GST-π在上皮性卵巢癌组织中表达及与患者耐药、病理特征的关系

祁彦萍 杨建敏 冯 磊 张 辉

(郑州大学南阳医院 南阳市中心医院妇产科，河南 南阳 473200)

研究显示，上皮性卵巢癌发病率可达(334～556)/10万人〔1，2〕。化疗是临床上治疗上皮性卵巢癌的重要方式，通过静脉使用化疗药物促进肿瘤病灶萎缩、加剧癌细胞病灶凋亡。卵巢癌化疗耐药导致的治疗不良结局成为临床上威胁卵巢癌治疗的重要因素。谷胱甘肽S转移酶(GST)-π等生物学因子通过影响到癌细胞对于肿瘤药物的排泄提高耐药能力，影响化疗效果〔3～5〕。本研究探讨GST-π在不同化疗结局中的异常表达。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2012年3月至2015年1月南阳市中心医院确诊的114例上皮性卵巢癌患者作为研究对象，年龄37～66〔平均(52.7±12.5)〕岁，国际妇产联盟(FIGO)分期：Ⅰ期16例、Ⅱ期28例、Ⅲ期42例、Ⅳ期28例；病理学类型：浆液性卵巢癌71例、黏液性卵巢癌29例、子宫内膜癌8例、透明细胞癌6例；病理学分级：G1级18例、G2级24例、G3级72例。

1.2纳入及排除标准 纳入标准：①患者均经过手术后病理学检查证实；②术前患者未接受放疗、化疗；③患者术后均接受6～8个疗程的铂类药物化疗；④各项资料完整者。排除标准：合并其他部位恶性肿瘤。

1.3化疗方法 紫杉醇(南京碧云天生物科技有限公司，国药准字：H20118493，规格：30 mg/5 ml)联合顺铂(江苏泰康生物医药有限公司，国药准字：H20048543，50 ml/瓶)，用法：化疗第1天将135～175 mg/m2紫杉醇加入500 ml葡萄糖氯化钠溶液中静脉滴注，3 h内滴注完毕，在应用紫杉醇的12 h前，每6小时口服一次地塞米松片(江苏扬子江药业有限公司，批号：Z200374894)，20 mg/次，化疗前30 min内口服苯海拉明(哈尔滨制药二厂，批号；Z20048594)40 mg；化疗第3天将75 mg/m2顺铂注射液加入到100 ml生理盐水中静脉滴注，并注意记录患者24 h的液体出入量，每隔21 d进行一次化疗，连续化疗2个疗程，化疗过程中注意补液、解毒、保肝等对症处理。

1.4免疫组化染色及判断标准 采用石蜡切片脱蜡至水，切片厚度3 mm，3%过氧化氢(H2O2)室温孵育5 min，采用去离子水冲洗3次，每次3 min，采用浓度为10% 牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 ml纯水)封闭，室温孵育5 min，加入GST-π蛋白抗体(鼠来源，南京碧云天生物科技有限公司)，37℃ 孵育2 h，PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min，滴加辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗(兔来源，购自罗氏检测公司)，37℃孵育30 min，PBS冲洗3次，每次5 min，加入硝基蓝四氮唑(NBT)/5-溴-4-氮-3-吲哚磷酸盐(BCIP)色剂显色5 min，复染，脱水，透明，封片，镜下观察。OLIPICS电子显微镜购自上海精密仪器有限公司，配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。

免疫组化结果判定：GST-π蛋白的阳性着色表达于细胞质，呈黄色、棕黄色、褐色表达，①根据着色强度：0分为无色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色、黑色；②根据阳性细胞比例：阳性细胞数目所占比例<10%为1分、11%～50%为2分、51%～75%为3分、>75%为4分，两种积分相乘总分<3分为阴性、≥3分为阳性。

1.5临床疗效评估 根据美国妇科肿瘤学组复发型卵巢癌分型标准：化疗敏感型：对以铂类为主的化疗方案敏感，达到缓解期，停止化疗后6个月后出现肿瘤复发；化疗耐药型：对以铂类为主的化疗方案有反应，停止化疗后6个月内出现肿瘤复发；顽固型：对以铂类为主的化疗方案有反应，但患者体内存在残存病灶；难治性：对以铂类为主的化疗方案无反应。本研究将化疗耐药型、顽固型、难治型归类为耐药组患者。

1.6统计学方法 采用SPSS16.0软件进行χ2检验。

2 结 果

2.1化疗耐药情况与卵巢癌组织中GST-π蛋白表达的关系 化疗敏感型组66例，GST-π蛋白阳性表达率59.09%(39例)，化疗耐药组48例，GST-π蛋白阳性表达率89.58%(43例)，化疗耐药组GST-π蛋白阳性表达率显著高于化疗敏感型组(χ2=12.797,P<0.01)。

2.2卵巢癌组织中GST-π蛋白表达与临床病理学特征的关系 不同临床病理学特征GST-π蛋白阳性表达率分别为：年龄：<50岁36例(43.90%)、≥50岁46例(56.10%)；FIGO分期：Ⅰ～Ⅱ期29例(35.37%)，Ⅲ～Ⅳ期53例(64.63%)；病理学分级：G1～G2级28例(34.15%)，G3级54例(65.85%)；病理学类型：浆液性卵巢癌50例(60.98%)，黏液性卵巢癌23例(28.05%)，子宫内膜癌6例(7.32%)，透明细胞癌3例(3.66%)；大网膜转移：是39例(47.56%)，否43例(52.44%)；淋巴结转移：是56例(68.29%)，否26例(31.71%)；腹水量：<500 ml 45例(54.88%)，≥500 ml 37例(45.12%)。不同年龄、FIGO分期、病理学分级、病理学类型、发生大网膜转移、淋巴结转移、腹水量的GST-π蛋白阳性表达率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。

3 讨 论

卵巢癌的发生主要与自身性遗传易感因素或性激素受体敏感性的改变等有关。卵巢癌容易早期发生淋巴结或远期转移，临床预后不佳。临床上主要采用手术及静脉化疗等综合性的方式治疗卵巢癌，静脉化疗的应用可以显著改善高肿瘤负荷，促进肿瘤病灶萎缩，降低远期肿瘤复发率或转移风险〔6，7〕。研究显示，卵巢癌静脉化疗后的耐药发生率可达25%以上，且化疗时间越长、既往存在化疗病史等，均可以促进耐药的发生〔8〕。静脉化疗耐药的发生，可以导致患者卵巢癌的盆腔内腹膜转移，并增加其对于肝脏、肺部等重要脏器的转移风险，导致临床预后的恶化。

GST-π可以通过对癌细胞膜上ATP依赖性的转移酶的激活作用，促进癌细胞对化疗药物的排泄，降低癌细胞对化疗药物的摄取，并能够在降低化疗药物的半衰期、促进药物代谢等方面发挥作用，降低静脉化疗的作用时间，减轻化疗药物的作用浓度〔9，10〕。GST-π能够在干预ATP酶的主动转运系统等方面发挥作用，促进化疗药物受体变构，导致受体及药物结合程度下降，促进化疗药物分解〔11～13〕。

本研究提示GST-π可能参与卵巢化疗耐药过程，GST-π的高表达可能通过下列几个方面影响卵巢癌的化疗敏感性：①GST-π的高表达，能够促进癌细胞DNA对化疗药物的损伤耐药能力，促进药物流的外向流动；②GST-π的高表达，可以通过对于癌细胞内的囊泡激活作用，促进囊泡对于化疗药物的包含作用，促进化疗药物外流。董莺等〔14〕在探讨不同临床分期的卵巢癌的化疗结局的过程中发现，卵巢癌化疗耐药组患者病灶组织中GST-π等蛋白阳性率可达55%以上，且患者耐药程度越高、化疗周期越长，GST-π等蛋白的阳性表达率越高。免疫组化分析可见，GST-π的表达主要位于卵巢癌细胞的周边或细胞间质成分中，提示GST-π可能通过影响癌细胞的细胞内外的相关药物代谢、药物受体敏感性等方面，发挥综合性耐药作用。临床病理特征可以发现，病理学分级、病理学类型、发生大网膜转移、淋巴结转移等不同临床病理特征的患者中，GST-π蛋白的高表达并不会影响到卵巢癌患者临床病理特征的变化，这与李少星等〔13〕结论存在一定差别，有研究〔14〕认为发生了淋巴结转移或者卵巢浆液腺腺癌患者组织中GST-π蛋白的阳性表达水平可能更高，考虑可能与化疗方案的不同、化疗敏感性的判断标准的不统一等原因有关。后续临床研究可以通过阻断GST-π蛋白受体，进而评估GST-π蛋白影响卵巢癌化疗的具体机制。