牛结核病防控技术研究进展

努尔拜合提·努尔旦 加伊娜古力

（1.新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心），新疆乌鲁木齐 830011；2.新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆乌鲁木齐 830011）

伴随着牛结核病控制与根除目标实施后，牛结核病防控技术有所成就。现阶段，传统的单一皮试法已经难以达到高标准性要求；随之而来的是皮试法、IFN-γ体外释放、ELISA抗体检测、胶体金抗体检测。根据目标实施后，不同国家结合本地区病情风险状态与发生率选择适合的检测方法，防止错杀隐性个体，效果显著。

1 牛结核病检测技术

1.1 IFN-γ体外释放法

该方法是在血液检测的实验室环境下的检测方法，其流程为：第一，获取抗凝全血并和抗原展开共孵育，刺激活化的T淋巴细胞产生IFN-γ；设置植物刺激素与PBSS刺激的阴性对照。第二，获取上层血浆且通过夹心ELISA方法检测IFN-γ。现阶段，已经有60%的国家纷纷通过平行试验或系列试验，即：平行试验通过皮试方法展开牛群检查，检查结果呈现阴性的牛再次通过IFN-γ体外释放方法重新检测；若有一项试验为阳性即为感染。系列试验则是通过皮试方法进行牛群检测，呈现阳性的牛群通过IFN-γ体外释放再次检测，两种检测全部为阳性即为阳性。但是要注意二次检测时间间隔应达到10d，降低两次检测对结果的影响。

1.2 皮试法

皮试方法在牛结核病诊疗中一直都是OIE官方推荐的标准方法，其中包含单皮试方法与比较皮试法。参照OIE推荐指标，皮试法内PPD-B与PD-A注射剂量不可低于2000IU。如果采取比较皮试法需要注射两种结核菌素，注射位置应保持一定距离。我国对皮试法的判断标准为：在局部出现炎性反应，皮后差大于4mm即为阳性。炎性反应不显著，2mm<皮厚差<4mm后，疑似反应。无炎性反应，皮厚差<2mm后判断为阳性。尽管判断为疑似反应的牛，在初次检测60d后再次检测，如果仍然为疑似反应，则间隔60d后再次检测若仍然疑似反应，应诊断为阳性。

1.3 抗体检测方法

第一，ELISA抗体检测。该种检测方法也是现阶段牛结核病检测辅助方法，具有操作简便的优势，选择具有高免疫原性的蛋白作为抗原从而提升检测精准度。例如：把MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6蛋白串联作为抗原分析，构建的ELISA抗体检测和细菌培养符合率达到78%。第二，胶体金抗体检测。该种方法是在免疫层析技术的抗体检测，在敏感性与特异性上较低。据调查显示，在数百份细菌培养阳性样本中，胶体金法的阳性检出率在46%，161分细菌培养阴性样本内，胶体金方检测阳性检出率为48%。不过，胶体金法的显著特征是方便、快速，只需10min就能够看出效果，适用于栏圈旁操作。

2 牛结核病防治中检测技术的使用

2.1 抗体法和IFN-γ体外释放法的结合

已经感染结核病的牛群，一些国家会选择把IFN-γ体外释放方法和抗体检验展开平行试验。例如：韩国使用抗体检测展开根除较为成功，牛结核病控制与预防方案有明显的完善。从较早皮试法治抗体检测，以及当前抗体检查的和IFN-γ体外释放的结合利用。首先，通过抗体检测进行牛群检查，对阳性个体展开IFN-γ体外释放方法实验检测，消除阳性个体尽可能地降低错杀率。

2.2 皮试法

爱尔兰通过皮试法进行牛结核病检测，政府有关兽医职能部门与私营单位共同通过单一的比较皮试方法进行牛群检验。阳性牛若出现应立即杀灭，控制其移动；同圈牛展开复查并禁止贸易。定期对牛群展开检测，直到全部牛群在持续2次检测内全部为阴性。

2.3 高敏感度方法使用野生动物结核病检测

据调查显示，我国有三分之一的牛结核病防控和野生动物结核病有着密切联系，例如：南非水牛、梅花鹿、新西兰负鼠，它们都是牛分枝杆菌的宿主携带着结核菌进而也是其重要传染体。各国家对于野生动物结核病检测使用方法不同，例如：澳大利亚使用单一皮试法，增加PPD用量；爱尔兰则使用比较皮试法进行牛结核病检测。并且不同国家有着不同的判断方法。不过，因为野生动流动性强、基数大进行全部检测与免疫是不可能，尽管已经有国家实施野生动物结核病免疫。但是，仍然难以确保野生动物免疫成功。所以，野生动物结核病依然是疫病控制的主要问题。

3 结语

现阶段，国内牛结核病判断是根据结核菌素皮试方法，牛一旦检测为阳性应立即扑杀。不过，由于动物数量庞大，扑杀投入较大，皮试方法特异性低，一些养殖户扑杀后效果不明显。因此，落实具有较大难度。IFN-γ体外释放方法也是当前较为成熟的技术，检测更加精准，降低误杀率，所以推荐使用单皮试法与IFN-γ体外释放方法结合检测。首先通过单皮方法检测，阳性牛再次通过IFN-γ体外释放检测，若全部为阳性应展开扑杀。针对已经暴露牛群则需要使用两种方法平行检测，反应阴性牛使用IFN-γ体外释放检测，若为阴性即为健康牛。反之，应及时隔离。此外，也要定期进行野生动物与屠宰场牛结核病监督管理。

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