猪蓝耳病疫苗概述及免疫效果评估

赵双成，欧伟业

（上海海利生物技术股份有限公司，上海 201403）

1　国内猪蓝耳病现状

猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine Reproductive and Respiration Syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种高度传染性疾病，临床上以母猪发热、厌食、早产、流产、木乃伊胎、死胎、弱仔等繁殖障碍及各种年龄的猪的呼吸困难和仔猪的高死亡率为特征。

从2013年开始，在中国分离到具有与NADC30株相同基因特征的PRRSV变异株，猪群感染后临床表现为高热、咳嗽、厌食、怀孕母猪流产、产死胎等症状，致死率达30%～50%。这些分离株的NSP2上具有与NADC30株一致的非连续缺失，因此归类于NADC-like PRRSV。接着，至少有8个省份有关于NADC-like毒株在猪群中暴发的报道，并且感染发病率逐年提高。有研究发现，NADC-like毒株与当前使用的疫苗株相似性较低，基因序列相似性为84%～87.6%，氨基酸序列相似性为82%～88.6%，因此，对于当前疫苗株是否对NADC-like毒株感染猪群获得有效保护要引起关注，要警惕高致病性重组毒株的出现。

2　国内猪蓝耳病疫苗现状

猪繁殖与呼吸障碍综合征的防控是一个系统过程包括：疫苗免疫、清群/建群、多点饲养和全进全出的饲养方式和生物安全等，疫苗接种是猪繁殖与呼吸障碍综合征的主要预防手段。当前我国猪蓝耳病疫苗主要分为弱毒活疫苗和灭活疫苗两大类。弱毒活疫苗包括经典毒株弱毒活疫苗和高致病性弱毒活疫苗两种。经典株包含CH-1R毒株、VR-2332毒株及R98毒株；高致病性毒株包含JXA1-R毒株、HuN4-F112毒株、TJM-F92毒株及GDr180毒株。灭活疫苗主要包括CH-1a毒株和NVDC-JXA1毒株。由此来看，我国商品化的猪蓝耳病疫苗（获得批文）有9种，其中减毒活疫苗7种，灭活疫苗2种。正是由于猪蓝耳病疫苗种类多样，也给猪场选择猪蓝耳病疫苗造成了困难，突出的问题主要体现在猪场是否要免疫猪蓝耳病疫苗、猪场应该选择经典毒株疫苗还是高致病性毒株疫苗、经典毒株与高致病性毒株之间的交叉保护力如何、高致病性疫苗毒株的安全性如何、猪蓝耳病疫苗使用后如何评估免疫效果等。因此，有些猪场为了找到与自身猪场最符合的疫苗毒株，开始对本猪场内的猪蓝耳病毒株进行测序分析。代洪波等人将NCBI数据库中提交的我国主要疫苗毒株进行了基因序列分析，比较不同疫苗毒株间的差异。研究发现， JXA1-R、HuN4-F112和TJM-F92，这3种变异毒株的彼此全基因同源性均为99.6%，仅存在点突变；CH-1R毒株与变异毒株的全基因同源性在95.2%左右；VR-2332毒株与变异毒株的全基因同源性在89.7%左右。另外，针对变异集中的NSP2和GP5基因进行分析发现，3种变异毒株在NSP2基因和GP5基因上的变异均小于0.5%。3种变异毒株之间的差异难以做有效区分，只能从不同厂家生产工艺和产品品质等方面进行筛选。所以，通过基因测序来寻找最适合自身猪场的猪蓝耳病疫苗毒株是值得商榷的。

3　猪场猪蓝耳病疫苗免疫情况

根据某媒体统计的数据显示，国内猪场免疫猪蓝耳病疫苗的占72%，不免疫猪蓝耳病疫苗的仅占28%，猪场每年免疫2次以上猪蓝耳病疫苗的占67%。免疫程序及免疫方法上也多种多样，母猪免疫方法主要有：每年普免2～3次弱毒苗；产后2周跟胎免疫1次弱毒苗；产后2周跟胎免疫1次弱毒苗，怀孕50～60 d免疫1次灭活疫苗。仔猪免疫方法主要有：2周龄免疫1次弱毒苗；2周及6周各免疫1次弱毒苗；2周龄免疫1次弱毒苗，6周龄再免疫1次灭活疫苗。从2014-2016年的不完全统计数据看，我国猪场猪蓝耳病阳性率基本在99%左右，而猪场猪蓝耳病高阳性率与猪蓝耳病活疫苗的大量不合理使用是分不开的。由于猪蓝耳病活疫苗的普遍使用，猪蓝耳病的复杂程度随着毒株的增多也在加剧，因此国内猪蓝耳病阴性猪场屈指可数。从某种程度上说，猪蓝耳病疫苗的普免，特别是猪蓝耳病活疫苗的普免导致了我国猪蓝耳病病毒株的多样性，这主要包括产生疫苗毒力返强的新毒株、不同疫苗毒之间的重组及疫苗毒与野毒之间的重组等。

4　猪蓝耳病疫苗临床免疫效果评估

4.1 临床评估

如果疫苗免疫后半年到一年内，无论母猪仔猪都没有出现明显的临床症状，表明疫苗的免疫有效，因猪蓝耳病不同毒株毒力差异很大，不同感染猪群可能从无症状到严重临床症状都有可能出现，所以感染猪群不一定出现临床症状，同时猪蓝耳病病毒存在持续性感染和容易变异、重组等特点，通常免疫某种毒株猪蓝耳病疫苗后，稳定1～2年时间后，又出现临床症状，甚至出现严重损失，故这种评估方法需要结合实验室检测进行评估。

4.2 抗体监测

一般在猪蓝耳病疫苗免疫后14 d左右可以检测到猪蓝耳病病毒抗体，但此时的抗体不是中和抗体，与保护率无正相关性。所以目前国内大多数猪场还是采用ELISA检测抗体水平（核衣壳N蛋白）来评估猪蓝耳病疫苗效果的做法，一般通过S/P值来表示，通过抗体阳性率、S/P值大小、离散度来评估猪群蓝耳病感染情况和猪群稳定性，做好猪场预警，但S/P值并不是数值越高越好，主要关注S/P值的离散度情况。有些专家认为，猪场在免疫2年后，S/P值70%是阳性，其他是阴性，保育猪S/P值小于2.0，育肥猪S/P值低于2.5，而且各阶段S/P值有减小的趋势，则意味疫苗免疫效果还行。疫苗质量越好，猪群S/P值越低，则猪群越稳定。但总的来说，抗体检测并不是评估猪蓝耳病疫苗免疫效果的金标准，其只是在临床不发病的情况下评估猪蓝耳病疫苗免疫效果，而实际在临床上猪场猪蓝耳病野毒感染率普遍较高。

有研究表明，GP3、GP4、GP5蛋白和M蛋白在PRRSV结构蛋白中可诱导中和抗体的产生且GP5蛋白具有最高的诱导中和抗体产生的能力。采用通过检测中和抗体水平（GP5蛋白和M蛋白）来评估猪蓝耳病疫苗效果的做法更能反映疫苗免疫效果。首免经典弱毒疫苗与二免高致病性灭活疫苗中和抗体水平优于免疫二次经典弱毒疫苗和显著优于只单独免疫一次经典弱毒疫苗（丁尊俄、周碧君，2017）。

4.3 病原检测

病原检测的方法是猪蓝耳病疫苗免疫后，不同时间段通过收集血液、组织器官、口腔液等样品，利用PCR、实时荧光定量RT-PCR、组织病理学、免疫组织化学、基因序列测定等手段来检测PRRSV核酸，目前最常见公认的办法是采用RT-PCR（实时荧光定量PCR）方法检测血清中载毒量，从而推断猪是否存在病毒感染、载毒量及病毒血症的持续时间。收集母猪流产胎儿组织、胎盘、弱仔组织检测PRRSV核酸，或收集脐带血检测载毒量，用于判断母猪免疫效果。如果样品中检测不到PRRSV或只检测到疫苗毒，则表明疫苗免疫效果较好。通过检测免疫后猪群组织中猪蓝耳病核酸（或血液中载毒量）是目前评估疫苗免疫最可靠办法。

4.4 生产性能评估

在猪蓝耳病疫苗免疫方案实施后，猪场生产指标的评估是一个非常关键的方面。通常可以评估母猪的分娩率、流产率、合格仔率；仔猪的发病率、成活率、死淘率、断奶率、饲料转化率等。

5　小结

PRRS是一种神秘病，而且病毒在不断变异，在当前疫苗效果并不理想的情况下，仍将对猪场的生产效益产生不良影响。中国猪的养殖数量多、密度大，养殖模式多样，建立完善的生物安全体系是防控猪蓝耳病的关键环节；在已经存在猪蓝耳病感染的条件下，检测评估是防控的第二重要环节。无论生产情况怎样，平常的猪蓝耳病血清抗体检测是很有必要的，准确地了解猪蓝耳病的抗体滴度可以让我们掌握猪蓝耳病是否存在及严重程度，了解猪群的免疫状态，从而适时调整免疫策略，以不断降低猪蓝耳病临床感染率并逐步达到净化的目标。