HBV感染型原发性肝癌肿瘤微环境T淋巴细胞亚群的表达

欧阳观峰 邱磷安 詹建富 余雄辉欧阳观峰 邱磷安 詹建富 余雄辉

[摘要] 目的 分析HBV感染型原发性肝癌患者T淋巴细胞亚群在肿瘤微环境中的表达情况。 方法 方便收集医院2016年10月—2017年10月收治的HBV感染性原发性肝癌患者36例资料，纳入感染组，取同期收治的非HBV感染原发性肝癌患者纳入非感染组，对两组患者T淋巴细胞亚群表达在肿瘤微环境中的表达情况观察对比，并观察微血管密度MVD值情况。 结果 T淋巴细胞亚群表达情况，Treg与CD4等阳性率感染组均相对较高，CD8阳性率非感染组相对较高，组间对比差异有统计学意义（χ2=8.134，6.020， 27.023， P=0.004， 0.014， 0.000 <0.05）。肿瘤组织微环境内，感染组与非感染组MVD值分别为（66.50±9.00）、（57.80±7.50），组间对比差异有统计学意义（t=4.456，P=0.000<0.05）。 结论 T淋巴细胞亚群在HBV感染原发性肝癌患者中有较高的表达水平，且有较高的MVD值。

[关键词] 原发性肝癌；HBV感染；T淋巴细胞亚群；肿瘤微环境

[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）11（a）-0027-03

[Abstract] Objective To analyze the expression of T lymphocyte subsets in tumor microenvironment in patients with HBV-infected primary liver cancer. Methods Thirty-six patients with HBV-infected primary liver cancer admitted to the hospital from October 2016 to October 2017 were convenient enrolled in the infection group. Non-HBV-infected primary liver cancer patients admitted to the same period were included in the non-infected group. The expression of T lymphocyte subsets in the tumor microenvironment was observed and compared， and the microvascular density MVD values were observed. Results The expression of T lymphocyte subsets， Treg and CD4 were relatively high in the infection group， and the CD8 positive rate was relatively high in the non-infected group. There was a significant difference between the groups （χ2=8.134，6.020， 27.023， P=0.004， 0.014， 0.000 <0.05）. In the microenvironment of tumor tissue， the MVD values of the infected group and the non-infected group were （66.50±9.00） and （57.80±7.50）， respectively， and there was significant difference between the groups （t=4.456， P=0.000<0.05）. Conclusion T lymphocyte subsets have higher expression levels in patients with HBV-infected primary liver cancer and have higher MVD values.

[Key words] Primary liver cancer； HBV infection； T lymphocyte subsets； Tumor microenvironment

作為临床常见恶性肿瘤疾病，原发性肝癌病情变化较快，部分研究资料中均指出受患者自身免疫耐受影响，可能出现细胞浸润、细胞增殖以及细胞转移等情况，远期生存率较低[1]。特别部分患者存在HBV感染即乙型肝炎病毒感染情况，血清炎性因子水平更高。临床诊疗中，应注意对肿瘤微环境内T淋巴细胞表达情况观察，为临床治疗提供有效指导。该次研究将以2016年10月—2017年10月收治的HBV感染性原发性肝癌患者36例为对象，对比非HBV感染患者微血管密度、T淋巴细胞亚群表达情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便收集收治的HBV感染性原发性肝癌患者36例资料，患者年龄49～72岁，平均（61.6±5.5）岁，根据Edmondson分级[2]，Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级分别为2例、15例、19例，其中男性与女性各19例、17例。取同期收治的非HBV感染型原发性肝癌患者36例，患者年龄50～70岁，平均（61.7±5.0）岁，根据Edmondson分级，Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级分别为1例、14例、21例，其中男性与女性均为18例。入选标准：①患者均给予病理学诊断检查，确诊原发性肝癌；②患者无危重症情况或其他影响研究配合情况；③研究经伦理委员会批准，患者及其家属知情同意。一般资料组间数据结果对比差异无统计学意义（P>0.05），可进行对比分析。

1.2 方法

对所有患者病历资料做回顾性分析，通过对穿刺活检标本、根治切除标本的收集，在流式细胞仪应用下，做T淋巴细胞的检测，若检出结果提示有Treg（调节性T细胞CD4+25+）、CD8（CD8+T淋巴细胞）、CD4（CD4+T淋巴细胞），若检测结果提示有上述细胞表达，判断为阳性。另外，借助Weidner方法，对微血管密度MVD观察。

1.3 观察指标

对两组患者T淋巴细胞亚群在肿瘤环境中的表达情况观察，同时比较微血管密度值。

1.4 统计方法

经过SPSS 21.0统计学软件进行数据处理，计量资料用（x±s）表示，计数资料用[n（%）]表示，对比分别由t检验、χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者T淋巴细胞亚群表达在肿瘤微环境中的表现观察

T淋巴细胞亚群表达情况，Treg与CD4等阳性率感染组均相对较高，CD8阳性率非感染组相对较高，组间对比差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 患者MVD情况观察比较

肿瘤组织微环境内，感染组与非感染组MVD值分别为（66.50±9.00）、（57.80±7.50），组间对比差异有统计学意义（t=4.456、P=0.000<0.05）。

3 讨论

3.1 恶性肿瘤微环境

恶性肿瘤的研究越来越深入，其中肿瘤微环境成为研究热点。肿瘤微环境时指肿瘤的发生、生长、转移与肿瘤细胞所处的内外环境关系密切，包括肿瘤所在组织结构、功能代谢，全身以及局部代谢、分泌、结构、免疫与功能改变。HBV感染是原发性肝癌的重要危险因素之一，不同于其他酒精性脂肪肝等非感染原因所致原发性肝癌，患者在发生原发性肝癌之前，患者便可能因出现HBV感染出现免疫等肿瘤微环境因素改变，从而影响肿瘤的发生，在肿瘤发生之后，HBV感染仍然发生作用，从而影响肿瘤的生长、复发、转移。与此同时，原发性HBV相关的原发性肝癌还因肿瘤、长期肝硬化，常伴有贫血、腹水等表现，组织损伤加重，进一步导致肿瘤微环境改变[3-4]。

3.2 肝癌、HBV、T淋巴细胞水平关系

T淋巴细胞来源于骨髓多能干细胞，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞在胸腺激素的诱导下，会成为具有免疫活性的T细胞。陈幸福的T细胞会经淋巴管、外周血、组织液等进行再循环，发挥细胞免疫、免疫调节等功能，加强免疫应答，维持免疫记忆。T淋巴细胞具有抗癌作用，机体会对肿瘤细胞产生抵抗作用，T淋巴细胞能够反映肿瘤、免疫系统之间的相互作用。大量研究显示其在乳腺癌、卵巢癌等肿瘤以及外周血中都可见T淋巴细胞功能与数量异常，反映了肿瘤患者免疫功能变化，感染对象的CD4水平异常率再40%～60%之间，CD8显著下降在0%～10%之间，Treg异常率在30%～70%之间[5]。HBV感染通过激活免疫应答，影响T淋巴细胞水平，从而影响肿瘤发生、进展，肿瘤反过来会影响T淋巴细胞，反过来影响HBR感染的控制。T淋巴细胞反映了肿瘤、HBV、免疫细胞之间的关系。该次研究也证实这一点，感染HBV的对象Treg与CD4、CD8阳性率都与非感染组差异有统计学意义（P<0.05），感染对象CD4与阳性率50.00%、CD8异常率5.56%、Treg异常率44.44%，与前文报道的结果相近。

CD4细胞是一种重要的免疫细胞，主要表达于辅助T（Th）细胞，参与Th细胞TCR识别抗原的信号转导，是反应细胞。感染组对象CD4阳性率高于非感染组，提示免疫应答明显增强，这与HBV刺激CD4+T细胞有关。CD8+主要与免疫应答关系密切，可识别可溶性抗原、产生抑制因子等途径抑制免疫应答，感染组CD8+水平低于对照组（P<0.05），提示HBV感染会削弱免疫抑制作用，这可能会导致“肿瘤逃逸”，增加肿瘤增殖风险。T淋巴细胞亚群指标变化，提示HBV会影响原发肝癌患者免疫功能，进一步加重免疫功能紊乱，机体免疫监视功能降低，引起肝癌细胞发生免疫“逃逸”，出现疗效欠佳情况，提示HBV感染原发性肝癌出现疗效欠佳的风险可能更高。

3.3 微血管密度MVD

另外，该次研究中，感染组与非感染组MVD值分别为（66.50±9.00）、（57.80±7.50），组间对比差异有统计学意义（P<0.05）。之所以出现该情况，主要受新生血管影响。肿瘤转移或侵袭均以新生血管为基础，这些新生毛细血管具有较高的通透性，且管壁不完整，肿瘤细胞通过新生毛细血管更加容易，其他文献报道显示MVD存在显著的个体差异，水平在50%～80%之间，该组对象患者MVD处于较低水平，这可能与MVD不仅与感染有关，还与肿瘤分期、肿瘤大小等因素有关[7-8]。同时，毛细血管生成后，有较多基质降解酶包括纤溶酶原激活物、Ⅳ型胶原酶与内皮细胞产生，这些均会导致基质屏障被破坏，为肿瘤细胞的转移提供条件[9-10]。从该次研究结果中发现，在微血管密度值MVD值上观察比较，感染组相对较高，便能反映除原发性肝癌患者有HBV感染情况，新血管生成能力强，这可能与HBV感染相关的免疫功能紊乱有关。对于肿瘤转移情况，是否受肝癌血管生成影响，需在未来研究中进一步深入分析。

综上所述，T淋巴细胞亚群在HBV感染原发性肝癌患者中有较高的表达水平，且有较高的MVD值，之所以与非HBV感染型患者存在差異，很大程度受肿瘤血管生成、HBV异常增殖影响，应将这些诊断结果作为临床治疗的参考指导。

[参考文献]

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[2] 李婷，时代强.HBV感染型原发性肝癌肿瘤微环境T淋巴细胞亚群的表达[J].预防医学，2018，30（4）：387-388.

[3] 刘大勇，杨光华，鲁朝敏.经肝动脉化疗栓塞联合射频消融术和艾迪治疗原发性肝癌患者疗效及其对外周血T淋巴细胞亚群的影响[J].实用肝脏病杂志，2018，21（2）：261-264.

[4] 袁庆明.不同麻醉方法对肝癌切除术后患者肿瘤坏死因子-α、C反应蛋白以及T淋巴细胞亚群的影响[J].中华保健医学杂志，2017，19（6）：509-512.

[5] 李炜，柳仲秋，贺启华，等.益气解毒中药联合肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌疗效及对T淋巴细胞亚群、GP-73、GPC-3水平的影响[J].现代中西医结合杂志，2017，26（36）：4017-4020.

[6] 赵勇，魏国，胡礼冲，等.肝动脉化疗栓塞术对原发性肝癌合并HIV/AIDS患者T淋巴细胞亚群的影响[J].成都医学院学报，2017，12（6）：727-731，735.

[7] 侯传伟，郑黎明，赵雷，等.艾迪注射液联合5-氟尿嘧啶对原发性肝癌患者T淋巴细胞亚群的影响[J].实用癌症杂志，2017，32（11）：1851-1854.

[8] 徐献毅，任锋，陈德喜，等.沉默免疫负调控基因技术修饰的树突状细胞治疗原发性肝癌后T淋巴亚群分析[J].胃肠病学和肝病学杂志，2017，26（11）：1218-1221.

[9] 祝朝前，殷军.肝动脉化疗栓塞术联合重组人p53腺病毒动脉灌注治疗肝细胞癌临床观察[J].山东医药，2017，57（15）：57-59.

[10] 闫亚南，王宁，王卓昱，等.直接灸“肝俞”对原发性肝癌癌前病变大鼠T淋巴细胞亚群的影响[J].针刺研究，2016，41（4）：321-326.

（收稿日期：2018-08-09）