毛细管气相色谱法同时测定埃索美拉唑镁原料药中8种有机溶剂的残留量

郭 阳，冯 敏，陈玉洁[石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司，石家庄 050035]

埃索美拉唑镁（Esomeprazole Magnesium）商品名为耐信（Nexium），是奥美拉唑的（S）-型异构体，是全球首个治疗胃溃疡方面的手性质子泵抑制剂（PPI），通过特异性抑制胃壁细胞质子泵减少胃酸分泌[1]，其主要用于治疗胃食管反流病、幽门螺杆菌（Hp）阳性的消化性溃疡等疾病；其特点为口服后的首关效应少，生物利用度和血药浓度较奥美拉唑或其（R）-型异构体高。研究表明，埃索美拉唑镁疗效明显优于奥美拉唑、兰索拉唑、雷贝拉唑以及泮托拉唑等[2]。埃索美拉唑镁在合成工艺中使用了乙醇、乙酸乙酯、异丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷和乙腈等有机溶剂，为有效控制该原料药质量，保证用药安全，必须对上述有机溶剂残留量进行有效控制。鉴于此，笔者参考相关文献[3-5]，采用毛细管气相色谱法建立了同时测定埃索美拉唑镁原料药中上述8种有机溶剂残留量的方法，以期为该原料的质量控制提供依据。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 7890A型气相色谱仪，包括自动进样器、氢火焰离子化检测器、色谱工作站（美国Agilent公司）；XS105 DualRange型电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 药品与试剂

埃索美拉唑镁原料药[石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司，批号：20160101、20160102、20160103]；乙醇对照品（天津市光复科技发展有限公司，批号：20161110）、乙酸乙酯对照品（国药集团化学试剂有限公司，批号：20140929）、异丙苯对照品（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批号：G1530023）、甲醇对照品（ACS Chemicals Supply，批号：63Y1706TE）、甲苯对照品（天津市致远化学试剂有限公司，批号：20161019）、2-苯基-2-丙醇对照品[萨恩化学技术（上海）有限公司，批号：EA180093]、二氯甲烷对照品（天津市致远化学试剂有限公司，批号：20161110）、乙腈对照品（RCI Labscan Limited，批号：16010307），纯度均＞97%；二甲基亚砜为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HP-1（60 m×0.53 mm，5.00 μm）；升温程序：初始温度为40℃，保持6 min，以20℃/min升温至160℃，保持3 min，以20℃/min升温至210℃，保持5 min；进样口温度：220℃；检测器：氢火焰离子化检测器；检测器温度：250℃；载气：氮气；流速：4.0 mL/min；分流比：10∶1；进样量：1 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液 精密称取乙醇对照品500 mg、乙酸乙酯对照品500 mg、异丙苯对照品500 mg、甲醇对照品300 mg、甲苯对照品89 mg、2-苯基-2-丙醇对照品89 mg、二氯甲烷对照品60 mg、乙腈对照品41 mg，置于同一100 mL量瓶中，加二甲基亚砜定容，摇匀，即得混合对照品贮备液。精密量取上述混合对照品贮备液5 mL，置于50 mL量瓶中，加二甲基亚砜定容，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液 精密称取样品0.9 g，置于10 mL量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 空白对照溶液 取二甲基亚砜适量作为空白对照溶液。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1可知，在该色谱条件下，各成分均能达到基线分离，分离度＞1.5；理论板数以乙醇峰计为40 000，保留时间为7.5 min。结果表明，其他成分对测定无干扰。

图1 气相色谱图Fig 1 GC chromatograms

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下混合对照品贮备液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 mL，分别置于50 mL量瓶中，加二甲基亚砜定容，摇匀，即得系列混合对照品溶液。取上述系列混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测有机溶剂质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，回归方程与线性范围见表1。

表1 回归方程与线性范围Tab 1 Regression equations and linear ranges

2.5 定量限（LOQ）与检测限（LOD）考察

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，倍比稀释，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。当信噪比为10∶1时，得LOQ；当信噪比为3∶1时，得LOD。结果，乙醇、乙酸乙酯、异丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷、乙腈的LOQ分别为4.5、3.0、1.4、2.7、0.6、3.0、3.9、2.8 ng；LOD 分别为 2.2、1.0、0.4、1.4、0.3、1.0、2.0、1.4 ng。

2.6 精密度试验

精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液1µL，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，乙醇、乙酸乙酯、异丙苯、甲醇、甲苯、2-苯基-2-丙醇、二氯甲烷、乙腈峰面积的RSD分别为1.0%、1.0%、1.0%、1.0%、1.2%、1.0%、1.3%、1.4%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取样品（批号：20160101）适量，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算有机溶剂残留量。结果，只检出乙醇、甲醇、甲苯，其残留量的平均值分别为0.08%、0.06%、0.02%；RSD分别为1.8%、1.4%、1.5%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取样品（批号：20160101）适量，共9份，每份约0.9 g，分别置于10 mL量瓶中，各加入低、中、高质量的待测有机溶剂对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 2Results of recovery tests（n＝9）

续表2Continued tab 2

2.9 样品有机溶剂残留量测定

取3批样品各适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品有机溶剂残留量，结果见表3（表中“-”表示未检出）。

表3 样品有机溶剂残留量测定结果（n＝3，%）Tab 3 Results of residual organic solvents in samples（n＝3，%）

3 讨论

3.1 色谱柱的选择

笔者尝试使用DB-WAX色谱柱进行试验，结果乙醇与二氯甲烷不能有效分离，调整升温程序及载气流速分离效果均不佳；后选用HP-1色谱柱，结果乙醇与二氯甲烷分离度较好，且其他有机溶剂均分离适宜，因此选择HP-1为本试验的色谱柱。

3.2 氮气流速的选择

在方法优化过程中逐渐提升载气流速，结果显示，流速越高色谱峰越尖锐，灵敏度也越高，并且可缩短分析时间；但是流速过高，柱压增加，相邻溶剂峰分离度会变差，综合考虑，本试验选择氮气流速为4.0 mL/min。

3.3 进样口温度的选择

为了使样品更快更好地气化，综合考虑样品对热稳定的特性、溶剂二甲基亚砜的沸点（189℃）以及待测有机溶剂的沸点，最终本试验选择进样口温度为220℃。

3.4 稳定性试验

因供试品溶液浓度较高，溶剂二甲基亚砜熔点低于20℃，在低温环境下易结冰，因此供试品溶液宜现配现用，本文亦不做稳定性试验。

综上所述，本方法灵敏度好，操作简单，适用于埃索美拉唑镁原料药中8种有机溶剂残留量的同时测定。

[1]Koch TR，Petro A，Darrabie M，et al.Effects of esomeprazole magnesium on nonsteroidal anti-inflammatory drug gastropathy[J].Dig Dis Sci.，2005 ，50（1）：86-93.

[2]陈华，王晓蕙，金伟华.耐信[J].中国新药杂志，2003，12（6）：478-479.

[3]李淑丽，韦林洪，殷义平.埃索美拉唑钠残留溶剂苯的测定[J].化学研究与应用，2016，28（3）：366-369.

[4]冯光玲，丁文娟，冯爱国，等.毛细管气相色谱法测定阿莫曲坦原料药中8种有机溶剂残留量[J].中国药房，2014，25（5）：453-455.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：127-128.