外周血细胞黏附分子CD11c、CD18的表达与急性缺血性脑卒中预后的相关性分析

李陈辰

【摘 要】目的：探索外周血细胞黏附分子CD11c、CD18的表达在急性缺血性脑卒中（AIS）中的变化及其相关性。方法：采用回顾性分析方法，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例（病例组），出院后随访90d，根据改良Rankin评分（mRS）分为预后良好组（mRS≤2分）和预后不良组（mRS≥3）。另选取同期招募的健康体检者120例（健康对照组）。对不同分组受检者的外周血中性粒细胞（PMN）和单核细胞（MNL）表面的CD11c、CD18进行测定，随后对比各组受检者各项数值的差异和相关性。结果：病例组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量显著高于健康对照组（P<0.05）。病例组入院第1、3、7、14天各时间段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表达量均显著高于健康对照组（P<0.05）。病例组PMN表面CD11c、CD18的表达量第1～3天逐渐升高，第3天达到高峰，第7天逐渐下降，但第14天仍高于健康对照组（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表达量第1～7天逐渐升高，第7天达到高峰，第14天逐渐下降，但仍高于健康对照组（P<0.05）。预后不良组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量高于预后良好组（P<0.05）。MRS评分与MNL和PMN表面CD18表达量呈正相关性（P<0.05）；且与MNL和PMN表面CD11c表达量也呈正相关性（P<0.05）。结论：MNL和PMN表面CD11c、CD18表达量与AIS预后密切相关，是AIS患者潜在的预后评估标记物。

【关键词】中性粒细胞；单核细胞；急性缺血性脑卒中；预后；相关性

【中图分类号】R565.9 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0019（2018）20--01

急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke，AIS）是一種常见的脑卒中类型，具有患病率高、复发率高、致残和致死率高等“四高”的特点，占所有类型脑卒中的69.6%-70.8%，不仅严重损害了患者的生活质量和生命健康，同时也给患者家庭、国家和社会带来巨大经济负担。近年来，随着研究的深入，可发现大部分AIS患者在病情发生、发展中，可出现炎症反应，且在受到外界刺激后，可释放受损脑组织内氧自由基、趋化因子、细胞因子，此项细胞激活，可诱导外周白细胞粘附分子表达和内皮细胞表达，激活胶质细胞，促进外周白细胞对缺血脑组织的浸润，从而进一步释放氧自由基和细胞因子，导致脑组织凋亡、坏死，加重血脑屏障破坏，影响预后[1]。既往研究显示，外周血中性粒细胞（polymorphonuclear，PMN）和单核细胞（mononuclear leukocyte，MNL）表面的CD11c、CD18在AIS的发生和发展中起到重要作用[2]。为了尽早发现患者病情变化，还需加强临床外周血细胞炎症标记物的检测，从而为治疗方案拟定提供科学依据。因此，本研究采用回顾性分析方法，对120例AIS患者实施外周血PMN和MNL表面的CD11c、CD18进行检测，探讨CD11c和CD18的表达量在AIS患者中的变化及其相关性。

1 对象与方法

1.1 对象

本研究经医院伦理委员会批准，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例（病例组），其中，男71例，女49例；年龄42～76岁，平均（62.18±3.69）岁。入选标准：（1）年龄18-80周岁，性别不限；（2）均符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》的诊断标准[3]，且经颅脑MRI或CT确诊。（3）临床首次发病，且发病后72h内入院；（4）均无严重抵触情绪或精神家族史现象；（5）无沟通障碍或语言表达障碍；（6）无慢性感染病史；（7）患者或家属签署知情同意书。排除标准：（1）既往卒中或此次合并脑出血的患者；（2）妊娠期或哺乳期妇女；（3）有严重的心、肺、肝、肾及肿瘤性疾病；（4）存在自身免疫性疾病；（5）依从性差、不能按研究方案完成随访者；（6）正在参加其他临床试验。另选取同期招募的健康体检者120例（健康对照组），其中，男68例，女52例；年龄41～77岁，平均（62.56±3.28）岁。两组受检者在性别和年龄方面比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 检测项目 藻红蛋白（PE）标记MNL表面CD18的平均荧光强度（MFI）；异硫氰酸荧光素（FITC）标记MNL表面CD11c的MFI；PE标记PMN表面CD11c的MFI；PE标记PMN表面CD18的MFI。

1.2.2 检测方法 健康对照组在体检当天，病例组在入院第1、3、7、14天，抽取受检者空腹静脉血5ml，首先将其置入抗凝剂的试管中混均，内含有乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝剂，首先将其分别放入含有20ul FITC标记的PE标记、CD11c单抗标记的FITC、PE标记的阴性对照单抗试管以及全血100ul内，混匀，随后将其放置在常温避光条件下待检，孵育30分钟后，加入2ml专用溶血素，且按照1：10的比例稀释，除去红细胞，对其进行血清分离处理，离心5分钟，保持1000r速度，将上清液丢去，再加入1ml的PBS缓冲液，进行离心处理五分钟，维持1000r速度，连续进行2次，将上清液丢去后，再加入PBS 0.5ml悬浮细胞，调整白细胞数为1×106个待检。最后标记好PE标记的阴性对照单抗、FITC标记、PR标记的CD18单抗、PITC标记的CD11c单抗，所有试剂均由美国Caltag公司提供。

1.3 预后评估标准及随访

通过门诊复诊、信件以及电话方式进行随访。随访时间截止至2018年9月。随访90天时采用改良Rankin量表（mRS）评估病例组预后情况[4]：mRS≤2分为预后良好组（100例）；mRS≥3为预后不良组（20例）。

1.4 统计学处理

采用SPSS22.0统计软件进行数据处理与分析。MNL和PMN表面CD11c、CD18等计量资料以均数±标准差（ ）表示，采用t检验；相关性分析采用Pearson直线相关分析法。以P≤0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 2组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量比较

病例组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量显著高于健康对照组（P<0.05）。见表1。

2.2 2组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量比较

病例组入院第1、3、7、14天各时间段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表达量均显著高于健康对照组（P<0.05）。病例组PMN表面CD11c、CD18的表达量第1～3天逐渐升高，第3天达到高峰，第7天逐渐下降，但第14天仍高于健康对照组（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表达量第1～7天逐渐升高，第7天达到高峰，第14天逐渐下降，但仍高于健康对照组（P<0.05）。见表2。

2.3 不同预后程度AIS患者MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量比较

预后不良组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量高于预后良好组（P<0.05）。如表3所示：

2.4 相关性分析 相关性分析显示：MNL和PMN表面CD11c表达量与MRS评分呈线性正相关（r=0.5369，P<0.05；r=0.1785，P<0.05）；而MNL和PMN表面CD18表达量与MRS评分亦呈线性正相关（r=0.1235，P<0.05；r=0.2365，P<0.05）。

3 讨论

AIS早期的主要特征为脑组织血流突然性减少，若长时间处于缺血状态，可导致脑组织所需的氧供中断和葡萄糖中断，引起神经功能缺损，一旦治疗不及时，还可危及生命安全，具有较高的病死率和致残率[5]。由于AIS患者在发病期间可激活胶质细胞，引起外周血白细胞粘附分子表达，激活氧自由基，释放细胞因子，炎症指标可出现明显变化，对此还需加强外周血细胞炎症标记物的检测，从而对疾病起到预防作用[6]。

CDllc、CDl8在AIS发生中参与了血管内皮损伤、细胞黏附和炎症反应过程。当脑组织缺血时，可出现穿越血管内皮细胞浸润和白细胞粘附现象，进而增加趋化因子mR-NA、细胞因子mRNA、粘附分子的分泌[7]。而细胞粘附分子根据功能和基因结构的不同，可分为钙黏蛋白家族、选择素家族、免疫球蛋白超家族、整合素家族，以上共同点在于属于整膜蛋白，是细胞膜分子。其中整合素的功能时细胞外基质和细胞粘附分子的相结合，可增强细胞间粘附，而整合素家族又称之为膜受体糖蛋白家族，属于一组糖蛋白反应指标[8]。而MNL和PMN与血管内皮细胞黏附增强，可促使大量活化的PMN粘附于缺血区微血管内皮细胞内，对血管内皮细胞具有较强的粘附性，可促使微血管出现阻塞，在缺血组织灌注中起到“无复流”、“低灌注”等作用，可加重脑组织缺血缺氧状态[9]。其中MNL可分化为小神经胶质细胞，可穿过血管内皮细胞，游离至缺血区域，进而吞噬幸存神经元。而PMN能够释放胶质细胞，从而加重神经组织损伤，释放神经毒性物质（包括蛋白水解酶、一氧化氮、兴奋性氨基酸、氧自由基、细胞因子）。

本研究结果显示，病例组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量显著高于健康对照组（P<0.05）。病例组入院第1、3、7、14天各时间段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表达量均显著高于健康对照组（P<0.05）。病例组PMN表面CD11c、CD18的表达量第1～3天逐渐升高，第3天达到高峰，第7天逐渐下降，但第14天仍高于健康对照组（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表达量第1～7天逐渐升高，第7天达到高峰，第14天逐渐下降，但仍高于健康对照组（P<0.05）。此外，我们研究发现，预后不良组MNL和PMN表面CD11c、CD18的表达量高于预后良好组（P<0.05）。MRS评分与MNL和PMN表面CD18表达量呈正相关性（P<0.05）；且与MNL和PMN表面CD11c表达量也呈正相关性（P<0.05）。由此说明，MNL和PMN在AIS中具有一定的数值改变，主要是因为MNL和PMN可破坏血脑屏障，造成基底膜损伤和血管内皮细胞损伤，加重脑缺血缺氧症状，促进脑水肿形成，且加速细胞因子、细胞粘附分子、白细胞等炎症介质的释放，进而形成恶性循环[10]。因此在面对AIS患者，还需加强外周血细胞炎症标记物的检测，从而为治疗方案拟定提供依据。

总而言之，外周血细胞炎症标记物具有操作简单、所需标本量少等特点，用于AIS人群中，可发挥较高的临床应用价值。

参考文献

张洁.CD11c分子及其在抗肿瘤免疫中作用的研究进展[J].中国免疫学杂志，2015，31（8）：1138-1142.

赵薛旭，夏文伟，李作汉，等.急性缺血性脑卒中患者外周血白细胞CD11c/CD18表达的变化[J].卒中与神经疾病，2007，14（4）：232-234.

中華医学会神经病学分会，中华医学会神经病学分会脑血管病学组.中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018[J].中华神经科杂志，2018，51（9）：666-682.

Huybrechts K F，Caro J J，Xenakis J J，et al.The prognostic value of the modified Rankin Scale score for long-term survival after first-ever stroke.Results from the Athens Stroke Registry[J].Cerebrovasc Dis，2008，26（4）：381-387.

王安荔，陈智才，史飞娜，等.急性缺血性卒中血管内治疗：时间就是大脑[J].中国卒中杂志，2018，13（2）：160-166.

Uotila LM，Aatonen M，Gahmberg CG.Integrin CD11c/CD18 ?±-chain phosphorylation is functionally important[J].J Biol Chem，2013，288（46）：33494-33499.

夏文伟，赵薛旭，李作汉.急性缺血性卒中患者外周血中性粒细胞和单核细胞CD11c、CD18的表达[J].中华神经科杂志，2005，38（11）：709-710.

肖漓，白剑，何秀云，等.巨细胞病毒感染的肾移植受者中性粒细胞表面黏附分子的表达及意义[J].中华医学杂志，2016，96（20）：1562-1565.

夏文伟，赵薛旭，李作汉.整合数CD11c/CD18在急性缺血性卒中患者外周血白细胞表达及意义[J].南京医科大学学报（自然科学版），2005，25（11）：830-832.

毛景东，刘金华，丁宁，等.CD11b/CD18对中性粒细胞功能的调控研究进展[J].动物医学进展，2014，35（1）：106-110.