗预防。因此,了解猪鼻支原体病的流行病学特点和临床症状、病理变化,借助实验室诊断,有助于采取更加有效的防控措施,预防该病的发生。
1流行病学
猪鼻支原体普遍存在于病猪的鼻腔、气管和支气管分泌物中,是哺乳圈或生长圈内常见病原菌。乳猪和断奶仔猪易感,由感染的母猪通过咳嗽、打喷嚏等方式以气溶胶或粉尘传播,病猪表现为多发性浆膜炎、关节炎以及肺炎等临床症状。成年猪和母猪无明显的临床症状,呈慢性或隐性感染。本病主要是通过呼吸道和消化道传播的,一旦猪群中有感染猪鼻支原体病的机体,病原体便会随着病猪咳嗽和打喷嚏时的分泌物排出,并在猪群中迅速传播。健康猪吸入带病原的飞沫后,机体免疫力强时,可抵抗病原感染,抑制本病发生;在机体免疫力较弱的情况下,本病发生率就高,且病原体较难彻底扑灭。
2发病机理
支气管纤毛可以黏附和清除病原菌,而猪鼻支原体的侵入并黏附在其有纤毛的上皮细胞上,破坏纤毛,降低纖毛作用,导致病原微生物易于侵入,为其他病原的侵入感染提供便利。同时猪鼻支原体并不专性定植于呼吸道,易沉降至肺脏等非呼吸道部位,定位于机体多种组织,引起猪的多发性浆膜炎、关节炎以及肺炎等临床症状,引起猪并继发感染其他疾病,加重患猪病情。
猪鼻支原体造成严重的全身疾病的具体机制目前尚不清楚,支原体一般不通过直接的毒力因子致病,而是通过黏附宿主细胞,并在宿主细胞增殖、感染,因而黏附因子在支原体感染致病的过程中有着极为重要意义。近几年,有报道指出,在多种恶性肿瘤中检出支原体病原体,其可在人体组织中寄生,长期感染能够诱导癌症的发生,对人类健康构成严重威胁。人群感染猪鼻支原体的感染状况、传播途径均未知,其与宿主之间的关系、发病机制等问题尚未定论。
3临床症状
急性病症主要表现为病猪精神沉郁,食欲减退,被毛粗乱欠光泽,轻度发热(40~40.5℃),腹部触痛;患猪负重感明显,出现行走困难,跛行关节肿胀,关节囊内的滑液增多,可能会出现过度伸展动作;最易发生炎症的是跗关节、膝关节、腕关节和肩关节,偶尔寰枕关节也受侵害,运动时有疼痛表现,部分病猪呼吸困难,腹泻,死前有神经症状。急性症状的持续时间和严重程度因病变程度不同而异,病程有些不规律,反复发生,出现好转或病情恶化甚至急性死亡。临床症状通常在感染3~10 d后出现,发病后两周左右,急性症状开始减轻。
本病感染的亚急性期特征性症状为被感染的猪关节病变严重,伴多发性浆液性关节炎,跛行和关节肿胀可能会持续存在2~3个月,有些猪甚至跛行更长时间,6个月后仍旧有跛行。慢性病变是通过长期持续性感染引发机体慢性炎症应答,而导致病变的发生,主要表现为胸膜和心包黏连。
4病理变化
不同猪场,猪鼻支原体感染后的病变程度不同。年龄的差异,是患猪感染后病变程度不同的一个因素。一般情况下,6周龄以下的猪病变更为严重。不同致病菌株对不同组织部位浆膜的亲嗜性不同,感染的症状也有所差异,主要表现症状有心包炎、腹膜炎或关节炎。同时要注意与猪副嗜血杆菌、猪滑液支原体感染等的区别,由于这几种细菌感染有相似的病症。
猪鼻支原体感染急性期的病理变化主要表现为浆液和脓性纤维蛋白性心包炎和程度较轻的胸膜炎、腹膜炎,关节炎的急性病理变化为关节肿胀、疼痛,关节内有乳白色脓液。亚急性病变主要表现为浆膜云雾状化,纤维素样粘连并增厚,肿胀关节有浓样,肺脏呈现间质性肺炎病变;镜下观察有纤维性结缔组织及散在的淋巴细胞增生灶。
5实验室诊断
猪鼻支原体感染与猪副嗜血杆菌的临床症状和病理变化十分相似,均能引起猪的急性多发性浆膜炎,肉眼一般很难分辨,需进行鉴别诊断或通过实验室检测确定。猪鼻支原体感染常见诊断方法主要有病原学诊断检测、血清学检测等。由于自溶性变化会降低已发病猪的分离猪鼻支原体,且猪鼻支原体培养周期长、分离率低,分离病原法较少用于患病猪诊断。目前常用的检测方法有:PCR、免疫组化、酶联免疫吸附实验、胶体金免疫层析实验等。
5.1病原学诊断检测
5.1.1分离培养 猪鼻支原体是体外能进行自我复制的最小微生物,国内外多位学者通过改良培养基,从有呼吸道疾病或多发性浆膜炎病猪的肺脏分离出该菌株,并进行培养鉴定。支原体能在无生命的人工培养基上生长繁殖但其基因组分子量小,缺少合成所有氨基酸的基因,微生物的生物合成能力弱,且支原体培养对PH值和渗透压敏感,体外培养周期长,分离率低,容易出现假阳性,所以Mhr的感染一般不采取分离培养的方法进行诊断检测。endprint
5.1.2实时定量PCR方法 实时定量PCR方法是一种可以对整个扩增过程进行实时检测,简便、快速且特异性强的检测诊断方法,广泛应用于临床检测。可依据猪鼻支原体的基因序列设计引物,创建猪鼻支原体PCR检测方法,该方法较细菌分离培养耗时少,特异性高,且敏感性、检出率高,是一种新型、可靠的诊断检测技术。
5.2血清学诊断检测
5.2.1间接血凝试验 间接血凝试验(IHA)是一种微量、快速的血清学诊断方法,利用抗原抗體结合原理,将抗原包被于红细胞表面,使其拉聚而出现凝集反应,但由于检测血清中含有使红细胞易溶血的因子,样品存在个体差异,不易标准化。同时支原体缺乏细胞壁,其主要抗原物质是存在于细胞表面的蛋白质和脂质,容易和存在相同糖脂成分的细菌以及Mhp阳性血清引起交叉反应。因此,该检测方法不能大规模应用于临床血清样本中Mhr抗体的检测。
5.2.2酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验(ELISA),其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。ELISA方法检测污染物中的猪鼻支原体虽然简便快速,但由于血凝试验中与猪肺支原体、猪絮状支原体、猪滑液囊支原体等发生交叉反应,难于应用到临床检验。目前,刘星等通过应用单克隆抗体建立了以抗原为检测对象的双抗体夹心ELISA方法,有比较好的敏感性和特异性,对病原体的蛋白及活菌有较高的灵敏度,同时此方法的建立为人肿瘤细胞中猪鼻支原体感染的诊断提供了便利的手段。
5.2.3胶体金免疫层析检测技术 胶体金免疫层析检测技术(GICA)是敏感度高、特异性强等特点应用于抗原抗体检测的一种新型的免疫标记技术,操作简洁快速。杨玉萍通过柠檬酸三钠还原法制成胶体金颗粒,制造出双抗体夹心免疫胶体金检测卡,稳定性好、灵敏度高、特异性强,可以适用于临床感染的检测诊断和人群流行病调查。
6治疗预防措施
6.1预防措施
目前清除猪群鼻腔中的病原菌方法有限,科学饲养管理是预防本病的关键。猪场要建立完善的生物安全体系,饲养环境合理布局规划,改善圈舍条件。种猪入场前进行血清学检查,排查阳性猪,同时筛选的阴性猪要进行一段时间隔离培养,确认无感染病原才可入群。
规模化猪场饲养过程中要降低猪群应激反应、控制猪群数量及饲养密度、分群隔离饲养。猪鼻支原体感染四季均能发生,气候变化时期注意防寒保暖、保证猪舍的通风换气以及适宜的温湿度,预防疾病的发生,减少呼吸道、肠道疾病的影响以及疾病在猪群的传播,必要时选择刺激性小的消毒剂带猪环境喷雾消毒,提高猪群抵抗力。发现猪群中有感染猪鼻支原体后,全群投喂泰乐菌素或林可霉素,较抗生素治疗发病猪有很好的预防效果。
6.2药物的治疗
猪鼻支原体感染后可使用疫苗和药物进行控制,而临床上相关疫苗较少且效果不明显,目前多使用药物进行治疗。研究表明Mhr对盐酸林可霉素和大环内酯类抗生素较为敏感,对替米考星、林可霉素、泰乐菌素的最低抑菌浓度(MIC)分别为4g/mL、2g/mL 1g/mL。在临床上可用林可霉素44~77mg/kg混饲或10~20mg/kg肌内注射;泰乐菌素0.1mg/kg混饲或2~10mg/kg肌内注射。猪鼻支原体无细胞壁,通过干扰细菌细胞壁合成而发挥作用的抗生素治疗疗效通常不太理想。在自然状态下,猪鼻支原体感染多呈慢性应答且炎症反应长期存在,因此要及早发现并隔离治疗。
7小结
据调查研究发现,某些猪场猪鼻支原体检测阳性率(63.3%)高于猪肺炎支原体阳性率(17.24%),表明在当前规模化猪场中,对呼吸道症状的相关病原的重视度是不容忽视的。猪鼻支原体易与猪蓝耳病毒以及猪圆环病毒混合感染,降低猪群的抵抗力和免疫力,加重患猪病情,且近几年来,报道的猪鼻支原体与人的某些胃肠道等恶性肿瘤有一定相关性。综上,猪鼻支原体应引起兽医及相关人员重视。
目前对于猪鼻支原体的致病机理尚未形成定论,且易与猪圆环等其他病原混感,混感后常表现出其他病原的临床症状,病理变化又与猪肺支原体、猪副嗜血杆菌感染引起的临床症状和病理变化相似,增加了临床诊断和预判的难度。因此,综合了解猪鼻支原体的发病机理、病理特征以及临床症状,及早发现病症,做好隔离、治疗,提高猪场的综合防治措施是对呼吸道症状真正病因分析的有效endprint