丹红注射液加臭氧对大鼠坐骨神经损伤的修复作用观察

董云鹏 吕朝晖 李伟举

摘要：目的 活血中药丹红注射液加医用臭氧对大鼠坐骨神经卡压损伤后的修复作用。方法 是将50只SD大鼠，雌雄各半，在每组雌雄数目相等的条件下，随机将其分为4组，其中Ⅰ组作为模型对照组；Ⅱ组为中药组，Ⅲ组为臭氧组，Ⅳ组为中药+臭氧组。用Bennett方法制作坐骨神经卡压的大鼠模型，术后第7 d用注射器抽取40 μg/mL臭氧2mL注射至Ⅲ、Ⅳ组大鼠损伤坐骨神经处，用注射器抽取丹红注射液0.5 mL注射至Ⅱ、Ⅳ组大鼠损伤坐骨神经处。用药14 d后，测量大鼠足迹，计算坐骨神经指数（SFI）。作坐骨神经电生理检测，观察电针治疗对大鼠坐骨神经损伤修复的作用机制。结果 术后第7 d，各组大鼠伤肢展爪反射消失，出现踝下垂，趾并拢不能分开，行走呈跛行步态，手术后肢拖地行走，说明造模成功。中药组、臭氧组、中药+臭氧组SFI值明显高于模型对照组（P<0.01）；中药+臭氧组SFI值明显高于中药组、臭氧组（P<0.01）；中药组、臭氧组、中药+臭氧组NCV值明显高于模型对照组（P<0.01）；中药+臭氧组NCV值明显高于中药组、臭氧组（P<0.01）。结论 活血中药丹红注射液加医用臭氧能促进大鼠坐骨神经损伤后的功能修复，值得临床推广应用。

关键词：丹红注射液；坐骨神经；神经损伤；臭氧

中图分类号：R745.4 文献标志码：B 文章编号：1007-2349（2018）10-0059-03

【Abstract】Objective：To observe the effect of Danhong injection plus medical ozone on the repair of rat sciatic nerve after compression injury. with activating blood. Methods：50 SD rats，half and half male and female，were randomly divided into 4 groups according to the equal number of males and females in each group. Group I was used as model control group，group II was Chinese medicine group，group III was ozone group，and group IV was Chinese medicine + ozone group. The rat model of sciatic nerve compression was made by Bennett method. On the 7th day after operation，40 mL of 40μg/mL ozone was injected into the injured sciatic nerve of rats in group III and IV，and 0.5 mL of Danhong injection injected into the injured sciatic nerve of rats in group II and IV. After 14-day treatment，the rat footprint was measured and the sciatic nerve index（SFI） was calculated. The electrophysiological test of sciatic nerve was performed to observe the mechanism of electroacupuncture treatment on the repair of sciatic nerve injury in rats. Results：On the 7th day after surgery，the reflexes of the injured limbs disappeared in each group. The ankles were drooping and the toes could not be separated. The walking was in a gait，and the hind limbs were dragged to the ground，indicating successful modeling. The SFI value of Chinese medicine group，ozone group and traditional Chinese medicine + ozone group was significantly higher than that of model control group（P

【Key words】Danhong injection，sciatic nerve，nerve injury，ozone

腰椎間盘突出症是临床常见疾病，常因椎间盘突出压迫神经，导致神经损伤，而出现腰部疼痛，伴下肢放射痛、麻木等症状，甚至出现下肢乏力，肌力减退，严重影响患者生活治疗[1]。目前对于压迫性神经损伤的治疗缺乏规范有效的治疗。研究证实活血中药能改善神经鞘膜血液循环，促进神经修复的作用[2]。随着国内外臭氧治疗的兴起，臭氧的治疗领域也逐渐拓宽，广泛应用于各种疼痛的疗法坐骨神经痛[3]。本研究的目的是将活血中药丹红注射液加医用臭氧注射到坐骨神经卡压后的大鼠的坐骨神经周围，观察丹红注射液加医用臭氧对造模大鼠的坐骨神经损伤的修复作用。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 6月龄SD系SPF级大鼠48只，雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（粤）2013-0002.在每组雌雄数目相等的条件下，随机将其分为4组，其中Ⅰ组作为模型对照组；Ⅱ组为中药组，Ⅲ组为臭氧组，Ⅳ组为中药+臭氧组。

1.2 实验模型的制备 全部大鼠以300 mg/100 g剂量腹腔注射水合氯醛麻醉，麻醉成功后取侧卧位。常规消毒铺巾，于左后肢大腿中部顿性分离股二头肌，暴露坐骨神经干，用4.0铬肠线环绕坐骨神经结扎，造成坐骨神经外膜轻度缩窄但不中断神经外膜表面血流以切口周围肌肉产生一个小的短暂性的抽搐为度[4]。

1.3 给药 在建模术后7 d（术后第7 d），用注射器抽取40 μg/mL臭氧2 mL注射至Ⅲ、Ⅳ组大鼠损伤坐骨神经处，用注射器抽取丹红注射液0.5 mL注射至Ⅱ、Ⅳ组大鼠损伤坐骨神经处，用药共14 d。

1.4 观察指标

1.4.1 坐骨神经指数（SFI） 自制一长60 cm、宽10 cm、高10 cm的两端开口木槽，将70 g白纸裁成与木槽等长等宽后铺于槽底。大鼠双后肢用颜料浸于双踝关节着色后，将大鼠放于槽的一端，使其自行向槽的另一方行走，每侧后肢各留下5～6个足印。选择印迹清晰的足印分别测量正常足（N）和伤侧足（E）的3个指标：A、PL（足印长度）；B、TS（足趾宽度）；C、IT（中间足趾宽度）。将上述指数代入Bain公式，计算出坐骨神经功能指数。Bain公式：SFI=109.5（ETS-NTS）/NTS-38.3（EPL-NPL）/NPL+13.3（EIT-NIT）/NIT-8.8。坐骨神经功能指数SFI=0为正常，-100为完全损伤。

1.4.2 作坐骨神经电生理检测 采用近神经刺激法记录大鼠坐骨神经的神经传导速度（NCV），显露大鼠坐骨神经及小腿三头肌，将刺激电极、记录电极分别钩在坐骨神经钳央近端和远端，采用8通道Keypoint-2刑肌电图仪检测坐骨神经NCV。

1.5 统计学方法 数据以均数±标准差（x±s）表示，2组均数比较采用t检验，多组间差异显著性检验用方差分析，组间两两比较用Q检验。

2 结果

2.1 术后第7 d，各组大鼠伤肢展爪反射消失，出现踝下垂，趾并拢不能分开，行走呈跛行步态，手术后肢拖地行走，说明造模成功。

2.2 用药后14 d，各组大鼠坐骨神经指数（SFI）的比较 见表1。

4组SFI均数经方差分析，F=57.55，P=0.00，故可认为4组SFI值均数不相等。4组样本均数两两比较的q检验中，中药组、臭氧组、中药+臭氧组SFI值明显高于模型对照組（P0.05）；中药+臭氧组SFI值明显高于中药组（P<0.01）；中药+臭氧组SFI值明显高于臭氧组（P<0.01）。

2.3 用药后14 d，各组大鼠坐骨神经NCV比较 见表2。

4组SFI均数经方差分析，F=67.32，P=0.00，故可认为四组NCV值均数不相等。4组样本均数两两比较的q检验中，中药组、臭氧组、中药+臭氧组NCV值明显高于模型对照组（P0.05）；中药+臭氧组NCV值明显高于中药组（P<0.01）；中药+臭氧组NCV值明显高于臭氧组（P<0.01）。

3 讨论

坐骨神经痛主要由L4-L5神经及S1-S3神经组成，主要支配下肢运动及感觉。临床上坐骨神经损伤常由于腰椎间盘突出症及梨状肌综合征引起，其病理特点是坐骨神经受压，神经鞘膜缺血、炎症水肿，导致神经传导异常，从而引起下肢感觉、运动异常。坐骨神经损伤常属于机械性神经损伤，根据Sedden分类法按损伤程度不同分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度，Ⅰ度为神经失用，II度为轴突离断伤，Ⅲ度为神经离断伤。本实验大鼠模型通过用4.0铬肠线环绕坐骨神经结扎，造成坐骨神经外膜轻度缩窄但不中断神经外膜表面血流以切口周围肌肉产生一个小的短暂性的抽搐为度。所造成的坐骨神经损伤属于Ⅱ度损伤，其轴突及髓鞘损伤而神经内膜保持完整，其修复过程与周围神经损伤修复过程一致。研究证实，坐骨神经受压后，神经鞘膜缺血坏死，周围组织产生炎症水肿，周围巨噬细胞聚集，清除神经鞘膜坏死组织，并分泌相关细胞因子，促进神经组织的修复与再生。

坐骨神经损伤常引起下肢麻木、疼痛，活动不利等症状，属于中医的痹证范畴。经络受损，经气不通，肢体失养是其病理改变。治疗上常采用益气活血、行气通脉为法，疗效显著。补阳还五汤是临床上常用于治疗神经损伤的方剂，大量研究证实补阳还五汤能改善损伤神经鞘膜的血液循环，促进神经修复因子的分泌，能有效地治疗神经损伤的相关疾病[5]。同时，活血类中药也广泛用于临床治疗周围神经损伤，如三七、丹参、红花等。活血类中药能改善神经组织的血液循环，促进炎症因子的吸收，并促进巨噬细胞吞噬坏死组织，增强雪旺细胞修复功能，能有效地促进神经修复。丹红注射液主要由丹参、红花提取物组成，具有较好的活血通脉的功能，临床上常用于治疗各种经脉痹阻的疾病。但目前缺乏丹红针对神经损伤的修复作用的相关研究。

随着国内外臭氧治疗的兴起，臭氧的治疗领域也逐渐拓宽，除了研究较为深入的臭氧自血疗法、经皮椎间盘突出症的治疗外，臭氧还被广泛应用于各种经痛的治疗，这些治疗都取得了一定的效果。1988年，意大利医生Verga首先将臭氧注入腰大肌及椎旁间隙治疗腰腿痛；1990年，Muto等[6，7]将臭氧注入椎间盘及椎旁间隙治疗腰椎盘突出，并于1998年报道93例，有效率为78%；Alexandre[8]总结从1994年至2000年6665例腰椎间盘突出症臭氧治疗研究结果，手术优良率达80.9%。俞志坚[9]对28例梨状肌综合征患者，行梨状肌压痛点局部注射浓度40μg/mL的医用臭氧10mL。21例患者术后症状和体征消失，4例患者仅有臀部轻度疼痛，不影响工作和生活，3例治疗无效。所有病例在医用臭氧注射过程中及术后均为发现不良反应及并发症。臭氧能激活抗氧化酶和清除自由基作用，在生理和病理过程中过多的自由基和过氧化物。臭氧代谢后在局部直接改变神经末梢组织缺氧状况，浸润注射臭氧过程，能使病变组织粘连与挛缩得到松解和疏导[10、11]。

本实验通过Bennett方法制作坐骨神经卡压的大鼠模型，术后第7天用丹红注射液联合臭氧治疗，结果显示中药组、臭氧组、中药+臭氧组SFI值明显高于模型对照组（P0.05）；中藥+臭氧组SFI值明显高于中药组（P<0.01）；中药+臭氧组SFI值明显高于臭氧组（P<0.01）。中药组、臭氧组、中药+臭氧组NCV值明显高于模型对照组（P0.05）；中药+臭氧组NCV值明显高于中药组（P<0.01）；中药+臭氧组NCV值明显高于臭氧组（P<0.01）。由此可见活血中药丹红注射液加医用臭氧能促进大鼠坐骨神经损伤后的功能修复，值得临床推广应用。

参考文献：

[1]陈新用，王振飞，梁裕.腰椎间盘突出症非手术治疗效果系统评价综述[J].中国循证医学杂志，2012，12（7）：861-866.

[2]李沫.预防大鼠坐骨神经修复中瘢痕粘连及促进神经再生的作用研究[D].第四军医大学，2012.

[3]王喜连，旷昕，赵铭，等.臭氧化生理盐水对慢性坐骨神经结扎损伤大鼠脊髓TNF-α和IL-1β表达的影响[J].现代医药卫生，2015，31（21）：3217-3219.

[4]倪峰，李坚.大鼠坐骨神经疼痛动物模型的建立[J].临床合理用药杂志，2012，5（30）：57.

[5]孙宣，马勇.补阳还五汤治疗周围神经损伤的研究进展[J].中国中医骨伤科杂志，2011，19（6）：64-66.

[6]Muto M，Avella F.Percutaneous treatment of herniated lumbar disc by intradisecal oxygen-ozone in jection[J].Interventional Neuroradiology，1998，4（2）：273-286.

[7]Leonardi M，Simonetti L，Barbara C.The effects of ozone on the nucleus pulposus：pathological data on one surgical specimen[J].Riv Neuroradiol，2001，14（Suppll）：57-59.

[8]Alexandre A，Buric J.Intradiscal injection of 02-03 to treat lumbardisc herniations.Results`at five years.Rivista Ttalinanadi Ossigeno-Ozono therapia[J].2002，1（N2）：165-169.

[9]俞志坚，杨波，朱正兵，等.医用臭氧局部注射治疗梨状肌综合征[J].中国医师杂志，2004，6（8）：1103-1104.

[10]B.Moretti，R.Lanzisera，A.Morese.02-03VS Chondvoprotectors in the treatment of Osteoarthritis of the knee[J].Rivista diossigeno-Ozonoterapia，2004，3：65-72.

[11]E Genovese，M.Bonettim，A.Fontana.CT-Guided oxygen-ozone Infiltration into the Main Joints[J].Rivista Italiana diossigeno-Ozonoterapia，2004，3：121-130.