AD7c-NTP在临床科室中检测的意义

刘 彬 计 畅 朱杨帆 杨秋萍 毕鸿艳 刘舒文 任 惠※

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。AD的直接致病因素是大脑内β类淀粉样蛋白(Aβ42)的大量沉积构成老年斑和神经纤维缠结，从而使患者认知功能下降〔1〕。目前AD的诊断主要依据患者临床表现、头颅CT或MRI等影像学资料、神经心理检查量表等综合评价,临床诊断率低。因此寻找高敏感度、特异度、无创的生物学指标以提高AD早期诊断率，为早期生活方式干预、药物干预及延缓病程提供帮助。当前用于AD诊断的特异性生物学指标有Aβ42含量、tau蛋白总量和磷酸化tau蛋白等，但是这些生物学指标需要通过腰穿取脑脊液获得，有创伤性，不易被患者接受，而且上述检测未能广泛普及到普通医院，开展上述检查工作受限。1992年，麻省总医院的Suzanne de la Monte等人在AD脑中发现大量与神经元纤维缠结有关的神经丝蛋白(neural thread protein，NTP)[2]。1997年，De la Monte团队成功分离出AD7c的cDNA，命名为AD7c-NTP。尿AD7c-NTP可特异性反映大脑神经损伤，与Tau蛋白具有同等效力。AD7c-NTP特异性分布大脑额叶、颞叶，只反映大脑神经元损伤；AD7c-NTP为神经元轴突跨膜蛋白，与Tau蛋白共同定位；尿AD7c-NTP蛋白特异性反映脑神经元损伤[3]，所以临床开展尿AD7c-NTP检测可以协助AD患者的早期发现及诊治。

1.资料与方法

1.1 研究对象 2016年4～9月对在昆明医科大学第一附属医院就诊和体检的几个相关科室患者进行筛查，AD7c-NTP的含量检测阳性者，完善以下检测：①进行病史采集、全身及专科体格检查；②头颅CT或MRI显示有脑萎缩，排除脑血管病引起的痴呆；③简易精神神经量表评定(MMSE)、Hachinski缺血指数(HIS)、日常生活能力量表(ADL)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)≤7；④甲状腺功能正常、梅毒抗体阴性；⑤血尿常规、肝肾功能、血脂、心电图、血压正常，血糖检测。

1.2 评定标准 AD符合美国美国国立神经病语言障碍脑卒中研究所和AD病及相关疾病协会(NINCDS-ADRDA)的很可能AD诊断标准〔4〕，MMSE:文盲≤17分，小学≤20分，中学及以上≤26分；HIS≤4分，HAMD≤8分。轻度的AD:MMSE≥19分且≤26分；中重度的AD:MMSE<19分；MCI(轻度认知功能障碍)符合美国Mayo神经病学研究中心的Petersen诊断标准，MMSE:文盲≤18～27分，小学≤21～27分，中学及以上≤25～27分；HIS≤4分，HAMD≤8分。正常对照组为年龄性格匹配智能检查正常的老年人，无严重躯体疾病及精神障碍，MMSE≥26分且≤30分，HIS≤4分，ADL=20分。

1.3 AD7c-NTP测定 采用深圳市安群生物工程有限公司提供的AD7c-NTP检测试剂盒。留取被检测者中段晨尿，选取经尿常规检测合格的清亮标本，经过离心、过滤，取上清液2ml作为待测试液即样本，采用改良的ELISA双抗体夹心法，将样本加入试剂盒中，存在于样本中的AD7c-NTP与板上包被的抗体结合，通过洗板，将未结合的游离成分洗去；加入AD7c-NTP的多抗，温育后洗涤，再加入辣根过氧化物酶标记的酶结合物，最终形成抗体/抗原/抗体/酶标二抗的复合物，加入显色剂显色，15分钟后终止反应，在450nm处测OD.值，根据已知浓度的校准品绘制出标准曲线，最终算出样本的AD7c-NTP含量，正常参考值≤1.5ng/ml。

2.结果

2016年4～9月共进行尿AD7c-NTP检测1689例，男性866例，女性823例，总阳性病例共136例，总阳性率8%。对136例阳性者，我们对其作了MMSE量表评估，MCI 72例，AD轻度29例，AD中重度35例。其余数据统计分析如表1～表6所示。

表1 不同性别阳性率分布

表2 年龄分布

表3 科室分布

表4 MMSE年龄分布MCI

表5 MMSE年龄分布AD轻度

表6 MMSE年龄分布AD中重度

3.讨论

AD已经被大家逐渐认识到，尤其是近几年，随着经济的发展，老年人群健康保健工作不断完善，人类平均寿命增加，许多国家进入老龄化社会，AD问题越来越受到重视。开展AD的早期筛查工作，及早诊断并给予相应干预治疗，会延缓AD的进展，从而减轻家庭及国家的经济负担。在我国，目前各地医院相继开展记忆门诊，国家也通过电视、报刊、广播等媒体手段向大众宣教老年痴呆的相关知识，自主认识到此类疾病并且主动就医的人数却不多，早期症状出现时未能引起重视，甚至误认为是自然衰老现象，丧失了早期干预治疗的时机，往往到了中晚期才开始干预，只能完全由家庭照护了。

从上述5个月在我院几个科室就诊或体检中心随机检测的人群AD筛查中可以看到，50～70岁间AD7c-NTP阳性的，

主要为MCI人群；而随着年龄增长，70～80岁主要为AD轻度，AD中重度患者多在80岁以上，而50岁以前也有少数人检测到AD7c-NTP阳性。AD7c-NTP阳性人群中绝大部分没有因为记忆下降或性格改变等异常症状到专科就诊过。

AD是一个进展性疾病，而AD7c-NTP是神经元损伤标志物，反映大脑神经元损伤的速度。文献表明AD7c-NTP的免疫反应性在早期神经炎性斑块中可以检测到，证明异常AD7c-NTP表达是AD的早期事件[5],在疾病的早期检测浓度可能更高更灵敏。MCI期患者由于大脑神经元开始大范围凋亡分泌出AD7c-NTP蛋白，故根据不同受检者的疾病发展速度可检测到不同浓度水平的表达。国内临床实践表明MCI患者尿液AD7c-NTP水平显著高于健康组，结论显示：尿液AD7c-NTP或是MCI早期诊断的重要生物标志物[6]。此外，早期AD7c-NTP浓度高低对疾病发展与预后有很好的提示作用。收集MCI患者尿液检测AD7c-NTP浓度，随后进行随访研究2年，结果表明：转化为AD的MCI组尿液AD7c-NTP水平显著高于稳定期MCI组，显示尿AD7c-NTP对疾病转归与预后具有一定的预测效力[7]。

另外一篇文献研究中也显示：AD7c-NTP的免疫反应性在早期神经炎性斑块中可以检测到，而在成熟斑块中却没有发现[5]，证明异常AD7c-NTP表达是AD的早期事件。因为随着疾病发展到重度时期，神经元发生变性和凋亡，而AD7c-NTP这样的神经丝蛋白也会随着被溶解和吸收。有文献研究证明：在凋亡的神经元中，未发现AD7c-NTP抗体免疫反应[5]。

在科室检测阳性人群中，我们发现内分泌科阳性者合并有2型糖尿病，已经有大批研究证据表明，胰岛素是一种信号肽，参与脑内神经递质的释放调节，影响认知、记忆等高级大脑功能，而AD的主要临床表现也是记忆、认知功能障碍[8]；目前生物学研究已经揭示胰岛素对分子和细胞作用失常，也是AD的病理基础[9]。糖尿病与AD有相关性，而降糖药物的应用对AD的防治提供了新思路。

以往，我们是等着患者主动来就诊才明确AD或MCI诊断，现在可以将简单易行的AD7c-NTP检测带到临床中、中老年人群体检中，这样可以发现许多MCI或AD早期患者，给予早期行为及药物的干预治疗，延缓病程进展，减轻社会及家庭负担。

1 张勤安，高晓群.阿尔茨海默病发病机制研究进展〔J〕.医学研究杂志，2012,41(2):7-10.

2 DE LA MONTE SM，WANDS JR.Neuronal thread protein over-expression in brains with Alzheimer’s disease lesions[J].J Neurol Sci，1992，113(2)： 152-164.

3 De la Monte SM，Wands JR.Ghanbari Characterization of the AD7c NTP cDNA expression in Alzheimer’s disease and measurement of a 41-kD protein in cerebrospinal fluid[J].J Clin Invest,1997,100(12):3093-1041.

4 Dubois B,Feldman HH,Jacova C,et al.Rescarch criteria for the diagnosis of Alzheimer’s disease:resvising the NINCDS-ADRDA criteria[J].Lancet Neurol,2007,6(8):734-746.

5 DE LA MONTE SM，CARLSON RI，BROWN NV，et al.Profiles of neuronal thread protein expression in Alzheimer’s disease[J].J Neuropathol Exp Neurol，1996，55(10)： 1038-1050.DOI：10.1097/00005072-199655100-00004.

6 MA L，CHEN J，WANG R，et al.The level of Alzheimer-associated neuronal thread protein in urine may be an important biomarker of mild cognitive impairment[J].J Clin Neurosci，2015，22(4)： 649-652.DOI：10.1016/j.jocn.2014.10.011.

7 WICKELGREN I.Tracking insulin to the mind[J].Science，1998，280(5363)： 517-519.DOI：10.1126/science.280.5363.517.

8 DE LA MONTE SM，CARLSON RI，BROWN NV，et al.Profiles of neuronal thread protein expression in Alzheimer’s disease[J].J Neuropathol Exp Neurol，1996，55(10)： 1038-1050.DOI：10.1097/00005072-199655100-00004.

9 LESTER-COLL N，RIVERA EJ，SOSCIA SJ，et al.Intracerebral streptozotocin model of type 3 diabetes： relevance to sporadic Alzheimer’s disease[J].J Alzheimers Dis，2006，9(1)： 13-33.DOI：10.3233/jad-2006-9102.