常用的基因修饰大小鼠有哪几大类，构建的方法如何？

答：常用的基因修饰大小鼠可以分为以下5大类，构建的方法如下：

(1)全身敲除大小鼠：目前主要采用基因编辑工具(如TALENs、CRISPR/Cas9)造成基因移码突变，或删除一段DNA片段来实现全身敲除基因大小鼠。

(2)条件性敲除大小鼠：通常利用基因条件性表达体系(如Cre/loxP)来实现，具体需要两种小鼠进行交配：a. 带有两个loxP位点的小鼠；b. 组织特异性表达Cre的小鼠。两种小鼠交配后繁育的子代中可实现在特定组织或器官中基因敲除。

(3)点突变敲除大小鼠：利用基因编辑工具，如CRISPR/Cas9造成DNA双链断裂，引入含有点突变的dsDNA和ssDNA，进而通过同源重组，实现基因的定点突变。

(4)转基因大小鼠：通常采用DNA原核显微注射将外源DNA插入到大小鼠的基因组中实现转基因大小鼠构建。

(5)基因定点敲入大小鼠：将外源基因定点插入到ROSA26或Hipp11位点，实现外源基因稳定表达。或在基因特定位点，如内源基因启动子后敲入外源目的基因实现基因定点敲入。