竹节参提取物对慢性酒精性肝损伤模型小鼠血清生化指标及炎症因子水平的影响

2018-01-17 10:58何志刚汪洋鹏楼招欢
浙江中西医结合杂志 2018年1期
关键词:灌胃酒精性造模

何志刚 汪洋鹏 刘 磊 楼招欢

竹节参为五加科人参属植物Panax jaonicus C.A.Mey的干燥根,为现行《中国药典》收载品种,含有皂苷、多糖等成分,具有散瘀止血,消肿止痛,祛痰止咳,补虚强壮等功效[1]。近年研究表明,竹节参醇提取物、多糖、总皂苷等具有抗酒精[2]、四氯化碳诱导的急性肝损伤和棕榈酸诱导的肝细胞脂肪变性[3-4]、乙醇介导的肝细胞LO2损伤[5]等作用,显示了良好的保肝作用。本实验观察竹节参水、醇提取物对慢性酒精性肝损伤模型动物血生化指标及炎症因子水平的干预作用,为进一步研究竹节参抗酒精性肝损伤作用及相关产品开发提供参考。

1 实验材料

1.1 动 物 雄性ICR小鼠40只,体质量18~20g,购自浙江省实验动物中心,动物质量合格证号:No.1610100014,许可证号:SCXK(浙)2014-0001。于室温23±2℃,相对湿度50%~70%饲养,自由饮食饮水。

1.2 药物与试剂 竹节参提取物制备:取竹节参饮片(四川时珍堂巴东药业有限公司,批号151103),加入10BV量70%(v/v)乙醇,回流提取2次,合并提取液,减压回收并浓缩至适当体积,分装,置冰箱内保存,得竹节参醇提取物(PJEE);以水为提取溶剂,同法制备竹节参水提取物(PJWE)。阳性对照药易善复(批号6BJD130B):将易善复胶囊溶于蒸馏水中,超声波乳化,配成2.05 mg/mL的乳剂。造模试剂:红星二锅头酒(酒精度52%,2.0L/瓶,北京红星股份有限公司)临用前与纯水按一定体积比例稀释至所需灌胃浓度。谷丙转氨酶(ALT,批号 16052001)、谷草转氨酶(AST,批号 16091901)、总胆固醇(TC,批号15100801)、甘油三酯(TG,批号 16030301)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C,批号16031401)试剂盒购自宁波美康生物科技股份有限公司;白介素-6(IL-6,批号 220661232)、白介素-1β (IL-1β,批号2201B61232)ELISA试剂盒购自联科生物技术有限公司。

1.3 仪 器 TBA-40FR全自动生化仪,日本东芝医疗系统株式会社;Powerwave340酶标仪,美国Bio-TEK公司;Heraeus Biofuge Stra冷冻离心机,德国Heraeus;XHF-D高速分散器,宁波新芝生物科技股份有限公司;wh-861涡悬混合器,太仓市科教器材厂;DS-671电子计重秤,上海寺冈电子有限公司。

2 实验方法

2.1 模型复制及给药 取ICR小鼠,按体质量随机分为正常组、模型组、易善复组(205.2mg/kg)、竹节参醇提取物(PJEE,1.35g/kg)组、竹节参水提取物(PJWE,1.35g/kg)组,每组8只。所有小鼠均给予基础饲料,自由采食饮水。除正常组外,其余各组小鼠采用梯度乙醇灌胃法复制酒精性肝损伤(ALI)小鼠模型。参照文献[6]并结合预试,各造模小鼠于每天上午8:00按0.1mL/10g体质量灌胃量,灌胃给予梯度浓度红星二锅头,浓度从30%开始,按每5天5%递增至45%后,再连续灌胃4周复制慢性酒精性肝损伤模型。自造模第1天起,除正常对照组和模型对照组灌服蒸馏水外,其余各给药组按0.1mL/10g体质量灌胃量分别灌胃给予20.5mg/mL易善复、0.135g/mL竹节参水提取物和0.135g/mL竹节参醇提取物,1天1次,连续6周。

2.2 指标检测 (1)一般行为学观察:每天观察毛发、活动情况、饮食饮水,每3天测定一次体质量,观察体质量变化情况。(2)血液生化学指标及氧化指标的影响:于造模2、4、6周,采血,离心制备血清,全自动生化仪测定血清 ALT、AST、TC、TG、HDL-C 水平。(3)血清炎症因子水平检测:于造模4、6周,眼眶采血,3500r/min离心10min,分离血清,ELISA法测定血清 IL-1β、IL-6水平。(4)肝脏器指数检查:于实验期末,采血后解剖小鼠,迅速分离肝脏,冰生理盐水洗尽血渍,滤纸吸干,称定肝脏质量,计算肝脏指数[7]。

2.3 统计学方法 应用SPSS16.0软件进行统计分析。计量资料以用(±s) 表示,两组间比较采用独立样本t检验,P<0.05代表差异有统计学意义。

3 结 果

3.1各组小鼠体质量及肝脏指数比较 与正常组比较,模型组小鼠体质量呈逐渐下降趋势,其中第4、6周差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,竹节参各提取物组小鼠体质量有上升趋势,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组小鼠肝脏指数显著增大(P<0.05);与模型组比,竹节参水、醇提取物组小鼠肝脏指数差异无统计学意义(P>0.05)。见图 1。

3.2 各组小鼠肝功能指标比较 与正常组比较,自第2周起,模型组小鼠血清ALT、AST活性随着造模时间的延长而显著增加(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,自造模第4周起,竹节参水、醇提取物组均能有效降低模型小鼠血清ALT、AST活性,其中以竹节参醇提取物组的作用较为显著(P<0.05)。见图2。

3.3 各组小鼠血脂水平比较 与正常组比较,模型组小鼠血清TC、HDL-C水平随着造模时间的延长而呈逐渐降低趋势(P<0.05);TG水平在第2周有上升趋势,但在造模后期呈下降趋势。与模型组比较,竹节参醇提取物组在第2周能显著降低模型小鼠血清TG水平(P<0.05),第6周能逆转模型小鼠血清TC、TG及HDL-C水平的降低(P<0.05)。见图3。

3.4 各组小鼠血清炎症因子水平比较 与正常组比较,在造模第4、6周,模型组小鼠血清IL-6、IL-1β水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,在不同观察点,竹节参水、醇提取物均能显著降低ALI小鼠血清 IL-6、IL-1β 水平(P<0.01),其中,在第 4周以水提取物作用相对显著,在第6周以醇提取物的作用较为明显。见图4。

图1 各组小鼠体质量(A)及肝脏指数(B)比较

图2 各组小鼠肝功能指标比较

图3 各组小鼠血脂水平比较

4 讨 论

已知酒精性肝损伤中存在脂代谢紊乱和转氨酶活性改变,血清ALT、AST活性及TG、HDL-C水平是急、慢性酒精性肝损伤的敏感观察指标[8-9]。血清ALT等指标动态监测有助于了解慢性酒精性肝损伤发生发展过程及病变程度,为合适的药物干预点的确定提供借鉴。本实验中,模型组小鼠血清ALT、AST活性在造模2、4、6周均显著高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),而竹节参醇提取物组在给药第4、6周显示出显著的降ALT和AST作用(P<0.05);竹节参水提取物降ALT、AST活性的作用不如醇提取物显著。造模第2周模型小鼠血清TC、HDL-C水平下降,至第4周呈上升趋势,第6周则又显著性下降;血清TG水平呈现先升后降变化。与模型组比,在各观察时间点,竹节参醇提取物组在第2周能显著降低ALI小鼠血清TG水平(P<0.05),且在给药第6周均显示了拮抗 TC、HDL-C 水平下降作用(P<0.05),提示竹节参对酒精性肝损伤后期具有调节脂质代谢紊乱的作用。

图4 竹节参提取物对酒精性肝损伤模型小鼠血清炎症因子水平的影响。

过量酒精摄入产生的肠源性内毒素可活化核因子κB(NF-κB)炎症信号通路,诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β、IL-6等炎症介质产生,促进酒精性肝损伤的发生和进展[10-11]。本实验中,造模第4周起,模型小鼠血清IL-1β、IL-6的水平显著升高,并持续至第6周(P<0.01);与模型组比,竹节参水、醇提取物组在4周、6周均能显著降低模型小鼠血清IL-1β、IL-6水平(P<0.01,P<0.05),其中在第 4周以竹节参水提取物的作用较为显著,第6周以竹节参醇提取物的抗炎作用较为明显。

综上所述,竹节参水、醇提取物均有一定的抗慢性酒精性肝损伤作用,但两者作用侧重点及作用时间和强度间存在一定的差异。系统深入的成分结合药效研究,将有助于进一步阐述竹节参抗酒精性肝损伤的作用及其药效物质,促进相关产品的开发。

[1]中国药典委员会.中华人民共和国药典2015版[S].中国医药科技出版社,北京,2015:138.

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